本文關(guān)鍵詞：共刺激分子B7-H6在腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的表達(dá)及生物學(xué)意義的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腦膠質(zhì)瘤是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的惡性腫瘤,其惡性程度高、患者生存期短、易復(fù)發(fā)。膠質(zhì)瘤最多發(fā)的區(qū)域是大腦,占大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的30%以及大腦惡性腫瘤的80%。也已表明,腦膠質(zhì)瘤的惡性生物學(xué)特征與一群具有增殖、自我更新和分化能力干細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞相關(guān),膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)以及對放療、化療的耐受作用中均起著重要的作用。B7-H6是B7共刺激分子家族的新成員,是NK細(xì)胞激活受體NKp30的配體,能夠激活NK細(xì)胞的殺傷活性。B7-H6在多種腫瘤細(xì)胞中存在表達(dá)而在健康成人組織中卻不表達(dá)。目前研究表明B7-H6能夠在體外激活NK細(xì)胞的活性增強(qiáng)其對靶細(xì)胞的殺傷能力,并且有一部分研究報道了B7-H6能夠抑制NK細(xì)胞活性。鑒此B7-H6分子在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的確切意義及其具體發(fā)揮作用的機(jī)制仍有待進(jìn)一步探討。本課題首先采用亞克隆的方法從人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87中分離得到膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞,并檢測了B7家族分子的表達(dá)水平。發(fā)現(xiàn)相比U87細(xì)胞株,U87來源的腫瘤干樣細(xì)胞中B7-H6不論在基因還是蛋白水平均顯著上調(diào)表達(dá)。在此基礎(chǔ)上,使用siRNA下調(diào)B7-H6的表達(dá),進(jìn)一步研究了其對細(xì)胞增殖能力以及對NK細(xì)胞殺傷能力的影響。進(jìn)而,分析了B7-H6分子在臨床標(biāo)本中的表達(dá)以及其臨床意義。本研究發(fā)現(xiàn)了B7-H6分子在腦膠質(zhì)瘤特別是膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞中異常表達(dá)及其意義,并對其可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。第一部分人腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的獲取及鑒定【目的】:從人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87中分離并鑒定腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞。【方法】:使用亞克隆的方法并利用腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞在體外形成神經(jīng)細(xì)胞球的特性,從U87細(xì)胞株中篩選得到腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞;利用RT-PCR和流式檢測干性分子(Sox2、CD133、Nestin、CXCR4)的表達(dá);通過CCK-8檢測化療藥物殺傷作用鑒定其是否具有耐藥特性�！窘Y(jié)果】:(1)使用亞克隆方法分離獲得的腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞并能在體外形成神經(jīng)細(xì)胞球;(2)腫瘤干樣細(xì)胞在mrna或蛋白水平上上調(diào)表達(dá)多種干細(xì)胞相關(guān)基因(sox2、cd133、nestin、cxcr4);(3)腫瘤干樣細(xì)胞與初始u87細(xì)胞株相比具有對化療藥物顯著的耐受性�！窘Y(jié)論】:成功從u87細(xì)胞株中分離并鑒定得到腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞。第二部分b7-h6在u87來源的腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)并與細(xì)胞增殖和nk細(xì)胞殺傷相關(guān)【目的】:分析b7家族分子在膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞上的表達(dá),并探討顯著上調(diào)表達(dá)的b7-h6分子在膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞上表達(dá)的意義�！痉椒ā�:通過rt-pcr及流式分析獲得的腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞b7家族的表達(dá);采用sirna干擾下調(diào)b7-h6表達(dá),并采用cck-8檢測細(xì)胞的增殖變化和化療藥物殺傷作用;采用cfse、pi雙標(biāo)流式檢測sirna干擾后腫瘤干樣細(xì)胞和nk細(xì)胞共培養(yǎng)時被殺傷的情況�！窘Y(jié)果】:(1)b7家族分子b7-h1、b7-h3、b7-h4和b7-h6在得到腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞中均表達(dá),與起始u87細(xì)胞相比,b7-h4呈現(xiàn)胞漿上調(diào)性表達(dá)而僅b7-h6顯著的上調(diào)表達(dá);(2)使用sirna干擾b7-h6表達(dá)后,膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的增殖能力受到抑制,并且c-myc基因的表達(dá)也發(fā)生下調(diào),但是對膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的耐藥性沒有顯著影響;(3)使用sirna干擾b7-h6表達(dá)后,nk細(xì)胞對b7-h6下調(diào)后的膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的殺傷作用有所增強(qiáng)�！窘Y(jié)論】:u87來源的膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞異常上調(diào)表達(dá)b7-h6,干擾實(shí)驗(yàn)證明,b7-h6具有促進(jìn)對腫瘤干樣細(xì)胞的增殖并抑制nk細(xì)胞的殺傷作用。第三部分b7-h6在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及臨床意義【目的】:探討b7-h6分子在腦膠質(zhì)瘤臨床中的表達(dá)及意義�！痉椒ā�:采用流式細(xì)胞術(shù)檢測6中不同腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中b7-h6和cxcr4的表達(dá);采用免疫組化檢測石蠟切片中b7-h6蛋白的表達(dá)及定位;采用rt-pcr檢測腦膠質(zhì)瘤樣本中b7-h6mrna水平的表達(dá)并分析與病例分級的關(guān)系。【結(jié)果】:(1)6株腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中5株不表達(dá)膜型b7-h6,只在細(xì)胞株uw28中檢測到了b7-h6的表達(dá),cxcr4的表達(dá)與b7-h6基本一致。(2)常規(guī)石蠟切片免疫組化結(jié)果分析顯示,正常腦組織不表達(dá)B7-H6蛋白,而在腦膠質(zhì)瘤組織中B7-H6蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)胞膜和胞漿表達(dá)的不同定位;(3)在76例臨床樣本中,B7-H6mRNA的表達(dá)水平在IV級樣本中顯著升高,與低級別相比存在顯著性差異(p0.05)。【結(jié)論】:B7-H6在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)存在一定的臨床意義。
【關(guān)鍵詞】：腦膠質(zhì)瘤 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 B7-H6 B7家族分子
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 研究背景12-21
• 一、人類腦膠質(zhì)瘤12
• 二、腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞12-15
• 1、腫瘤干細(xì)胞理論12-13
• 2、腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的特性13-14
• 3、腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞標(biāo)志物14-15
• 三、共刺激分子B7-H615-17
• 參考文獻(xiàn)17-21
• 第一部分 人腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的獲取及鑒定21-31
• 1 材料和方法21-25
• 1.1 材料21-22
• 1.2 方法22-25
• 1.3 統(tǒng)計分析采用25
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 2.1 U87來源GSCs的形態(tài)學(xué)觀察25
• 2.2 GSCs表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)基因25-26
• 2.3 GSCs呈現(xiàn)對化療藥物更強(qiáng)的耐受性26-27
• 3 討論27-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 第二部分 B7-H6在U87來源的腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞中的表達(dá)及作用31-46
• 1 材料和方法31-35
• 1.1 材料31-33
• 1.2 方法33-35
• 1.3 統(tǒng)計分析采用35
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-43
• 2.1 U87來源膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞中表達(dá)B7家族共刺激分子35-39
• 2.2 沉默B7-H6抑制GSCs增殖能力并下調(diào)c-Myc表達(dá)但與干細(xì)胞耐藥性無關(guān)39-40
• 2.3 沉默B7-H6后增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷能力40-43
• 3 討論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 第三部分 B7-H6在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及臨床意義46-52
• 1 材料和方法46-48
• 1.1 材料46-47
• 1.2 方法47-48
• 1.3 統(tǒng)計分析采用48
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-50
• 2.1 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株上的B7-H6的表達(dá)48-49
• 2.2 腦膠質(zhì)瘤組織中存在B7-H6蛋白的不同程度及不同定位的表達(dá)49
• 2.3 腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)B7-H6 mRNA并與病理分級相關(guān)49-50
• 3 討論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-52
• 總結(jié)與展望52-53
• 碩士學(xué)位攻讀期間發(fā)表論文53-54
• 本研究所獲得的基金資助54-55
• 中英文對照縮略詞表55-57
• 致謝57-58

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳翰卿;共刺激分子B7-H6在腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的表達(dá)及生物學(xué)意義的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：共刺激分子B7-H6在腦膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的表達(dá)及生物學(xué)意義的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：506282