發(fā)布時間：2017-07-05 11:09

  本文關(guān)鍵詞：一組細胞因子總量檢測方法的探討及其肝癌血清檢測的初步應用研究

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【摘要】：研究背景目前已報道的原發(fā)性肝癌(primary liver cancer,PLC,以下簡稱肝癌)相關(guān)標志物很多,細胞因子(cytokines,CKs)就是其中一大類。細胞因子是由機體多種細胞分泌的小分子蛋白質(zhì),通常通過結(jié)合細胞表面的相應受體發(fā)揮生物學作用。研究表明,肝癌細胞高表達眾多細胞因子,包括堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factors,bFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、中期因子(midkine,MK)、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、血小板衍生內(nèi)皮細胞生長因子(platelet-derived endothelial cell growth factor,PD-ECGF)等,其在肝癌患者血清中也明顯升高,并且可能與肝內(nèi)侵襲、轉(zhuǎn)移、血行播散和預后不良有關(guān),被認為可作為潛在靶分子用于肝癌診斷及治療。其中bFGF、VEGF、HGF、MK和OPN同屬于肝素結(jié)合性細胞因子。已知一種腫瘤可分泌多種腫瘤標志物,不同的腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型可有某種相同的腫瘤標志物,而且在不同的腫瘤患者體內(nèi),腫瘤標志物的質(zhì)和量變化也較大。顯然,單獨檢測一種腫瘤標志物,可能會由于測定方法的靈敏度不夠而出現(xiàn)假陰性,聯(lián)合檢測多種可以互補的腫瘤標志物則能夠提高檢出的陽性率。多指標聯(lián)合檢測一般分為系列診斷實驗(串聯(lián))和平行診斷實驗(并聯(lián))。串聯(lián)時因多個指標同時陽性才支持診斷,因此在提高特異性的同時,降低了敏感性;并聯(lián)時只需一個指標陽性即可支持診斷,因此在提高敏感性的同時,降低了特異性。因此,多個指標聯(lián)合檢測(串聯(lián)或并聯(lián))不可能同時提升敏感性和特異性,也無法使用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve,簡稱ROC曲線)分析。鑒于這些情況,我們考慮,如果把幾個合適的指標(都可能具有診斷價值且含量相近)集合成一個指標進行檢測,由于減少了檢測指標的數(shù)目,并提高了測定閾,可能不僅能夠大大方便工作與分析,而且能夠同時顯著改善檢測的敏感性和特異性。研究目的在課題組前期實驗的基礎(chǔ)上,建立可檢測一組靶細胞因子總量的電化學發(fā)光免疫檢測方法,并進行詳細的方法學考察及初步的臨床應用研究,以期發(fā)展出一種優(yōu)于聯(lián)合檢測的新的實驗技術(shù)。其工作原理甚至可以直接被移植到其他實驗設計,形成一個新的檢測技術(shù)發(fā)展方向。采用建立的方法對肝癌、多種類型腫瘤、肝硬化、其他良性肝病等不同疾病患者及健康志愿者血清樣本進行檢測,包括檢測部分患者術(shù)后第1天、第3天和第5天血清樣本,分析其變化情況,為后續(xù)進一步臨床分析、評價其在肝癌診斷及預后預測中的應用價值打下基礎(chǔ)。方法1、采用抗體-肝素雙夾心法檢測一組肝素結(jié)合性細胞因子群總量,探討其可行性。(1)采用酶聯(lián)免疫法(雙抗體夾心法)繪制5種肝素結(jié)合性細胞因子標準曲線,并檢測、分析患者血清中的相應含量。(2)采用酶聯(lián)免疫法(肝素-抗體雙夾心法)繪制5種肝素結(jié)合性細胞因子標準曲線,并檢測、分析患者血清中的相應含量。(3)采用石墨電極板載量的電化學發(fā)光免疫法(肝素-抗體雙夾心法)檢測標準品及血清中5種肝素結(jié)合性細胞因子總量。2、在肝素結(jié)合性細胞因子檢測基礎(chǔ)上引入pdgf、pd-ecgf兩種細胞因子,篩選、確定幾個合適的靶因子進行組合,采用電化學發(fā)光免疫法(雙抗體夾心法)檢測大樣本量的組合靶因子總量,比較其與afp在肝癌診斷特異性和敏感性方面的差異,并檢測部分患者術(shù)后第1天,第3天和第5天的血清樣本,觀察其變化情況。結(jié)果1、標準曲線結(jié)果表明,針對7種細胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk、opn、pdgf、pd-ecgf)的抗體對以及細胞因子標準品的工作性能良好(其標準曲線相關(guān)系數(shù)r均大于0.99)。2、7種細胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk、opn、pdgf、pd-ecgf)的抗體對用于檢測肝癌、肝硬化、良性肝病、其他類型腫瘤及健康者血清的工作性能良好,絕大多數(shù)樣本檢測值都能落在標準曲線的濃度范圍內(nèi)。3、采用抗體-肝素雙夾心elisa法檢測單個肝素結(jié)合性細胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk、opn)時,結(jié)果普遍偏低。原因可能是肝素與細胞因子結(jié)合的特異性差于抗體與抗原結(jié)合,肝素結(jié)合位點有限等。4、采用抗體-肝素雙夾心elisa法檢測一組肝素結(jié)合性細胞因子(bfgf、vegf、hgf、mk)時,當肝素濃度為10μg/ml時,混合檢測所得值與單個檢測之和相近;當肝素濃度10μg/ml時,標準對照中od值升高不明顯,但血清樣本od值仍不斷升高,甚至部分樣本計算所得濃度超過雙抗體夾心法所得濃度,可能原因是肝素捕獲了某些未被洗滌的非目標肝素結(jié)合分子而導致的非特異染色。5、采用電化學發(fā)光免疫法檢測HGF、MK、PDGF等3種因子總量時,3種因子組合總量或者單獨檢測每一因子后數(shù)值相加所得總量都呈現(xiàn)直線相關(guān),無論濃度與信號都能一一對應,說明對應96孔石墨電極板載量完全能夠滿足3種抗體混合包被,并且證實混合抗體檢測多因子總量的可行性。6、采用電化學發(fā)光免疫法檢測部分臨床樣本的結(jié)果顯示,肝癌組與肝血管瘤或肝內(nèi)膽管結(jié)石等良性肝病組及正常人之間HGF、MK、PDGF等3種因子總量具有顯著差異(P0.05),但是肝癌組與其他類型腫瘤組之間無顯著差異(P0.05)。7、對比分析97例良惡性肝病患者(72例肝癌患者和25例良性肝病患者)血清中HGF、MK、PDGF等3種因子總量與AFP在特異性和敏感性方面的差異結(jié)果顯示,血清中3種因子總量檢測有助于肝癌診斷(ROC曲線下面積分別為0.8)。8、分析97例良惡性肝病患者(72例肝癌患者和25例良性肝病患者)手術(shù)前后血清中HGF、MK、PDGF等3種因子總量結(jié)果顯示,術(shù)后第1天,第3天和第5天,肝癌患者血清3種因子總量持續(xù)下降,良性肝病患者術(shù)后血清中3種因子總量下降則不明顯。這為我們后續(xù)進一步探討一組靶細胞因子總量為一個檢測指標在肝癌診斷及預后預測中的應用研究打下了基礎(chǔ)。結(jié)論建立的電化學發(fā)光免疫法用于檢測HGF、MK、PDGF等3種細胞因子總量簡單實用,有用于肝癌輔助診斷、療效監(jiān)測及預后判斷的潛能。3種靶分子在多種類型腫瘤患者血清中也有升高,可能兼具多種類型腫瘤的臨床應用潛能,有待進一步進行雙盲驗證、規(guī)�；炞C以及術(shù)后長期隨訪對比分析。由于3種目標分子沒有統(tǒng)一的參考物質(zhì)和參考檢測方法,以及各生產(chǎn)商使用的標準品及抗體組成存在差異,檢測方法標準化是一技術(shù)挑戰(zhàn),可能會限制臨床轉(zhuǎn)化應用的進程。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 細胞因子 診斷 預后
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 序言12-16
• 第一部分 基于肝素捕獲的肝素結(jié)合性細胞因子群總量檢測的可行性研究16-34
• 一、材料與方法16-21
• 二、實驗結(jié)果21-30
• 三、討論30-34
• 第二部分 基于抗體捕獲的一組細胞因子總量檢測的可行性和初步臨床應用研究34-50
• 一、材料與方法34-36
• 二、實驗結(jié)果36-46
• 三、討論46-50
• 參考文獻50-56
• 文獻綜述一56-65
• 參考文獻61-65
• 文獻綜述二65-73
• 參考文獻70-73
• 中英文縮略詞表73-75
• 在讀期間參加科研工作和發(fā)表論文情況75-76
• 致謝76-78

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1 羅曉丹;劉啟發(fā);;細胞因子與慢性移植物抗宿主病關(guān)系研究[J];中國實用內(nèi)科雜志;2007年03期

2 李曉紅;盛光耀;;兒童特發(fā)性血小板減少性紫癜多項細胞因子測定價值研究[J];現(xiàn)代預防醫(yī)學;2011年15期

3 曹雪濤;第二屆國際細胞因子會議評介[J];中國免疫學雜志;1990年03期

4 曹雪濤,葉天星,杜平;細胞因子和細胞因子網(wǎng)絡的基礎(chǔ)研究進展[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);1990年05期

5 曹雪濤,葉天星,杜平;細胞因子和細胞因子網(wǎng)絡的臨床研究進展[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);1990年05期

6 史久華;細胞因子與疾病[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;1993年05期

7 劉衛(wèi)京,呂秋軍;細胞因子小分子模擬物研究進展[J];藥學學報;2000年11期

8 孟憲鈞;外科感染和細胞因子[J];中國實用外科雜志;2000年12期

9 ;《細胞因子研究方法學》工具書出版[J];中華微生物學和免疫學雜志;2000年03期

10 趙武述;細胞因子研究的臨床意義及展望[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2000年04期

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1 王志國;陳波;肖亮;張顥;展昭民;張伯龍;馬軍;;細胞因子在急性移植物抗宿主病中的臨床研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

2 竇永喜;景志忠;候俊琳;駱學農(nóng);才學鵬;;細胞因子及其應用研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術(shù)研討會論文集[C];2004年

3 竇永喜;景志忠;候俊琳;駱學農(nóng);才學鵬;;細胞因子及其應用研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術(shù)研討會論文集[C];2004年

4 竇永喜;景志忠;候俊琳;駱學農(nóng);才學鵬;;細胞因子及其應用研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術(shù)研討會論文集[C];2004年

5 張鳳蘊;呂雪瑩;于偉玲;王麗群;王琳;李殿俊;;實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎幾種細胞因子的檢測[A];慶祝黑龍江省免疫學會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

6 鄒崢;張淑華;柯江維;;小兒幼年類風濕關(guān)節(jié)炎細胞因子產(chǎn)生及干預的研究[A];全國自身免疫性疾病專題研討會暨第十一次全國風濕病學學術(shù)年會論文匯編[C];2006年

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9 萬遂如;;細胞因子與細胞因子療法[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第十二次學術(shù)研討會論文集[C];2007年

10 劉占國;袁小彭;羅宇維;何懿;孫爾維;;通過細胞因子譜評估免疫抑制劑對人免疫狀態(tài)的作用[A];全國臨床免疫檢驗研討會暨第六屆全國臨床免疫學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

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1 仇逸;口服細胞因子治療腫瘤將獲突破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

2 通訊員 何育萍 記者 王玉華;我省細胞因子研究獲重大突破[N];湖北日報;2001年

3 徐州市第一人民醫(yī)院血液科 張魯勤;白介素18等細胞因子在非惡性血液病中的作用及臨床研究[N];徐州日報;2005年

4 安徽醫(yī)科大學臨床藥理研究所徐叔云 魏偉 王華 吳成義 李常玉;細胞因子是柄雙刃劍[N];中國醫(yī)藥報;2003年

5 本報特約通訊員　吳志軍;向一個個“第一”沖擊[N];解放軍報;2002年

6 王振坤;人體的血液防線之一[N];家庭醫(yī)生報;2007年

7 ;獨辟蹊徑 追根溯源[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 新言;中醫(yī)證的本質(zhì)是細胞因子嗎？[N];科技日報;2005年

9 王蘇平;探究中醫(yī)證本質(zhì)[N];健康報;2004年

10 清華;世界多肽藥物的研發(fā)概況[N];中藥報;2001年

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1 李海軍;白細胞介素-21在乙型肝炎病毒感染中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

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4 關(guān)連越;胰蛋白酶抑制劑保護肝缺血/再灌注損傷（HIRI）的機制和影響肝移植物存活的實驗研究[D];吉林大學;2016年

5 楊彬珧;血漿細胞因子與心率變異性和急性冠脈綜合征發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)性研究[D];華中科技大學;2014年

6 石一寧;增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變中炎前細胞因子的研究[D];第四軍醫(yī)大學;1998年

7 牛忠英;三種細胞因子對牙周膜纖維細胞功能和基因調(diào)節(jié)作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學;1991年

8 夏紅天;細胞因子與肝癌血管內(nèi)皮細胞生長的臨床研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2006年

9 陳力航;IL-18,IL-33對Th1,Th2細胞因子的表達調(diào)控在原發(fā)免疫性血小板減少癥發(fā)病中的作用[D];復旦大學;2013年

10 羊繼平;腎移植供受者細胞因子及細胞因子受體基因多態(tài)性對近期移植效果的影響[D];第二軍醫(yī)大學;2003年

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1 鐘樹玉;復方補筋片對絕經(jīng)后膝骨關(guān)節(jié)炎血漿中性激素與細胞因子的影響[D];福建中醫(yī)藥大學;2015年

2 高雁怩;ALV-J感染后細胞因子變化規(guī)律及其促進IL-6產(chǎn)生的機制與效應研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

3 周碧;免疫細胞因子網(wǎng)絡建模與仿真[D];太原理工大學;2016年

4 林珊珊;神經(jīng)肽S對番鴨血清及免疫器官中細胞因子的影響[D];福建農(nóng)林大學;2015年

5 康紅紅;PDTC干預LPS誘導小鼠ARDS時細胞因子及CD11b/CD18表達的研究[D];遵義醫(yī)學院;2016年

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