本文關(guān)鍵詞：細胞表面GRP78與CRAF作用增加肝癌細胞對索拉非尼耐藥性的研究

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【摘要】：目的探討細胞表面GRP78和CRAF相互作用情況,確定GRP78和CRAF在肝癌細胞對索拉非尼耐藥性形成中的作用及機制,根據(jù)腫瘤細胞表面GRP78和CRAF表達的不同,采取差異性的治療方案,為肝細胞癌的個性化治療提供選擇方案的潛在標(biāo)志物。方法選擇對索拉非尼敏感的人肝癌細胞系Hep G2為研究對象,進行下列研究:1.建立獲得性耐藥的細胞模型,在細胞水平對耐藥性細胞系進行鑒定。顯微鏡下觀察比較Hep G2和HepG2-SR兩種細胞的形態(tài)差異;通過體外侵襲實驗檢測HepG2-SR細胞的侵襲能力。用不同濃度的索拉非尼(0,1,5,10μΜ)的處理HepG2-SR細胞,應(yīng)用MTT和克隆形成實驗檢測其對索拉非尼的反應(yīng)性;流式細胞術(shù)檢測索拉非尼對HepG2-SR細胞凋亡的影響;免疫印跡檢測HepG2-SR細胞中CRAF的表達。2.GRP78和CRAF在肝細胞癌索拉非尼耐藥性形成中的作用。檢測HepG2-SR細胞中GRP78和CRAF的表達水平,在HepG2-SR細胞中用sh RNA分別下調(diào)GRP78和CRAF,通過MTT法檢測索拉非尼對HepG2-SR細胞體外增殖的影響;體外克隆形成實驗檢測索拉非尼對HepG2-SR細胞克隆形成能力的影響。3.證實HepG2-SR細胞表面GRP78和CRAF之間存在相互作用。通過在HepG2-SR細胞中共轉(zhuǎn)入p EGFP-N1-GRP78、p Ds Red-CRAF兩種質(zhì)粒,共聚焦顯微鏡技術(shù)證實GRP78和CRAF在細胞中存在共定位;分離并提取HepG2-SR細胞膜蛋白,用GST-pulldown實驗檢測HepG2-SR細胞膜提取物中GRP78和CRAF在體外存在直接相互作用;免疫共沉淀實驗檢測GRP78和CRAF在細胞內(nèi)存在相互作用。結(jié)果1.HepG2-SR細胞為索拉非尼耐藥細胞,可用于后續(xù)實驗。體外侵襲實驗結(jié)果顯示,HepG2-SR細胞的侵襲性更強。用索拉非尼(0,1,5,10μΜ)處理Hep G2和HepG2-SR,克隆形成實驗結(jié)果顯示,HepG2-SR細胞的克隆形成能力高于其對應(yīng)的肝癌細胞Hep G2;MTT實驗結(jié)果顯示,HepG2-SR細胞的體外增殖能力強于Hep G2;流式細胞術(shù)結(jié)果顯示,HepG2-SR抵抗凋亡的能力比Hep G2強;免疫印跡結(jié)果顯示,在一定的濃度范圍內(nèi),Hep G2細胞中CRAF的表達與索拉非尼的作用濃度呈負相關(guān),而HepG2-SR細胞中CRAF的表達沒有變化。2.GRP78和CRAF的高表達均能增加肝癌細胞對索拉非尼的耐藥性。Western實驗結(jié)果顯示,HepG2-SR細胞中GRP78和CRAF均高表達。用sh RNA的方法分別下調(diào)HepG2-SR細胞中GRP78和CRAF,再用索拉非尼(0,1,5,10μΜ)的處理,MTT實驗結(jié)果顯示,HepG2-SR細胞的克隆形成能力與對照組比較明顯減弱;用5μΜ索拉非尼處理,克隆形成實驗結(jié)果顯示,HepG2-SR的克隆形成能力與對照組比較明顯減弱。3.HepG2-SR細胞表面GRP78和CRAF存在相互作用。HepG2-SR細胞中共轉(zhuǎn)入p EGFP-N1-GRP78、p Ds Red-CRAF兩種質(zhì)粒,共聚焦顯微鏡下觀察,GRP78和CRAF共表達于HepG2-SR細胞表面和胞漿中,且細胞表面明顯多于胞漿。GST-pulldown實驗結(jié)果顯示,GRP78和CRAF體外存在直接作用。免疫共沉淀實驗結(jié)果顯示,GRP78和CRAF在細胞內(nèi)存在相互作用。結(jié)論1.GRP78和CRAF的高表達均能促進肝癌細胞對索拉非尼的耐藥。2.HepG2-SR細胞表面GRP78和CRAF存在相互作用。
【關(guān)鍵詞】：GRP78 肝癌細胞 CRAF 索拉非尼 耐藥
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-11
• 實驗材料和方法11-18
• 實驗結(jié)果18-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28-29
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價29-30
• 參考文獻30-34
• 附錄34-47
• 一、文獻綜述 GRP78在腫瘤中的研究進展34-44
• 參考文獻39-44
• 二、在學(xué)期間科研成績44-45
• 三、致謝45-46
• 四、個人簡介46-47

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1 丁麗;程剛;;多靶點抗腫瘤新藥索拉非尼的藥理作用及臨床研究進展[J];藥物不良反應(yīng)雜志;2007年03期

2 張小麗;王鴻;;索拉非尼及其抗腫瘤作用[J];安徽醫(yī)藥;2008年03期

3 崔瑤;羅榮城;李愛民;崔斐;;索拉非尼聯(lián)合肝素抑制血管生成的研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2008年05期

4 逯華;陳日新;;多激酶抑制藥索拉非尼的研究進展[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年04期

5 孫敏;魏紅濤;蔡進;吉民;;索拉非尼的合成[J];中國藥學(xué)雜志;2009年05期

6 郭玉峰;;索拉非尼的最近研究概況[J];中國醫(yī)療前沿;2009年05期

7 陳金麟;李鐵;張沂平;;索拉非尼臨床研究進展[J];腫瘤學(xué)雜志;2009年08期

8 葉麗芬;張春紅;;口服甲苯磺酸索拉非尼患者的觀察及護理[J];臨床合理用藥雜志;2009年22期

9 劉健穎;唐偉方;陸濤;;索拉非尼研究進展[J];海峽藥學(xué);2010年04期

10 劉韜;林子超;陳倩超;魏雪;黃偉強;黃紅兵;;索拉非尼藥物不良反應(yīng)臨床特征分析與防治[J];今日藥學(xué);2010年09期

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1 鄧覲云;陳悅;;索拉非尼最新研究進展[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 劉韜;林子超;陳倩超;魏雪;黃偉強;黃紅兵;;索拉非尼藥物不良反應(yīng)臨床特征分析與防治[A];2010年廣東省藥師周大會論文集[C];2011年

3 王哲;張陽;吳濤;;索拉非尼聯(lián)合伊立替康對人肝癌細胞株HepG2抑制作用的時序性依賴機制探索與研究[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集[C];2009年

4 李珍;;索拉非尼治療肝癌不良反應(yīng)的觀察及護理[A];中華護理學(xué)會全國腫瘤護理新進展研討會論文匯編[C];2012年

5 莊莉;俞軍;吳健;張珉;沈恬;蔣國平;郭華;鄭樹森;;肝癌肝移植術(shù)后預(yù)防性服用索拉非尼有效改善受者生存[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

6 李珍;劉紅麗;張寧;;索拉非尼治療肝癌不良反應(yīng)的觀察及護理[A];2012年“河南省腫瘤�？谱o士職業(yè)安全防護及新技術(shù)交流”學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

7 鄭家平;邵國良;羅君;陳玉堂;姚征;曾暉;郝偉遠;;索拉非尼治療中晚期肝細胞癌安全性和生存因素分析[A];2013年浙江省放射學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

8 劉淼;;索拉非尼常見不良反應(yīng)及對策[A];中國成人醫(yī)藥教育論壇（2009）[C];2009年

9 趙振宇;戈偉;;索拉非尼靶向治療非小細胞肺癌研究進展[A];第二屆湖北省腫瘤靶向治療學(xué)術(shù)會議論文選[C];2007年

10 成炳祥;方煊;朱承良;婁s，

本文編號：538661