本文關(guān)鍵詞：MiR-346對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響及其可能機(jī)制的探討

  更多相關(guān)文章： miR-346 前列腺癌 TGFβ/smad信號(hào)通路 轉(zhuǎn)移 遷移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

【摘要】：目的:控制前列腺癌細(xì)胞中miR-346的表達(dá),研究促進(jìn)及抑制miR-346的表達(dá)對(duì)去勢(shì)抵抗型人前列腺癌DU-145、PC-3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移及侵襲能力的影響,初步探討干擾miR-346表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞上皮及間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)變化的影響并探討其可能的作用機(jī)制。方法:以去勢(shì)抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3細(xì)胞株為研究對(duì)象,分別轉(zhuǎn)染人工合成的miR-346的模擬物(miR-346 mimics)及反義體(inhibitor miR-346),在細(xì)胞中過表達(dá)或沉默miR-346,劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)研究改變miR-346表達(dá)后DU145、PC-3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移及侵襲能力的改變,并使用Western blot法在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)陽性的DU-145細(xì)胞中檢測miR-346表達(dá)改變后上皮標(biāo)志物E-cadherin以及間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin的蛋白表達(dá)變化。mi R-346可以調(diào)控TGFβ/smad信號(hào)通路里SMAD3、SMAD4的表達(dá),采取Q-PCR法及Western blot法分別在mRNA及蛋白水平檢測SMAD3、SMAD4在過表達(dá)或沉默mi R-346后的表達(dá)變化。結(jié)果:劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:miR-346 mimics組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力明顯增強(qiáng),inhibitor mi R-346組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力顯著降低。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:DU145細(xì)胞NC組從上室遷移過膜的細(xì)胞數(shù)為57±5.7個(gè),miR-346 mimics組192±18.5個(gè),inhibitor NC組53±4.3個(gè),inhibitor miR-346組16±1.3個(gè);PC-3細(xì)胞NC組從上室遷移過膜的細(xì)胞數(shù)為29±2.7個(gè),miR-346 mimics組90±8.5個(gè),inhibitor NC組34±3.0個(gè),inhibitor mi R-346組12±0.9個(gè)。在DU145和PC-3細(xì)胞中miR-346 mimics組與NC組相比,細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng),inhibitor mi R-346組與inhibitor NC相比,細(xì)胞遷移能力顯著減弱,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)顯示:DU145細(xì)胞NC組從上室侵襲過膜的細(xì)胞數(shù)為38±3.7個(gè),miR-346 mimics組98±8.5個(gè),inhibitor NC組37±3.3個(gè),inhibitor mi R-346組7±0.5個(gè);PC-3細(xì)胞NC組從上室侵襲過膜的細(xì)胞數(shù)為33±2.8個(gè),miR-346 mimics組90±8.2個(gè),inhibitor NC組35±3.1個(gè),inhibitor miR-346組2±0.1個(gè)。在DU145和PC-3細(xì)胞中miR-346 mimics組與NC組相比,細(xì)胞侵襲能力明顯增強(qiáng),inhibitor miR-346組與inhibitor NC相比,細(xì)胞侵襲能力顯著減弱,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)EMT陽性的DU145細(xì)胞株進(jìn)一步研究,Western blot結(jié)果顯示,miR-346 mimics組上皮標(biāo)志物E-cadherin的蛋白表達(dá)降低;間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin的蛋白表達(dá)升高,inhibitor miR-346組上皮標(biāo)志物E-cadherin的蛋白表達(dá)增高;間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin的蛋白表達(dá)降低。對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)一步研究,Q-PCR和Western blot結(jié)果顯示miR-346mimics組SMAD3、SMAD4的mRNA及蛋白表達(dá)降低,inhibitor miR-346組SMAD3、SMAD4的mRNA及蛋白表達(dá)升高。結(jié)論:去勢(shì)抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、遷移及侵襲的能力與細(xì)胞中miR-346表達(dá)水平高度相關(guān);上皮標(biāo)記物E-cadherin的蛋白表達(dá)與miR-346的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin的蛋白表達(dá)與miR-346的表達(dá)呈正相關(guān),即mi R-346促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力;mi R-346抑制smad3及smad4的表達(dá),可能借此調(diào)控TGFβ/smad信號(hào)通路,影響前列腺癌細(xì)胞EMT的發(fā)生,進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌的發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：miR-346 前列腺癌 TGFβ/smad信號(hào)通路 轉(zhuǎn)移 遷移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-13
• 參考文獻(xiàn)10-13
• 第一部分 miR-346對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響13-29
• 1.材料與方法13-21
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-24
• 3.討論24-25
• 4.結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 第二部分 miR-346靶向作用與SMAD3、SMAD4基因并調(diào)控其表達(dá)29-38
• 1.材料與方法29-31
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 3.討論33-34
• 4.結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 全文小結(jié)38-39
• 綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 中英文對(duì)照縮略詞表48-49
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文49-50
• 致謝50-51

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