本文關(guān)鍵詞：地西他濱聯(lián)合細(xì)胞因子活化的DLI治療急性白血病移植后復(fù)發(fā)小鼠模型的建立及其作用機(jī)制的探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:建立以荷EL9611紅白血病細(xì)胞的BALB/c(H-2d)小鼠為受鼠,BALB/C×C57BL/6雜交F1代CB6F1(H-2d/b)小鼠為供鼠的四大模型:MHC半相合異基因骨髓移植后復(fù)發(fā)模型、常規(guī)供體淋巴細(xì)胞輸注(t DLI)模型、細(xì)胞因子干擾素-α(IFN-α)活化的供體淋巴細(xì)胞輸注(a DLI)模型,地西他濱聯(lián)合a DLI(DAC+a DLI)模型,比較不同DLI組GVL效應(yīng)和GVHD差異,并進(jìn)行相關(guān)免疫作用機(jī)制的探究方法:建立荷EL9611(H-2d)紅白血病細(xì)胞的BALB/c H-2d小鼠接受BALB/C×C57BL/6雜交F1代小鼠CB6F1H-2d/b來(lái)源的MHC半相合異基因骨髓移植(BMT)模型。移植前制備供鼠骨髓細(xì)胞(BMCs)和脾細(xì)胞(SCs),BALB/c小鼠提前7天接種1×106個(gè)EL9611白血病細(xì)胞,在X射線直線加速器8Gy全身照射(TBI)后行(供鼠)CB6F1H-2d/b→(受鼠)BALB/c H-2d方向骨髓移植,實(shí)驗(yàn)分為兩部分:第一部分:異基因骨髓移植后復(fù)發(fā)模型及DLI組脾細(xì)胞輸注數(shù)目探討。分為:A組(異基因骨髓移植后復(fù)發(fā)模型):TBI后輸注供鼠來(lái)源的BMCs5×106個(gè),不給予任何治療;B組(t DLI組):TBI后輸注供鼠來(lái)源的BMCs5×106個(gè)+不同劑量SCs:1×107(B1組),1.5×107(B2組),2×107(B3組);C組(a DLI組):TBI后輸注供鼠來(lái)源的BMCs5×106個(gè)+不同劑量SCs:1×107(C1組),1.5×107(C2組),2×107(C3組),3天后開(kāi)始予重組IFN-α20000U/d皮下注射,出現(xiàn)嚴(yán)重GVHD時(shí)停藥。比較各組小鼠生存期及GVHD表現(xiàn),得出最佳脾細(xì)胞輸注數(shù)目。第二部分:DLI治療組。分為:D組(t DLI組):TBI后輸注供鼠來(lái)源的BMCs5×106個(gè)+SCs 1.5×107;E組(a DLI組):TBI后輸注供鼠來(lái)源的BMCs5×106個(gè)+SCs 1.5×107,3天后開(kāi)始予重組IFN-α20000U/d皮下注射,出現(xiàn)嚴(yán)重GVHD時(shí)停藥;F組(DAC+a DLI組):TBI后輸注供鼠來(lái)源的BMCs5×106個(gè),SC1.5×107個(gè),3天后開(kāi)始予地西他濱(達(dá)珂)1mg/kg/只皮下注射×3天,重組IFN-α20000U/d皮下注射,GVHD反應(yīng)嚴(yán)重時(shí)停藥。每組小鼠10只,每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。觀察各組小鼠生存時(shí)間、白血病負(fù)荷、GVHD表現(xiàn)、組織病理學(xué)改變等;并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)比較D組、E組和F組小鼠移植后外周血活化的CD8+T淋巴細(xì)胞,外周血和肝臟、脾臟、肺CD4+CD25+Treg細(xì)胞的表達(dá);通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)比較D組、E組和F組小鼠移植后外周血血漿中相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-a、TGF-β、IL-10、IL-35表達(dá)水平差異。結(jié)果:第一部分實(shí)驗(yàn)組小鼠的平均生存時(shí)間(移植后)分別為A組(9.8±2.3)d;B1組(19.0±5.12)d、B2組(23.4±4.03)d、B3組(26.4±4.53)d;C1組(22.5±4.19)d、C2組(32.9±3.78)d、C3組(20.6±4.59)d。A組、B1、C1組小鼠在移植后全部死亡,組織病理學(xué)檢查示復(fù)發(fā)死亡;C3組小鼠于移植后早期大量死亡,出現(xiàn)嚴(yán)重GVHD表現(xiàn),考慮由于脾細(xì)胞輸注數(shù)目過(guò)大,GVHD反應(yīng)嚴(yán)重導(dǎo)致死亡增加。綜合考慮不同脾細(xì)胞輸注數(shù)量組生存時(shí)間長(zhǎng)短及下一步實(shí)驗(yàn)操作可控性,選擇脾細(xì)胞數(shù)目SCs為1.5×107/只。第二部分實(shí)驗(yàn)組小鼠平均生存時(shí)間分別為:D組(21.7±7.76)d、E組(34.9±8.04)d、F組(45.6±8.48)d,E組較D組生存時(shí)間延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),F組較D組、E組生存時(shí)間延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中D組小鼠全部死亡,E組和F組分別有11/30和20/30小鼠長(zhǎng)期存活,其余死亡。D組及F組小鼠出現(xiàn)輕度的弓背、聳毛、體重下降等GVHD表現(xiàn),a GVHD臨床評(píng)分分別為1.88±0.64、1.74±0.72,E組較D組及F組GVHD加重,臨床評(píng)分為3.32±0.91(P0.05)。移植后+10d,+17d,+24d取D組、E組和F組小鼠肝臟、腸道、皮膚病理學(xué)檢查結(jié)果顯示,E組小鼠淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度較D組及F組加重,其中移植后+17d左右淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度最嚴(yán)重。流式結(jié)果顯示:在移植后同一時(shí)段,E組及F組小鼠外周血活化CD8+T細(xì)胞百分比較D組升高,即a DLI組和DAC+a DLI組較t DLI組腫瘤殺傷細(xì)胞CTL細(xì)胞數(shù)目多,抗白血病效應(yīng)強(qiáng);其中F組小鼠各時(shí)間段外周血及GVHD靶器官免疫負(fù)調(diào)控Treg細(xì)胞比例較D組及E組升高。ELISA結(jié)果顯示,在移植后同一時(shí)段小鼠外周血中細(xì)胞因子IFN-γ,TNF-a,E組細(xì)胞因子水平最高,與t DLI組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞因子TGF-β、IL-10,F組較D組和E組升高并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中IL-35 F組較D組及E組升高但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了荷EL9611(H-2d)急性紅白血病細(xì)胞株的BALB/c H-2d小鼠(受鼠)接受CB6F1H-2d/b小鼠(供鼠)來(lái)源的MHC半相合異基因骨髓移植后復(fù)發(fā)模型,并在此基礎(chǔ)上給予不同的過(guò)繼免疫治療方案,成功建立了常規(guī)供體淋巴細(xì)胞輸注(t DLI)模型、細(xì)胞因子IFN-α活化的供體淋巴細(xì)胞輸注(a DLI)模型、地西他濱聯(lián)合a DLI模型(DAC+a DLI);初步研究表明IFN-α可能通過(guò)增強(qiáng)CD8+CTL的活化、殺傷效應(yīng),以及細(xì)胞因子的分泌來(lái)提高a DLI的GVL和GVHD效應(yīng),地西他濱可能通過(guò)增加免疫負(fù)調(diào)控Treg細(xì)胞及細(xì)胞因子TGF-β、IL-10免疫抑制作用降低靶器官發(fā)生GVHD的嚴(yán)重程度,而其GVL效應(yīng)相關(guān)細(xì)胞及細(xì)胞因子與a DLI組并無(wú)差異,進(jìn)而在不影響抗白血病效應(yīng)同時(shí)降低嚴(yán)重GVHD發(fā)生而延長(zhǎng)移植后復(fù)發(fā)小鼠的生存時(shí)間。
【關(guān)鍵詞】：供體淋巴細(xì)胞輸注 紅白血病 急性白血病 異基因骨髓移植 復(fù)發(fā) 小鼠模型 干擾素-α 地西他濱
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 材料與方法16-24
• 一、實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 二、實(shí)驗(yàn)方法17-24
• 結(jié)果24-35
• 討論35-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 結(jié)論42-43
• 綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 英文縮略詞匯表51-53
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文53-54
• 致謝54-56

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;地西他濱將在中國(guó)上市[J];臨床合理用藥雜志;2009年15期

2 李娟;嚴(yán)魯萍;許亞梅;;地西他濱配合中藥治療骨髓增生異常綜合征1例[J];貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年02期

3 高沖;陳寶安;劉苒;徐昕;丁家華;王駿;程堅(jiān);趙剛;余正平;宋慧慧;鮑文;;地西他濱治療骨髓增生異常綜合征一例報(bào)告[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2010年02期

4 宋慧慧;陳寶安;劉苒;高沖;丁家華;孫耘玉;王駿;程堅(jiān);趙剛;余正平;鮑文;;地西他濱3d方案治療骨髓增生異常綜合征療效討論附兩例病例報(bào)道[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年03期

5 譚振清;羅自勉;周新伏;;低劑量地西他濱治療骨髓增生異常綜合征的療效分析[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年08期

6 李倩;鄭智茵;;地西他濱治療中危骨髓增生異常綜合征2例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2013年12期

7 朱小勤;邱仲川;陳s

本文編號(hào)：506337