本文關(guān)鍵詞：用于胃癌標志物檢測的納米電化學免疫傳感器研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：胃癌(Gastric cancer)是最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率分別位居第二位和第三位。因而早期診斷水平將對提高胃癌患者的生存質(zhì)量及總體治療效果評價具有重大意義。納米電化學免疫傳感器是一種結(jié)合納米技術(shù)、電化學分析法與免疫學技術(shù)的新興生物傳感器,其操作簡單、分析速度快、靈敏度高、選擇性好。隨著研究的不斷深入,新型高靈敏度和高選擇性的納米電化學免疫傳感器件正得以快速發(fā)展,以適應(yīng)生命科學研究和臨床醫(yī)學的需要。同時,為滿足臨床檢測需求,發(fā)展靈敏、準確、經(jīng)濟、高通量的多種腫瘤標志物聯(lián)合檢測的分析方法是腫瘤診斷長期追求的目標。本論文以胃癌早期檢測為目標,結(jié)合免疫分析技術(shù)、納米技術(shù)及電化學傳感技術(shù),從納米材料的功能化制備、信號增強的免疫傳感新技術(shù)、新型傳感界面的構(gòu)建等方面進行探索和研究,構(gòu)建了兩種用于胃癌標志物快速、靈敏檢測的納米電化學免疫傳感器,并建立了靈敏、快速、便攜及經(jīng)濟的雙胃癌標志物聯(lián)合檢測的新方法。具體開展了如下研究工作:1.基于多重信號放大技術(shù)構(gòu)建的電化學免疫傳感器用于胃癌標志物CA72-4檢測的實驗研究本實驗將納米技術(shù)、免疫技術(shù)及電化學傳感分析技術(shù)相結(jié)合,以具有良好的導(dǎo)電性能的硫化鎢-還原氧化石墨烯-殼聚糖(WS2-Gr-CS)復(fù)合膜修飾電極作為抗體固定基底,利用良好生物相容性、導(dǎo)電性的納米金-四氧化三鐵-聚多巴胺(Au-Fe3O4-PDA)復(fù)合納米材料標記二抗,再結(jié)合銀放大技術(shù)制得“三明治”型多重信號放大的高靈敏電化學免疫傳感器。實驗結(jié)果表明,最佳實驗條件下,在0.0001~5 U/mL范圍內(nèi)的CA72-4抗原濃度,其對數(shù)值與檢測的電流響應(yīng)信號扣除空白后的差值,呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢測限低至3×10-5 U/mL,且該傳感器特異性高、穩(wěn)定性強、重現(xiàn)性好。因此,本實驗制備的多重信號放大免疫傳感器顯著地提高了傳感器檢測的靈敏度,降低了檢測限。2.基于雙納米信號探針構(gòu)建的電化學免疫傳感器用于胃癌雙標志物聯(lián)合檢測的研究本實驗首先設(shè)計并制備了金納米粒子 甲苯胺藍 氧化石墨烯(AuNPs-TB-GO)和金納米粒子-羧基二茂鐵-二硫化鎢(AuNPs-FMC-WS2)納米復(fù)合物,并分別標記CEA和CA72-4,作為兩種具有不同電化學信號的探針。以具有磁性性能的生物素化磁珠(IMBs)作為一抗固定基質(zhì),通過外磁場作用將免疫磁珠牢牢固定于電極表面,再利用生物素-親和素之間的親和鍵作用實現(xiàn)CEA與CA72-4雙抗體分子在電極表面的有效固定,從而構(gòu)建了一種簡單高效的雙組分免疫傳感界面。在上述傳感界面基礎(chǔ)上進一步通過夾心免疫反應(yīng)將上述雙納米信號探針結(jié)合在傳感器表面,根據(jù)檢測電流信號值的變化,實現(xiàn)對胃癌腫瘤標志物CEA與CA72-4的高靈敏同時檢測。實驗結(jié)果表明,在最佳實驗條件下,該雙組分免疫傳感器對CEA檢測線性范圍為0.01~120 ng/mL,檢測限是0.003 ng/mL;對CA72-4檢測線性范圍為0.05~35 U/mL,檢測限是0.016 U/mL,且該傳感器具有選擇性好、靈敏性高等優(yōu)點,成功實現(xiàn)了對胃癌腫瘤標志物CEA與CA72-4的高靈敏、快速、同時檢測。本實驗為多腫瘤標志物的聯(lián)合快速檢測提供新的方法,并為最終用于胃癌早期診斷提供科學的研究基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌標志物 納米材料 電化學免疫傳感器 多重信號放大 雙組分同時檢測
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2;TP212
【目錄】：

• 附錄 英文縮寫字表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一章 前言10-22
• 參考文獻15-22
• 第二章 基于多重信號放大技術(shù)構(gòu)建的電化學免疫傳感器用于胃癌標志物CA72-4 檢測的實驗研究22-39
• 2.1 主要儀器與試劑23-26
• 2.1.1 主要儀器23-24
• 2.1.2 主要試劑24-25
• 2.1.3 溶液配制25-26
• 2.2 實驗方法26-28
• 2.2.1 WS2-Gr復(fù)合納米材料的制備26
• 2.2.2 CS溶液的配制26
• 2.2.3 Au-Fe3O4-PDA納米復(fù)合物標記CA72-4 二抗26-27
• 2.2.4 夾心型免疫傳感器的構(gòu)建27
• 2.2.5 電化學信號檢測27-28
• 2.3 結(jié)果與討論28-34
• 2.3.1 WS2-Gr納米復(fù)合材料的表征28-29
• 2.3.2 Au-Fe3O4-PDA納米復(fù)合材料的表征29-30
• 2.3.3 修飾電極的表征30-32
• 2.3.4 實驗條件優(yōu)化32-33
• 2.3.5 免疫傳感器的性能33-34
• 2.4 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-39
• 第三章 基于雙納米信號探針構(gòu)建的電化學免疫傳感器用于胃癌雙標志物聯(lián)合檢測的研究39-56
• 3.1 主要儀器與試劑40-43
• 3.1.1 主要儀器40-41
• 3.1.2 主要試劑41-42
• 3.1.3 溶液配制42-43
• 3.2 實驗方法43-45
• 3.2.1 二抗標記物的制備43-44
• 3.2.2 雙組分免疫傳感器的構(gòu)建44-45
• 3.2.3 雙組分免疫傳感器雙抗體夾心法的測試過程45
• 3.3 結(jié)果與討論45-52
• 3.3.1 ATG納米復(fù)合材料的表征45-47
• 3.3.2 AFW納米復(fù)合材料的表征47-48
• 3.3.3 修飾電極的電化學表征48-50
• 3.3.4 實驗條件優(yōu)化50-51
• 3.3.5 免疫傳感器的性能51-52
• 3.4 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-56
• 綜述 用于胃癌腫瘤標志物檢測的免疫傳感器的研究進展56-65
• 參考文獻61-65
• 致謝65

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