本文關(guān)鍵詞：量子點免疫層析試紙和磁分選細胞在肺癌診斷上的研究

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【摘要】：納米科技作為一種新興科技,自產(chǎn)生開始就得到了快速的發(fā)展和廣泛的關(guān)注。其中,量子點因其量子限域效應、尺寸效應等四大效應,磁珠因其比表面積大、超順磁性等優(yōu)點,都受到了研究工作者的重視,在細胞的分離富集,蛋白質(zhì)的標記和檢測,靶向給藥和治療等方面中發(fā)揮著日益重要的作用。肺癌是我國第一大腫瘤,對于人們的生命健康正產(chǎn)生著巨大的威脅,絕大部分肺癌患者在確診時已處于肺癌晚期,極大的增大了治愈肺癌的難度,減少了病人的存活時間。因此,臨床上肺癌的早期診斷對提高肺癌治愈的可能性和增加肺癌患者的存活時間具有至關(guān)重要的作用,這對早期肺癌的診斷方法帶來很大的挑戰(zhàn),同時也促進了肺癌腫瘤標記物研究的快速發(fā)展。腫瘤標志物是存在于癌癥病人體內(nèi)的某些特定的蛋白,其含量的變化對于病人的早期診斷、病情監(jiān)測、治療效果及預后的評價具有非常重要的意義。目前在臨床上,腫瘤標志物已經(jīng)成為評價腫瘤患者病況的一項重要檢測指標。循環(huán)腫瘤細胞是由原發(fā)灶腫瘤上的腫瘤細胞脫落入侵進入血管中形成的,在血液的運輸下,進入身體的其他部位,是腫瘤擴散的根本原因。循環(huán)腫瘤細胞的數(shù)量與癌癥患者體內(nèi)腫瘤所處的階段密切相關(guān),對于腫瘤的早期診斷,癌癥的病況監(jiān)測和治療方案的選擇有著極為重要的臨床價值。本論文分別從分子水平對腫瘤標志物進行檢測和細胞水平對循環(huán)腫瘤細胞進行檢測,探索肺癌早期診斷新途徑。1.本文對肺癌的檢測利用了量子點在紫外光激發(fā)下具有明亮熒光的特點,制備了量子點免疫層析檢測卡,成功實現(xiàn)了對神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)的檢測,且該檢測卡具有良好的特異性,檢測限可低至2ng/m L,檢測靈敏度優(yōu)于膠體金對NSE的檢測限,可方便、快速、靈敏、批量的檢測,具有良好的應用價值。2.針對血液中的循環(huán)腫瘤細胞數(shù)量極少,很難被監(jiān)測到等特點,通過免疫磁珠對循環(huán)腫瘤細胞進行分離富集,并進行熒光標記技術(shù)對捕獲的循環(huán)腫瘤細胞熒光標記,成功的從大量干擾細胞中把少量的循環(huán)腫瘤細胞進行分離富集,并通過電化學阻抗技術(shù)和熒光強度對捕獲的細胞數(shù)量進行定性定量檢測。該方法具有靈敏度高、特異性好等特點,在肺癌的臨床診斷方面具有潛在的應用價值。
【關(guān)鍵詞】：量子點 肺癌 臨床診斷 磁珠 循環(huán)腫瘤細胞 靈敏度 特異性
【學位授予單位】：上海師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2;TB383.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第1章 緒論10-25
• 1.1 研究意義10-12
• 1.2 研究進展12-16
• 1.2.1 體外診斷試劑12-13
• 1.2.2 肺癌的常見診斷方法13-14
• 1.2.3 量子點的性質(zhì)、制備以及應用14-15
• 1.2.4 磁珠的性質(zhì)、制備以及應用15-16
• 1.3 量子點免疫層析方法16-20
• 1.3.1 免疫量子點的制備16-18
• 1.3.2 硝酸纖維素膜的選擇18
• 1.3.3 競爭法和雙抗夾心法18-20
• 1.3.4 量子點免疫層析方法的發(fā)展趨勢20
• 1.4 富集循環(huán)腫瘤細胞的分離富集和檢測20-23
• 1.4.1 磁珠的制備、修飾和免疫化20-21
• 1.4.2 免疫磁珠分離富集循環(huán)腫瘤細胞21-22
• 1.4.3 循環(huán)腫瘤細胞的多種檢測方法22-23
• 1.4.4 磁分選技術(shù)分離富集CTC的發(fā)展趨勢23
• 1.5 本論文研究的目的和內(nèi)容23-25
• 第2章 量子點免疫層析試紙檢測肺癌腫瘤標志物NSE25-39
• 2.1 引言25-26
• 2.2 實驗部分26-30
• 2.2.1 試劑與儀器26
• 2.2.2 QDs-COOH探針熒光強度，Zeta電位和粒徑的測定26
• 2.2.3 QDs-COOH探針偶聯(lián)抗體條件的優(yōu)化26-27
• 2.2.4 量子點免疫層析試紙的結(jié)構(gòu)27
• 2.2.5 量子點免疫層析試紙的制備27-28
• 2.2.6 免疫層析試紙檢測NSE抗原的原理及結(jié)果判定28-29
• 2.2.7 對NSE抗原的標準溶液的檢測及檢測限的確定29
• 2.2.8 免疫層析試紙的特異性實驗29
• 2.2.9 免疫層析試紙的穩(wěn)定性實驗29
• 2.2.10 免疫層析試紙聯(lián)合檢測NSE和CEA抗原29-30
• 2.3 結(jié)果與討論30-38
• 2.3.1 QDs-COOH偶聯(lián)抗體條件的優(yōu)化30-33
• 2.3.2 量子點偶聯(lián)抗體前后的水合粒徑33
• 2.3.3 對NSE抗原的標準溶液的定性檢測及檢測限的確定33-34
• 2.3.4 免疫層析試紙的特異性實驗34-35
• 2.3.5 免疫層析試紙的穩(wěn)定性實驗35-37
• 2.3.6 免疫層析試紙聯(lián)合檢測NSE和CEA抗原37-38
• 2.4 本章小結(jié)38-39
• 第3章 磁性Fe_3O_4納米粒子的制備及表面修飾39-52
• 3.1 引言39
• 3.2 實驗部分39-42
• 3.2.1 實驗試劑與儀器39-40
• 3.2.2 磁性Fe_3O_4納米粒子的制備40
• 3.2.3 檸檬酸鈉分散磁性納米粒子和鹽酸純化40
• 3.2.4 二氧化硅包覆磁性納米粒子40
• 3.2.5 磁珠表面氨基的修飾40-41
• 3.2.6 抗體偶聯(lián)磁珠條件的優(yōu)化41-42
• 3.3 實驗結(jié)果與分析42-51
• 3.3.1 裸磁珠的表征42-43
• 3.3.2 包覆檸檬酸鈉的磁性Fe_3O_4納米粒子的表征43-44
• 3.3.3 包覆Si O_2的磁性Fe_3O_4納米粒子的表征44-46
• 3.3.4 磁性Fe_3O_4納米粒子表面修飾氨基46-47
• 3.3.5 磁珠固含量的測定47-48
• 3.3.6 抗體偶聯(lián)條件的優(yōu)化48-51
• 3.4 本章小結(jié)51-52
• 第4章 循環(huán)腫瘤細胞的磁分離富集和檢測52-66
• 4.1 引言52
• 4.2 實驗部分52-56
• 4.2.1 實驗試劑與儀器52
• 4.2.2 細胞的處理52-54
• 4.2.3 免疫磁珠捕獲細胞54
• 4.2.4 免疫磁珠偶聯(lián)抗體種類的優(yōu)化54
• 4.2.5 免疫磁珠加入量的優(yōu)化54-55
• 4.2.6 磁珠捕獲細胞的特異性實驗55
• 4.2.7 磁珠捕獲細胞的靈敏度實驗55
• 4.2.8 被捕獲細胞的電化學阻抗檢測55-56
• 4.2.9 被捕獲細胞的熒光發(fā)光強度檢測56
• 4.3 結(jié)果與討論56-64
• 4.3.1 偶聯(lián)不同種類抗體的免疫磁珠對CTC的捕獲56-57
• 4.3.2 不同量的磁珠對CTC的捕獲57-59
• 4.3.3 免疫磁珠對CTC捕獲的特異性實驗59-61
• 4.3.4 免疫磁珠捕獲CTC的靈敏度實驗61-62
• 4.3.5 CTC捕獲的電化學阻抗定性檢測62-63
• 4.3.6 CTC捕獲的熒光強度定量檢測63-64
• 4.4 本章小結(jié)64-66
• 參考文獻66-70
• 碩士期間獲得的研究成果70-71
• 致謝71

【參考文獻】

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本文編號：521387