本文關(guān)鍵詞：二氯乙酸聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116凋亡及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的:探討二氯乙酸(dichloroacetate,DCA)聯(lián)合順鉑對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116凋亡的影響及其可能的分子機(jī)制。方法:DCA單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用順鉑處理HCT116細(xì)胞后以MTT法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率,Hoechst33342染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài);用陽離子親脂性熒光染料Rhomine123染色細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察線粒體跨膜電位變化(Δψm);用分光光度法檢測(cè)半胱氨酸天門冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的活性;Real-Time PCR檢測(cè)基因bcl-2的表達(dá)情況;運(yùn)用Western Blot檢測(cè)Bcl-2、Cytochrome c和Caspase-3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:DCA、順鉑單獨(dú)使用對(duì)HCT116細(xì)胞增殖均有抑制作用且呈時(shí)間—?jiǎng)┝恳蕾囆�。與同濃度單藥相比,10mmol/L DCA聯(lián)合20μg/ml順鉑(CDI=0.434±0.021)處理細(xì)胞48hrs后呈現(xiàn)出明顯的協(xié)同效應(yīng)。單獨(dú)使用DCA或順鉑均能在熒光顯微鏡下觀察到細(xì)胞核濃聚或碎裂、線粒體跨膜電位降低,但兩藥聯(lián)合效果明顯強(qiáng)于單藥。檢測(cè)Caspase-3活性發(fā)現(xiàn),聯(lián)合用藥組明顯高于單藥組(P0.01);定量PCR(Real-Time PCR)結(jié)果顯示,藥物處理12hrs后,聯(lián)合用藥組bcl-2表達(dá)明顯下調(diào),與單獨(dú)用藥組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,單獨(dú)及聯(lián)合用藥組cleaved-caspase-3和Cytochrome c表達(dá)明顯上調(diào),Bcl-2的表達(dá)明顯下調(diào),單藥組上調(diào)或下調(diào)程度明顯低于聯(lián)合用藥組。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)DCA及順鉑對(duì)人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞均有增殖抑制和促凋亡的作用,隨著藥物濃度增加、作用時(shí)間的延長其作用也增加。DCA和順鉑聯(lián)合作用對(duì)人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞增殖抑制和促凋亡作用具有協(xié)同性,其機(jī)制可能是通過多個(gè)作用機(jī)制包括導(dǎo)致線粒體跨膜電位降低、Bcl-2的表達(dá)下調(diào)、Caspase-3激活及與Cytochrome c釋放增加有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：二氯乙酸 順鉑 協(xié)同效應(yīng) 凋亡 結(jié)腸癌
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略語表10-11
• 前言11-22
• 第一部分 DCA聯(lián)合順鉑對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及凋亡影響22-35
• 材料與方法22-29
• 結(jié)果29-32
• 討論32-35
• 第二部分 DCA聯(lián)合順鉑致結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究35-58
• 第一節(jié) 結(jié)腸癌細(xì)胞線粒體膜電位變化及Caspase-3 蛋白活化35-43
• 材料與方法35-39
• 結(jié)果39-40
• 討論40-43
• 第二節(jié) DCA聯(lián)合順鉑致結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究43-58
• 材料與方法43-53
• 結(jié)果53-56
• 討論56-58
• 全文小結(jié)58-61
• 參考文獻(xiàn)61-69
• 致謝69-70
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;T-2 toxin-induced apoptosis involving Fas,p53,Bcl-xL,Bcl-2,Bax and caspase-3 signaling pathways in human chondrocytes[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2008年06期

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本文編號(hào)：523087