發(fā)布時間：2017-07-05 07:11

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細胞分泌的微囊通過ATM-p53途徑抑制膀胱腫瘤生長的研究

  更多相關(guān)文章： 微囊 ATM信號通路 G0/G1期阻滯 細胞凋亡

【摘要】：目的:膀胱癌是泌尿系中最常見的惡性腫瘤之一,多以移行細胞癌為主,臨床上分為非肌層浸潤性膀胱癌和浸潤性膀胱癌,其中浸潤性膀胱癌惡性程度較高、易轉(zhuǎn)移,如治療不及時,預(yù)后較差。之前的研究表明,來源于臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical cord Wharton’s jelly mesenchymal stem cells,hWJMSCs)的微囊(microvesicles,MVs)可以有效的降低膀胱腫瘤細胞的浸潤性并誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。在其作用過程中,hWJMSC-MVs首先上調(diào)p53蛋白的表達量,隨后激活的p53基因通過調(diào)控一系列下游靶點基因(p21、Caspase 3)來抑制膀胱腫瘤細胞的增殖。然而該信號通路的上游調(diào)控因子ATM(Ataxia telangiectasia mutatedkinase)的作用尚未明確。有研究表明,ATM低表達的腫瘤細胞接受射線、化學(xué)藥物等處理更容易被誘導(dǎo)凋亡。因此,我們假設(shè)ATM的基礎(chǔ)表達水平可以影響hWJMSC-MVs對膀胱腫瘤細胞的作用效果。本項目中,我們首先驗證hWJMSC-MVs是否能對膀胱腫瘤的增殖產(chǎn)生抑制效果和ATM在h WJMSC-MVs作用中的表達情況,再通過ATM特異性抑制劑和激活劑改變ATM蛋白的表達水平,最后分析hWJMSC-MVs處理膀胱腫瘤細胞后腫瘤細胞周期停滯與凋亡指數(shù)的變化及ATM-p53-p21通路中主要靶點蛋白的活化、表達水平的改變。以此來探討ATM對人臍帶間充質(zhì)干細胞微囊抑制膀胱腫瘤細胞生長的可能調(diào)控機制。這為將來臨床上微囊治療腫瘤奠定良好的實驗基礎(chǔ)。方法:1.采用MTT比色法檢測不同濃度hWJMSC-MVs對不同的膀胱腫瘤細胞系的生長抑制。2.采用流式細胞儀技術(shù)來分析膀胱腫瘤細胞的細胞周期以及細胞凋亡量。3.在不同的作用條件下,采用Western blot來分析ATM,p-ATM,p53,p21,Bax和cleaved Caspase 3蛋白的表達水平。結(jié)果:1.在相同作用時間的條件下,隨著hWJMSC-MVs濃度的增加,三種膀胱腫瘤細胞系的凋亡量也明顯增加。其中T24細胞系最為敏感。2.hWJMSC-MVs可以通過激活A(yù)TM-p53信號通路導(dǎo)致G0/G1期的細胞周期阻滯。3.hWJMSC-MVs通過提高cleaved caspase 3和Bax凋亡蛋白的表達來引起T24細胞的凋亡。4.在hWJMSC-MVs的作用情況下,通過抑制ATM-p53信號通路來廢除T24細胞G0/G1期的周期阻滯,進一步提高了hWJMSC-MVs對腫瘤細胞的凋亡作用。結(jié)論:通過本實驗可以看出,在hWJMSC-MVs使用劑量增加的情況下,其對T24細胞的G0/G1期阻滯效果和誘導(dǎo)凋亡的效果也明顯加強。本研究首次證明在hWJMSC-MVs作用下ATM-p53信號通路被激活,hWJMSC-MVs誘導(dǎo)上調(diào)了p-ATM、p53、p21、cleaved caspase 3和Bax蛋白水平從而對細胞周期及凋亡產(chǎn)生了影響。通過目前的研究,我們進一步的了解了有關(guān)膀胱腫瘤細胞G0/G1阻滯和細胞凋亡之間的相互作用關(guān)系,并證明了激活的ATM-p53信號通路對膀胱腫瘤細胞的存活是起到保護作用的。明確闡述了G0/G1期的細胞阻滯在膀胱癌的治療過程中的潛在作用。我們的研究結(jié)果可以更好理解并處理這一復(fù)雜的治療環(huán)境,在該治療情況下,我們可以把hWJMSC-MVs正確與其他化療藥物組合,這樣就使癌細胞應(yīng)對hWJMSC-MVs作用時出現(xiàn)更有效的癌細胞特異性死亡。相信在不久的將來,來源于充質(zhì)干細胞的微囊,可以變成一種新的抗癌藥物來應(yīng)用于臨床。
【關(guān)鍵詞】：微囊 ATM信號通路 G0/G1期阻滯 細胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-21
• 1. 實驗材料14-16
• 1.1 膀胱腫瘤細胞系14
• 1.2 臍帶標本14
• 1.3 細胞培養(yǎng)及實驗試劑14-15
• 1.4 實驗耗材和儀器15-16
• 2. 實驗方法16-21
• 2.1 hWJMSCs的原代培養(yǎng)16
• 2.2 膀胱腫瘤細胞培養(yǎng)16-17
• 2.3 細胞傳代17
• 2.4 hWJMSC-MVs制備17
• 2.5 hWJMSC-MVs透視電鏡檢測17-18
• 2.6 膀胱腫瘤細胞增殖活力檢測（MTT法）18
• 2.7 膀胱腫瘤細胞周期檢測18-19
• 2.8 膀胱腫瘤細胞凋亡檢測19
• 2.9 Western blotting19-20
• 2.10 統(tǒng)計學(xué)方法20-21
• 結(jié)果21-26
• 1. h WJMSC-MVs分離及鑒定21
• 2. h WJMSC-MVs明顯抑制膀胱腫瘤T24細胞增殖21-22
• 3. h WJMSC-MVs誘導(dǎo)T24細胞G0/G1期阻滯和細胞凋亡22-24
• 4. 抑制ATM-p53信號通路的表達，，可以提高hWJMSC-MVs對T24細胞的凋亡作用24-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻30-34
• 綜述34-43
• 參考文獻38-43
• 臨床病例報告43-46
• 參考文獻45-46
• 致謝46-47

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本文編號：520960