本文關(guān)鍵詞：一組細(xì)胞因子總量檢測方法的探討及其肝癌血清檢測的初步應(yīng)用研究

  更多相關(guān)文章： 肝癌 細(xì)胞因子 診斷 預(yù)后

【摘要】：研究背景目前已報道的原發(fā)性肝癌(primary liver cancer,PLC,以下簡稱肝癌)相關(guān)標(biāo)志物很多,細(xì)胞因子(cytokines,CKs)就是其中一大類。細(xì)胞因子是由機體多種細(xì)胞分泌的小分子蛋白質(zhì),通常通過結(jié)合細(xì)胞表面的相應(yīng)受體發(fā)揮生物學(xué)作用。研究表明,肝癌細(xì)胞高表達(dá)眾多細(xì)胞因子,包括堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factors,bFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、中期因子(midkine,MK)、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(platelet-derived endothelial cell growth factor,PD-ECGF)等,其在肝癌患者血清中也明顯升高,并且可能與肝內(nèi)侵襲、轉(zhuǎn)移、血行播散和預(yù)后不良有關(guān),被認(rèn)為可作為潛在靶分子用于肝癌診斷及治療。其中bFGF、VEGF、HGF、MK和OPN同屬于肝素結(jié)合性細(xì)胞因子。已知一種腫瘤可分泌多種腫瘤標(biāo)志物,不同的腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型可有某種相同的腫瘤標(biāo)志物,而且在不同的腫瘤患者體內(nèi),腫瘤標(biāo)志物的質(zhì)和量變化也較大。顯然,單獨檢測一種腫瘤標(biāo)志物,可能會由于測定方法的靈敏度不夠而出現(xiàn)假陰性,聯(lián)合檢測多種可以互補的腫瘤標(biāo)志物則能夠提高檢出的陽性率。多指標(biāo)聯(lián)合檢測一般分為系列診斷實驗(串聯(lián))和平行診斷實驗(并聯(lián))。串聯(lián)時因多個指標(biāo)同時陽性才支持診斷,因此在提高特異性的同時,降低了敏感性;并聯(lián)時只需一個指標(biāo)陽性即可支持診斷,因此在提高敏感性的同時,降低了特異性。因此,多個指標(biāo)聯(lián)合檢測(串聯(lián)或并聯(lián))不可能同時提升敏感性和特異性,也無法使用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve,簡稱ROC曲線)分析。鑒于這些情況,我們考慮,如果把幾個合適的指標(biāo)(都可能具有診斷價值且含量相近)集合成一個指標(biāo)進(jìn)行檢測,由于減少了檢測指標(biāo)的數(shù)目,并提高了測定閾,可能不僅能夠大大方便工作與分析,而且能夠同時顯著改善檢測的敏感性和特異性。研究目的在課題組前期實驗的基礎(chǔ)上,建立可檢測一組靶細(xì)胞因子總量的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法,并進(jìn)行詳細(xì)的方法學(xué)考察及初步的臨床應(yīng)用研究,以期發(fā)展出一種優(yōu)于聯(lián)合檢測的新的實驗技術(shù)。其工作原理甚至可以直接被移植到其他實驗設(shè)計,形成一個新的檢測技術(shù)發(fā)展方向。采用建立的方法對肝癌、多種類型腫瘤、肝硬化、其他良性肝病等不同疾病患者及健康志愿者血清樣本進(jìn)行檢測,包括檢測部分患者術(shù)后第1天、第3天和第5天血清樣本,分析其變化情況,為后續(xù)進(jìn)一步臨床分析、評價其在肝癌診斷及預(yù)后預(yù)測中的應(yīng)用價值打下基礎(chǔ)。方法1、采用抗體-肝素雙夾心法檢測一組肝素結(jié)合性細(xì)胞因子群總量,探討其可行性。(1)采用酶聯(lián)免疫法(雙抗體夾心法)繪制5種肝素結(jié)合性細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)曲線,并檢測、分析患者血清中的相應(yīng)含量。(2)采用酶聯(lián)免疫法(肝素-抗體雙夾心法)繪制5種肝素結(jié)合性細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)曲線,并檢測、分析患者血清中的相應(yīng)含量。(3)采用石墨電極板載量的電化學(xué)發(fā)光免疫法(肝素-抗體雙夾心法)檢測標(biāo)準(zhǔn)品及血清中5種肝素結(jié)合性細(xì)胞因子總量。2、在肝素結(jié)合性細(xì)胞因子檢測基礎(chǔ)上引入pdgf、pd-ecgf兩種細(xì)胞因子,篩選、確定幾個合適的靶因子進(jìn)行組合,采用電化學(xué)發(fā)光免疫法(雙抗體夾心法)檢測大樣本量的組合靶因子總量,比較其與afp在肝癌診斷特異性和敏感性方面的差異,并檢測部分患者術(shù)后第1天,第3天和第5天的血清樣本,觀察其變化情況。結(jié)果1、標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果表明,針對7種細(xì)胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk、opn、pdgf、pd-ecgf)的抗體對以及細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品的工作性能良好(其標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r均大于0.99)。2、7種細(xì)胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk、opn、pdgf、pd-ecgf)的抗體對用于檢測肝癌、肝硬化、良性肝病、其他類型腫瘤及健康者血清的工作性能良好,絕大多數(shù)樣本檢測值都能落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍內(nèi)。3、采用抗體-肝素雙夾心elisa法檢測單個肝素結(jié)合性細(xì)胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk、opn)時,結(jié)果普遍偏低。原因可能是肝素與細(xì)胞因子結(jié)合的特異性差于抗體與抗原結(jié)合,肝素結(jié)合位點有限等。4、采用抗體-肝素雙夾心elisa法檢測一組肝素結(jié)合性細(xì)胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk)時,當(dāng)肝素濃度為10μg/ml時,混合檢測所得值與單個檢測之和相近;當(dāng)肝素濃度10μg/ml時,標(biāo)準(zhǔn)對照中od值升高不明顯,但血清樣本od值仍不斷升高,甚至部分樣本計算所得濃度超過雙抗體夾心法所得濃度,可能原因是肝素捕獲了某些未被洗滌的非目標(biāo)肝素結(jié)合分子而導(dǎo)致的非特異染色。5、采用電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測HGF、MK、PDGF等3種因子總量時,3種因子組合總量或者單獨檢測每一因子后數(shù)值相加所得總量都呈現(xiàn)直線相關(guān),無論濃度與信號都能一一對應(yīng),說明對應(yīng)96孔石墨電極板載量完全能夠滿足3種抗體混合包被,并且證實混合抗體檢測多因子總量的可行性。6、采用電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測部分臨床樣本的結(jié)果顯示,肝癌組與肝血管瘤或肝內(nèi)膽管結(jié)石等良性肝病組及正常人之間HGF、MK、PDGF等3種因子總量具有顯著差異(P0.05),但是肝癌組與其他類型腫瘤組之間無顯著差異(P0.05)。7、對比分析97例良惡性肝病患者(72例肝癌患者和25例良性肝病患者)血清中HGF、MK、PDGF等3種因子總量與AFP在特異性和敏感性方面的差異結(jié)果顯示,血清中3種因子總量檢測有助于肝癌診斷(ROC曲線下面積分別為0.8)。8、分析97例良惡性肝病患者(72例肝癌患者和25例良性肝病患者)手術(shù)前后血清中HGF、MK、PDGF等3種因子總量結(jié)果顯示,術(shù)后第1天,第3天和第5天,肝癌患者血清3種因子總量持續(xù)下降,良性肝病患者術(shù)后血清中3種因子總量下降則不明顯。這為我們后續(xù)進(jìn)一步探討一組靶細(xì)胞因子總量為一個檢測指標(biāo)在肝癌診斷及預(yù)后預(yù)測中的應(yīng)用研究打下了基礎(chǔ)。結(jié)論建立的電化學(xué)發(fā)光免疫法用于檢測HGF、MK、PDGF等3種細(xì)胞因子總量簡單實用,有用于肝癌輔助診斷、療效監(jiān)測及預(yù)后判斷的潛能。3種靶分子在多種類型腫瘤患者血清中也有升高,可能兼具多種類型腫瘤的臨床應(yīng)用潛能,有待進(jìn)一步進(jìn)行雙盲驗證、規(guī)�；炞C以及術(shù)后長期隨訪對比分析。由于3種目標(biāo)分子沒有統(tǒng)一的參考物質(zhì)和參考檢測方法,以及各生產(chǎn)商使用的標(biāo)準(zhǔn)品及抗體組成存在差異,檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化是一技術(shù)挑戰(zhàn),可能會限制臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用的進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 細(xì)胞因子 診斷 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 序言12-16
• 第一部分 基于肝素捕獲的肝素結(jié)合性細(xì)胞因子群總量檢測的可行性研究16-34
• 一、材料與方法16-21
• 二、實驗結(jié)果21-30
• 三、討論30-34
• 第二部分 基于抗體捕獲的一組細(xì)胞因子總量檢測的可行性和初步臨床應(yīng)用研究34-50
• 一、材料與方法34-36
• 二、實驗結(jié)果36-46
• 三、討論46-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 文獻(xiàn)綜述一56-65
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 文獻(xiàn)綜述二65-73
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 中英文縮略詞表73-75
• 在讀期間參加科研工作和發(fā)表論文情況75-76
• 致謝76-78

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1 羅曉丹;劉啟發(fā);;細(xì)胞因子與慢性移植物抗宿主病關(guān)系研究[J];中國實用內(nèi)科雜志;2007年03期

2 李曉紅;盛光耀;;兒童特發(fā)性血小板減少性紫癜多項細(xì)胞因子測定價值研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年15期

3 曹雪濤;第二屆國際細(xì)胞因子會議評介[J];中國免疫學(xué)雜志;1990年03期

4 曹雪濤,葉天星,杜平;細(xì)胞因子和細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1990年05期

5 曹雪濤,葉天星,杜平;細(xì)胞因子和細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的臨床研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1990年05期

6 史久華;細(xì)胞因子與疾病[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1993年05期

7 劉衛(wèi)京,呂秋軍;細(xì)胞因子小分子模擬物研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報;2000年11期

8 孟憲鈞;外科感染和細(xì)胞因子[J];中國實用外科雜志;2000年12期

9 ;《細(xì)胞因子研究方法學(xué)》工具書出版[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2000年03期

10 趙武述;細(xì)胞因子研究的臨床意義及展望[J];中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2000年04期

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1 王志國;陳波;肖亮;張顥;展昭民;張伯龍;馬軍;;細(xì)胞因子在急性移植物抗宿主病中的臨床研究[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

2 竇永喜;景志忠;候俊琳;駱學(xué)農(nóng);才學(xué)鵬;;細(xì)胞因子及其應(yīng)用研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

3 竇永喜;景志忠;候俊琳;駱學(xué)農(nóng);才學(xué)鵬;;細(xì)胞因子及其應(yīng)用研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

4 竇永喜;景志忠;候俊琳;駱學(xué)農(nóng);才學(xué)鵬;;細(xì)胞因子及其應(yīng)用研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

5 張鳳蘊;呂雪瑩;于偉玲;王麗群;王琳;李殿俊;;實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎幾種細(xì)胞因子的檢測[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

6 鄒崢;張淑華;柯江維;;小兒幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子產(chǎn)生及干預(yù)的研究[A];全國自身免疫性疾病專題研討會暨第十一次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 鄒崢;張淑華;柯江維;;小兒幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子產(chǎn)生及干預(yù)的研究[A];全國自身免疫性疾病專題研討會暨第十一次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

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9 萬遂如;;細(xì)胞因子與細(xì)胞因子療法[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

10 劉占國;袁小彭;羅宇維;何懿;孫爾維;;通過細(xì)胞因子譜評估免疫抑制劑對人免疫狀態(tài)的作用[A];全國臨床免疫檢驗研討會暨第六屆全國臨床免疫學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

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1 仇逸;口服細(xì)胞因子治療腫瘤將獲突破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2009年

2 通訊員 何育萍 記者 王玉華;我省細(xì)胞因子研究獲重大突破[N];湖北日報;2001年

3 徐州市第一人民醫(yī)院血液科 張魯勤;白介素18等細(xì)胞因子在非惡性血液病中的作用及臨床研究[N];徐州日報;2005年

4 安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所徐叔云 魏偉 王華 吳成義 李常玉;細(xì)胞因子是柄雙刃劍[N];中國醫(yī)藥報;2003年

5 本報特約通訊員　吳志軍;向一個個“第一”沖擊[N];解放軍報;2002年

6 王振坤;人體的血液防線之一[N];家庭醫(yī)生報;2007年

7 ;獨辟蹊徑 追根溯源[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 新言;中醫(yī)證的本質(zhì)是細(xì)胞因子嗎？[N];科技日報;2005年

9 王蘇平;探究中醫(yī)證本質(zhì)[N];健康報;2004年

10 清華;世界多肽藥物的研發(fā)概況[N];中藥報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李海軍;白細(xì)胞介素-21在乙型肝炎病毒感染中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 王婧瑤;卵巢癌患者髓源性抑制細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)及臨床意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

3 徐金成;環(huán)意大利公路自行車賽中能量代謝與肌損傷及細(xì)胞因子相關(guān)變化[D];北京體育大學(xué);2015年

4 關(guān)連越;胰蛋白酶抑制劑保護(hù)肝缺血/再灌注損傷（HIRI）的機制和影響肝移植物存活的實驗研究[D];吉林大學(xué);2016年

5 楊彬珧;血漿細(xì)胞因子與心率變異性和急性冠脈綜合征發(fā)病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)性研究[D];華中科技大學(xué);2014年

6 石一寧;增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變中炎前細(xì)胞因子的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

7 牛忠英;三種細(xì)胞因子對牙周膜纖維細(xì)胞功能和基因調(diào)節(jié)作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1991年

8 夏紅天;細(xì)胞因子與肝癌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的臨床研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

9 陳力航;IL-18,IL-33對Th1,Th2細(xì)胞因子的表達(dá)調(diào)控在原發(fā)免疫性血小板減少癥發(fā)病中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 羊繼平;腎移植供受者細(xì)胞因子及細(xì)胞因子受體基因多態(tài)性對近期移植效果的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

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1 鐘樹玉;復(fù)方補筋片對絕經(jīng)后膝骨關(guān)節(jié)炎血漿中性激素與細(xì)胞因子的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 高雁怩;ALV-J感染后細(xì)胞因子變化規(guī)律及其促進(jìn)IL-6產(chǎn)生的機制與效應(yīng)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 周碧;免疫細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)建模與仿真[D];太原理工大學(xué);2016年

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6 李亞偉;新疆漢族、維吾爾族宮頸癌輔助性T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的差異性研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

7 蘇洪洪;MPs對RA患者Th1/Th2失衡的影響[D];蘇州大學(xué);2016年

8 秦雅;肺癌患者細(xì)胞因子和腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)及臨床意義[D];蘇州大學(xué);2016年

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本文編號：521695