本文關(guān)鍵詞：納米炭在乳腺癌腋窩淋巴結(jié)應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)與臨床研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤,轉(zhuǎn)移是引起患者死亡的主要原因。區(qū)域淋巴道轉(zhuǎn)移是其最早發(fā)生及最常見的轉(zhuǎn)移途徑,腋窩淋巴結(jié)的情況是乳腺癌獨(dú)立的重要預(yù)后因素。因此,準(zhǔn)確判斷其狀態(tài),徹底清除陽性淋巴結(jié)是乳腺癌診斷及綜合治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。由于條件和技術(shù)限制,前哨淋巴結(jié)活檢在國內(nèi)尚未得到推廣普及,乳腺癌腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)仍是浸潤性乳腺癌最常用的治療方式。在清掃腋窩淋巴結(jié)的手術(shù)過程中難免會有遺漏掉的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié),而傳統(tǒng)的全身靜脈化療能進(jìn)入淋巴系統(tǒng)的藥物量較低,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞不能得到有效的殺傷,造成乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,影響患者預(yù)后及生存。為此,尋找一種淋巴示蹤劑,不但能夠示蹤淋巴結(jié),便于識別及手術(shù)清除,同時(shí)還能將吸附的化療藥帶入淋巴系統(tǒng),緩慢釋放藥物進(jìn)行靶向淋巴化療就顯得尤為重要。據(jù)報(bào)道,納米炭是一種安全有效的淋巴示蹤劑和理想的藥物載體。而表阿霉素是治療乳腺癌常用有效的藥物之一。針對上述問題,本研究以納米炭吸附表阿霉素對乳腺癌腋窩淋巴結(jié)示蹤及靶向化療進(jìn)行初步探索研究。首先,進(jìn)行納米炭與表阿霉素最合適的吸附配比及解吸附實(shí)驗(yàn),其次,用乳腺癌兩種細(xì)胞系MDA-MB-231和MCF-7進(jìn)行體外培養(yǎng),研究納米炭-表阿霉素對兩種細(xì)胞的體外殺傷或增殖抑制作用,最后,按納入標(biāo)準(zhǔn)收集臨床病例及淋巴結(jié)組織標(biāo)本,初步研究納米炭及納米炭-表阿霉素混懸液對人乳腺癌腋窩淋巴結(jié)的示蹤和靶向化療作用,為臨床乳腺癌的治療提供新的思路。研究方法和主要結(jié)果1.納米炭對表阿霉素的吸附、解吸附實(shí)驗(yàn)研究方法:利用高效液相色譜質(zhì)譜(LC-MS/MS)法和透析法測定納米炭對不同濃度表阿霉素的吸附和釋放作用。結(jié)果:納米炭對表阿霉素具有良好的吸附性,1ml(50mg)納米炭與2ml濃度為2.5mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml表阿霉素吸附率分別為94.66%、85.96%、80.12%、71.09%、69.03%,隨著藥物濃度的增加,吸附率逐漸降低,達(dá)飽和后吸附率穩(wěn)定。1 ml(50mg)納米炭與2 ml濃度為5 mg/ml表阿霉素吸附后可以緩慢釋放表阿霉素,沒有突釋現(xiàn)象發(fā)現(xiàn),48 h后趨于平衡,累積釋放率可達(dá)到65%左右。2.納米炭-表阿霉素對乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用研究方法:采用不同濃度的cnp-epi處理mda-mb-231、mcf-7細(xì)胞,cck-8法測定不同濃度、不同時(shí)間對mda-mb-231、mcf-7細(xì)胞增殖的抑制作用;根據(jù)測定的ic50選取5μg/mlcnp-epi,相應(yīng)濃度25μg/mlcnp及僅加培養(yǎng)基作用24h后,觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,流式細(xì)胞儀(flowcytometry,fcm)測定細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:在1μg/ml~200μg/ml濃度范圍內(nèi),cnp-epi對乳腺癌mda-mb-231、mcf-7細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng),48h后仍有增加的趨勢,但逐漸趨于穩(wěn)定,且各時(shí)間段內(nèi)對細(xì)胞的抑制率與藥物濃度呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系,與正常對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而相應(yīng)各濃度cnp對細(xì)胞的增殖抑制作用不明顯;5μg/mlcnp-epi作用細(xì)胞24h后,顯微鏡下可以看到大量的細(xì)胞死亡,正常對照組和相應(yīng)濃度的cnp組細(xì)胞生長未見明顯異常;流式細(xì)胞儀檢測,cnp-epi組作用兩種細(xì)胞24h后,mda-mb-231細(xì)胞的凋亡率為(14.37±6.25)%,死亡率可達(dá)(80.70±6.20)%;mcf-7細(xì)胞晚期凋亡率為(14.57±2.41)%,死亡率可達(dá)(78.63±0.55)%,分別與相應(yīng)濃度cnp組及正常對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.納米炭混懸液在乳腺癌腋窩淋巴結(jié)示蹤效果的臨床研究方法:將我科2012年5月至2014年6月收治的60例乳腺癌患者隨機(jī)分為a組、b組、c組。a組20例,于術(shù)前1天在乳暈周圍分4點(diǎn)皮下注射納米炭混懸液1ml;b組20例,于術(shù)前3天在乳暈周圍分4點(diǎn)皮下注射納米炭混懸液1ml;c組20例,于術(shù)前7天在乳暈周圍分4點(diǎn)皮下注射納米炭混懸液1ml。手術(shù)方式采用開放乳腺癌改良根治術(shù)或腔鏡下皮下腺體切除加腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)或乳腺癌局部擴(kuò)大切除加腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù),術(shù)后分別記錄淋巴結(jié)清掃數(shù)目、淋巴結(jié)黑染、轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果:a組共清除淋巴結(jié)430枚,平均21.5±5.8枚;b組共清除淋巴結(jié)384枚,平均19.2±4.9枚;c組共清除淋巴結(jié)380枚,平均19.0±5.8枚;a組、b組、c組平均每例患者清除淋巴結(jié)數(shù)目比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。a組清除的430枚淋巴結(jié)中,黑染337枚,黑染率78.4%;b組清除的384枚淋巴結(jié)中,黑染248枚,黑染率64.6%;c組清除的380枚淋巴結(jié)中,黑染166枚,黑染率43.7%;三組間淋巴結(jié)黑染率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),可以認(rèn)為三組清除淋巴結(jié)總體黑染率之間有差別,a組淋巴結(jié)黑染率最高,c組淋巴結(jié)黑染率最低。a組共清除轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)40枚,其中黑染淋巴結(jié)28枚,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中黑染率70.0%(28/40);b組共清除轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)54枚,其中黑染淋巴結(jié)33枚,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中黑染率為61.1%(33/54);c組共清除轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)39枚,其中黑染淋巴結(jié)22枚,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中黑染率56.4%(22/39)。三組比較,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的黑染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.納米炭-表阿霉素在乳腺癌陽性淋巴結(jié)靶向化療中作用的研究方法:將我科2014年2月至2014年12月收治的90例乳腺癌患者隨機(jī)分為對照組、示蹤組、載藥組。對照組30例,未注射任何示蹤劑。示蹤組30例于術(shù)前24h在乳暈周圍分4點(diǎn)皮下注射納米炭混懸液1ml。載藥組30例于術(shù)前24h在乳暈周圍分4點(diǎn)皮下注射納米炭-表阿霉素混懸液3ml。手術(shù)方式采用開放乳腺癌改良根治術(shù)或腔鏡下皮下腺體切除加腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)或乳腺癌局部擴(kuò)大切除加腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù),每個患者選取淋巴結(jié)均不超過2枚。將所取淋巴結(jié)平均分成兩份,一份送常規(guī)病理學(xué)檢查,另一份再平均分成兩小份,一份福爾馬林固定,石蠟包埋備做細(xì)胞凋亡和免疫組化檢查,另一份置于-70℃冰箱冷藏保存,做表阿霉素濃度測定用。剩余淋巴結(jié)均送病理科檢查。常規(guī)he染色篩選出有癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié),載藥、示蹤組選取黑染及未黑染的癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié),對照組選取癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)連續(xù)切片,做免疫組化ki-67染色和tunel染色。結(jié)果:載藥組黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃度為(2063.27±1236.39)ng/g,未黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃度為(108.77±96.39)ng/g;示蹤組黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃度為(143.72±89.36)ng/g,未黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃度為(110.68±56.00)ng/g;對照組淋巴結(jié)中表阿霉素濃度為(125.85±72.29)ng/g;載藥組黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃度明顯高于示蹤組黑染、未黑染和對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);載藥組未黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃度同示蹤組黑染、未黑染和對照組比較,無明顯差異(p0.05);示蹤組黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃與示蹤組未黑染和對照組之間兩兩比較,無顯著差異(p0.05);載藥組黑染淋巴結(jié)中表阿霉素濃度明顯高于未黑染淋巴結(jié),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);載藥組黑染癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞ki-67增殖指數(shù)為(2.34±0.54)%;示蹤組黑染癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞ki-67增殖指數(shù)為(2.49±1.37)%;對照組癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞ki-67增殖指數(shù)為(4.81±3.56)%;三組癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞ki-67增殖指數(shù)無顯著差異(p0.05)載藥組黑染癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞凋亡指數(shù)為(14.19±6.96)%;示蹤組黑染癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞凋亡指數(shù)為(7.59±2.84)%;對照組癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞凋亡指數(shù)為(10.24±3.47)%;三組癌細(xì)胞凋亡指數(shù)無顯著差異(p0.05)結(jié)論1、納米炭對表阿霉素具有良好的吸附性能和緩釋作用,1ml納米炭與2ml表阿霉素濃度為5mg/ml~10mg/ml混合配比較合適;2、CNP-EPI混懸液對人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞增殖有明顯抑制或殺傷作用,其抑制作用是通過其緩慢釋放的表阿霉素直接殺傷癌細(xì)胞或誘導(dǎo)其凋亡實(shí)現(xiàn);3、術(shù)前1天乳暈周圍皮下注射納米炭混懸液腋窩淋巴結(jié)黑染率較高,可達(dá)到良好的淋巴示蹤效果;轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)也大部分染色,便于術(shù)中辨認(rèn),有助于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)清除;4、納米炭-表阿霉素混懸液既可示蹤腋窩淋巴結(jié)又能增加黑染癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中化療藥物濃度,延長化療藥物在淋巴結(jié)中的作用時(shí)間,可能會起到淋巴結(jié)靶向化療的作用。
【關(guān)鍵詞】：納米炭 表阿霉素 MDA-MB-231 MCF-7 乳腺癌 腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 英文摘要6-11
• 中文摘要11-15
• 第一章 前言15-17
• 第二章 納米炭對表阿霉素的吸附、解吸附實(shí)驗(yàn)研究17-25
• 2.1 材料與方法17-19
• 2.2 結(jié)果19-23
• 2.3 討論23-24
• 2.4 小結(jié)24-25
• 第三章 納米炭-表阿霉素對乳腺癌細(xì)胞增殖抑制作用的研究25-36
• 3.1 材料與方法25-28
• 3.2 結(jié)果28-34
• 3.3 討論34-35
• 3.4 小結(jié)35-36
• 第四章 納米炭混懸液在乳腺癌腋窩淋巴結(jié)示蹤效果的臨床研究36-43
• 4.1 材料與方法36-37
• 4.2 結(jié)果37-41
• 4.3 討論41
• 4.4 小結(jié)41-43
• 第五章 納米炭-表阿霉素在乳腺癌陽性淋巴結(jié)靶向化療中作用的研究43-57
• 5.1 材料與方法43-49
• 5.2 結(jié)果49-54
• 5.3 討論54-56
• 5.4 小結(jié)56-57
• 全文結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 文獻(xiàn)綜述 納米炭在乳腺癌手術(shù)中的應(yīng)用研究進(jìn)展65-75
• 參考文獻(xiàn)70-75
• 碩士研究生期間發(fā)表的論文75-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：納米炭在乳腺癌腋窩淋巴結(jié)應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)與臨床研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：506393