本文關(guān)鍵詞：VPS4B與肝細(xì)胞肝癌的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的1.探究VPS4B在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)情況及其與肝細(xì)胞肝癌患者生存預(yù)后之間的關(guān)系,初步分析VPS4B異常表達(dá)與HCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。2.利用血清饑餓釋放及小干擾試驗研究VPS4B在Huh7和HepG2肝癌細(xì)胞株中表達(dá)的變化,初步探討VPS4B在細(xì)胞增殖過程中的作用,旨在進(jìn)一步揭示肝細(xì)胞肝癌形成的分子發(fā)病機(jī)制,以期為其治療提供新的靶點。方法1.在組織學(xué)水平上,首先采用Western blot方法檢測8對肝細(xì)胞肝癌患者肝癌組織及其對應(yīng)的癌旁組織中VPS4B蛋白的表達(dá)情況。其次,運用免疫組化方法檢測98例肝細(xì)胞肝癌組織石蠟切片中VPS4B和增殖指標(biāo)Ki-67的表達(dá)情況,并統(tǒng)計分析VPS4B、Ki-67與肝細(xì)胞肝癌患者的年齡、性別、甲胎蛋白水平、肝炎、肝硬化、腫瘤分級、腫瘤體積大小及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理因素的相關(guān)性。此外,通過對上述患者進(jìn)行隨訪并根據(jù)隨訪結(jié)果用Kaplan-Meier法分析VPS4B與肝細(xì)胞肝癌患者的生存率的關(guān)系,以及單因素和Cox危險比例模型多因素分析VPS4B表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系。2.在細(xì)胞學(xué)水平上,選取高表達(dá)VPS4B的肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞系HuH7、HepG2作為研究對象,將這兩種細(xì)胞系血清饑餓釋放同步化處理后,用流式細(xì)胞儀檢測兩株細(xì)胞的細(xì)胞周期的變化,Western blot檢測血清饑餓釋放過程中VPS4B、cyclin A和PCNA的表達(dá)情況。干擾VPS4B表達(dá)后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期及Western blot檢測VPS4B、cyclin A、PCNA的表達(dá)變化。結(jié)果1.Western blot及免疫組化結(jié)果均顯示,VPS4B在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)顯著高于對應(yīng)的癌旁肝組織;統(tǒng)計學(xué)分析提示VPS4B的表達(dá)強(qiáng)度與肝細(xì)胞肝癌病理分級(P=0.026)以及血管浸潤(P=0.033)顯著相關(guān);相關(guān)性分析研究表明VPS4B與Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)(r2=0.398;P=0.003);Kaplan-Meier分析顯示VPS4B在肝細(xì)胞肝癌中的高表達(dá)與患者總生存率的降低顯著相關(guān)(P0.01);單因素分析表明VPS4B與肝癌病人的不良預(yù)后有關(guān)(P=0.001);Cox危險比例模型分析顯示VPS4B可做為肝癌患者的一種獨立預(yù)后指標(biāo)(P=0.016)。2.通過血清饑餓使HuH7及Hep G2細(xì)胞生長周期停滯,血清釋放后刺激HuH7、HepG2細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞儀分析顯示血清饑餓時細(xì)胞大部分停滯于G0/G1期,一旦加入血清,細(xì)胞就從G1期重新進(jìn)入S期。此外,Western blot也表明VPS4BcyclinA、PCNA蛋白隨著細(xì)胞周期的進(jìn)展表達(dá)增加。小干擾內(nèi)源性VPS4B的表達(dá),可引起細(xì)胞增殖的抑制以及細(xì)胞周期的阻滯。結(jié)論1.VPS4B在肝細(xì)胞肝癌中高表達(dá),并且可作為一種獨立的與患者預(yù)后相關(guān)的指標(biāo),以上提示VPS4B可能與肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。2.在肝癌細(xì)胞增殖過程中,VPS4B表達(dá)上調(diào);而干擾VPS4B的表達(dá)后,肝癌細(xì)胞的生長則受到抑制。推測VPS4B可能參與細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)。3.鑒于VPS4B在肝細(xì)胞肝癌中的高表達(dá)及其對細(xì)胞周期及增殖的調(diào)控作用,提示其可作為肝細(xì)胞肝癌治療的重要分子靶點。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞肝癌 VPS4B 細(xì)胞增殖 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 緒論11-15
• 1.1 課題來源、研究的目的和意義11-12
• 1.2 國內(nèi)外研究概況12-13
• 1.3 論文的主要研究內(nèi)容13-15
• 第二章 材料與方法15-28
• 2.1 實驗材料及儀器設(shè)備15-20
• 2.1.1 組織標(biāo)本15
• 2.1.2 細(xì)胞株15
• 2.1.3 主要試劑15-20
• 2.1.4 實驗設(shè)備20
• 2.2 實驗方法20-28
• 2.2.1 Western blot操作流程20-22
• 2.2.2 病理切片的免疫組化22-25
• 2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)25
• 2.2.4 利用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000 瞬時轉(zhuǎn)染Hu H7及Hep G2細(xì)胞25-26
• 2.2.5 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞周期分布26-27
• 2.2.6 CCK-8 法檢測細(xì)胞增殖活性27-28
• 第三章 結(jié)果28-40
• 3.1 VPS4B在人肝細(xì)胞肝癌以及癌旁組織中的表達(dá)情況28-29
• 3.1.1 Western blot檢測VPS4B在8對肝癌及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況28-29
• 3.1.2 免疫組化方法檢測VPS4B和Ki-67 在不同分化程度的HCC中的表達(dá)情況29
• 3.2 VPS4B的表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌臨床病理因素的相關(guān)性分析29-31
• 3.3 VPS4B和Ki-67 在肝細(xì)胞肝癌中表達(dá)的相關(guān)性分析31
• 3.4 預(yù)后分析31-34
• 3.4.1 單因素生存分析31-33
• 3.4.2 VPS4B表達(dá)水平與HCC患者生存率的相關(guān)分析33
• 3.4.3 Cox比例風(fēng)險模型多因素生存分析33-34
• 3.5 VPS4B在正常肝細(xì)胞株及不同肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)34-35
• 3.6 血清饑餓釋放后VPS4B、cyclin A和PCNA表達(dá)水平變化35-37
• 3.6.1 血清饑餓釋放對Huh7及Hep G2細(xì)胞周期的影響35-36
• 3.6.2 肝癌細(xì)胞增殖過程中VPS4B、cyclin A及PCNA蛋白水平變化36-37
• 3.7 干擾VPS4B表達(dá)對于細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響37-40
• 3.7.1 干擾VPS4B表達(dá)對細(xì)胞增殖的影響37-39
• 3.7.2 干擾VPS4B表達(dá)對細(xì)胞周期的影響39-40
• 第四章 討論40-43
• 第五章 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 英文縮寫詞表47-49
• 綜述49-60
• 綜述參考文獻(xiàn)55-60
• 在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文60-61
• 致謝61

  本文關(guān)鍵詞：VPS4B與肝細(xì)胞肝癌的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：506049