本文關(guān)鍵詞：皮秒脈沖電場對宮頸癌血管生成的影響及機(jī)制的體外實驗研究

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【摘要】：脈沖電場(pulsed electric field,PEF)是近年來新出現(xiàn)的一種微創(chuàng)、可消融腫瘤的技術(shù),利用脈沖波不僅可以直接導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生腫脹破裂,同時可引發(fā)細(xì)胞發(fā)生凋亡。而其最新的研究進(jìn)展發(fā)現(xiàn),當(dāng)脈沖波的脈寬降低至皮秒時,可使用特殊構(gòu)建的、能夠發(fā)射超寬帶沖擊脈沖的輻射天線實現(xiàn)無創(chuàng)聚焦,即皮秒脈沖電場(picosecond pulse electric field,psPEF)。因此,皮秒脈沖電場在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是腫瘤治療方面,受到了人們越來越多的關(guān)注和研究。在腫瘤生長、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的過程中,血管的作用是至關(guān)重要的。當(dāng)現(xiàn)有血管無法滿足腫瘤生長所需時,腫瘤會產(chǎn)生血管生成相關(guān)因子,形成新生血管。腫瘤中血管的形成包括內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、定向遷移、管腔形成等復(fù)雜過程,同時,血管生成促進(jìn)因子和抑制因子之間的平衡可精密調(diào)控腫瘤血管形成。目前研究發(fā)現(xiàn),血管內(nèi)皮生長因子VEGF和缺氧誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子HIF1α是血管形成的重要促進(jìn)因素。本課題組前期研究表明,皮秒脈沖電場對人宮頸癌HeLa細(xì)胞有抑制生長和誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡的作用,然而,其對腫瘤血管生成的影響尚未見有相關(guān)報道。為探討皮秒脈沖電場對腫瘤及其周圍血管的影響,本實驗以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(huvec)和人宮頸癌hela細(xì)胞為研究對象,以低、中、高場強的皮秒脈沖(200kv/cm、400kv/cm、600kv/cm)為處理方式,應(yīng)用cck-8法、transwell小室法、劃痕實驗、管腔形成實驗、流式細(xì)胞計數(shù)法檢測皮秒脈沖電場處理后對huvec增殖、遷移、管腔形成、周期及凋亡的影響;利用real-timepcr、westernblot在分子層面上探討皮秒脈沖電場作用hela細(xì)胞后其血管生成相關(guān)因子mrna及蛋白表達(dá)水平的變化。探討皮秒脈沖電場對宮頸癌血管生成的影響及可能的分子機(jī)制,為后續(xù)的動物實驗提供科學(xué)依據(jù)。第一部分皮秒脈沖電場對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為的影響目的:探討皮秒脈沖電場對huvec細(xì)胞增殖、遷移、管腔形成、周期及凋亡的影響方法:將huvec細(xì)胞分為四個組:對照組和低、中、高場強即200kv/cm,400kv/cm,600kv/cm作用的實驗組。皮秒脈沖電場的參數(shù)為:固定脈寬800ps,頻率3hz,脈沖個數(shù)2000個。在皮秒脈沖電場處理huvec細(xì)胞后2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h,cck-8法檢測皮秒脈沖電場對huvec細(xì)胞生長的影響;采用劃痕試驗及transwell小室法觀察皮秒脈沖電場對huvec細(xì)胞遷移率的影響;管腔形成實驗觀察huvec細(xì)胞血管管腔形成的變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測皮秒脈沖電場對huvec細(xì)胞周期及凋亡的作用。結(jié)果:皮秒脈沖電場處理huvec后,隨著場強的增加,細(xì)胞死亡率上升,生長受到抑制,12h時抑制率最為顯著;皮秒脈沖電場可明顯抑制huvec細(xì)胞的遷移能力和血管管腔形成;皮秒脈沖電場可將huvec阻滯于g2/m期,同時huvec凋亡細(xì)胞數(shù)增多。結(jié)論:皮秒脈沖電場可抑制huvec細(xì)胞增殖、遷移和管腔形成,并阻滯細(xì)胞周期于g2/m期,促進(jìn)其凋亡。第二部分皮秒脈沖電場對人宮頸癌hela細(xì)胞產(chǎn)生血管生成相關(guān)因子的影響目的:探討皮秒脈沖電場對人宮頸癌hela細(xì)胞產(chǎn)生血管生成相關(guān)因子的影響。方法:將hela細(xì)胞分為四個組:對照組和低、中、高場強即200kv/cm,400kv/cm,600kv/cm作用的實驗組。皮秒脈沖電場的參數(shù)為:固定脈寬800ps,頻率3hz,脈沖個數(shù)2000個。在皮秒脈沖電場處理hela細(xì)胞后在37℃,5%co2孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)12h,real-timepcr和westernblot從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平檢測血管生成相關(guān)因子hif1α,vegf的表達(dá)。結(jié)果:皮秒脈沖電場作用后,hif1α,vegf在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:皮秒脈沖可減少hela細(xì)胞中vegf、hif1α的表達(dá),其結(jié)果可能與HIF1α-VEGF信號通路相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：皮秒脈沖電場 腫瘤血管生成 HUVEC細(xì)胞 HeLa細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-18
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第一部分 皮秒脈沖電場對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為的影響18-31
• 1 材料與方法18-21
• 2 結(jié)果21-27
• 3 討論27-28
• 4 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 第二部分 皮秒脈沖電場對人宮頸癌He La細(xì)胞產(chǎn)生血管生成相關(guān)因子的影響31-41
• 1 材料與方法31-35
• 2 結(jié)果35-37
• 3 討論37-38
• 4 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 全文總結(jié)41-42
• 附圖42-43
• 文獻(xiàn)綜述43-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文目錄56

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本文編號：521174