本文關鍵詞：VPS4B與肝細胞肝癌的相關性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的1.探究VPS4B在肝細胞肝癌中的表達情況及其與肝細胞肝癌患者生存預后之間的關系,初步分析VPS4B異常表達與HCC發(fā)生發(fā)展的關系。2.利用血清饑餓釋放及小干擾試驗研究VPS4B在Huh7和HepG2肝癌細胞株中表達的變化,初步探討VPS4B在細胞增殖過程中的作用,旨在進一步揭示肝細胞肝癌形成的分子發(fā)病機制,以期為其治療提供新的靶點。方法1.在組織學水平上,首先采用Western blot方法檢測8對肝細胞肝癌患者肝癌組織及其對應的癌旁組織中VPS4B蛋白的表達情況。其次,運用免疫組化方法檢測98例肝細胞肝癌組織石蠟切片中VPS4B和增殖指標Ki-67的表達情況,并統(tǒng)計分析VPS4B、Ki-67與肝細胞肝癌患者的年齡、性別、甲胎蛋白水平、肝炎、肝硬化、腫瘤分級、腫瘤體積大小及遠處轉(zhuǎn)移等臨床病理因素的相關性。此外,通過對上述患者進行隨訪并根據(jù)隨訪結果用Kaplan-Meier法分析VPS4B與肝細胞肝癌患者的生存率的關系,以及單因素和Cox危險比例模型多因素分析VPS4B表達水平與患者預后的關系。2.在細胞學水平上,選取高表達VPS4B的肝細胞肝癌細胞系HuH7、HepG2作為研究對象,將這兩種細胞系血清饑餓釋放同步化處理后,用流式細胞儀檢測兩株細胞的細胞周期的變化,Western blot檢測血清饑餓釋放過程中VPS4B、cyclin A和PCNA的表達情況。干擾VPS4B表達后用流式細胞儀檢測細胞周期及Western blot檢測VPS4B、cyclin A、PCNA的表達變化。結果1.Western blot及免疫組化結果均顯示,VPS4B在肝細胞肝癌組織中的表達顯著高于對應的癌旁肝組織;統(tǒng)計學分析提示VPS4B的表達強度與肝細胞肝癌病理分級(P=0.026)以及血管浸潤(P=0.033)顯著相關;相關性分析研究表明VPS4B與Ki-67表達呈正相關(r2=0.398;P=0.003);Kaplan-Meier分析顯示VPS4B在肝細胞肝癌中的高表達與患者總生存率的降低顯著相關(P0.01);單因素分析表明VPS4B與肝癌病人的不良預后有關(P=0.001);Cox危險比例模型分析顯示VPS4B可做為肝癌患者的一種獨立預后指標(P=0.016)。2.通過血清饑餓使HuH7及Hep G2細胞生長周期停滯,血清釋放后刺激HuH7、HepG2細胞增殖。流式細胞儀分析顯示血清饑餓時細胞大部分停滯于G0/G1期,一旦加入血清,細胞就從G1期重新進入S期。此外,Western blot也表明VPS4BcyclinA、PCNA蛋白隨著細胞周期的進展表達增加。小干擾內(nèi)源性VPS4B的表達,可引起細胞增殖的抑制以及細胞周期的阻滯。結論1.VPS4B在肝細胞肝癌中高表達,并且可作為一種獨立的與患者預后相關的指標,以上提示VPS4B可能與肝細胞肝癌的發(fā)生發(fā)展有關。2.在肝癌細胞增殖過程中,VPS4B表達上調(diào);而干擾VPS4B的表達后,肝癌細胞的生長則受到抑制。推測VPS4B可能參與細胞周期進程和細胞增殖的調(diào)節(jié)。3.鑒于VPS4B在肝細胞肝癌中的高表達及其對細胞周期及增殖的調(diào)控作用,提示其可作為肝細胞肝癌治療的重要分子靶點。
【關鍵詞】：肝細胞肝癌 VPS4B 細胞增殖 預后
【學位授予單位】：南通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 緒論11-15
• 1.1 課題來源、研究的目的和意義11-12
• 1.2 國內(nèi)外研究概況12-13
• 1.3 論文的主要研究內(nèi)容13-15
• 第二章 材料與方法15-28
• 2.1 實驗材料及儀器設備15-20
• 2.1.1 組織標本15
• 2.1.2 細胞株15
• 2.1.3 主要試劑15-20
• 2.1.4 實驗設備20
• 2.2 實驗方法20-28
• 2.2.1 Western blot操作流程20-22
• 2.2.2 病理切片的免疫組化22-25
• 2.2.3 細胞培養(yǎng)25
• 2.2.4 利用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000 瞬時轉(zhuǎn)染Hu H7及Hep G2細胞25-26
• 2.2.5 流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期分布26-27
• 2.2.6 CCK-8 法檢測細胞增殖活性27-28
• 第三章 結果28-40
• 3.1 VPS4B在人肝細胞肝癌以及癌旁組織中的表達情況28-29
• 3.1.1 Western blot檢測VPS4B在8對肝癌及相應癌旁組織中的表達情況28-29
• 3.1.2 免疫組化方法檢測VPS4B和Ki-67 在不同分化程度的HCC中的表達情況29
• 3.2 VPS4B的表達與肝細胞肝癌臨床病理因素的相關性分析29-31
• 3.3 VPS4B和Ki-67 在肝細胞肝癌中表達的相關性分析31
• 3.4 預后分析31-34
• 3.4.1 單因素生存分析31-33
• 3.4.2 VPS4B表達水平與HCC患者生存率的相關分析33
• 3.4.3 Cox比例風險模型多因素生存分析33-34
• 3.5 VPS4B在正常肝細胞株及不同肝癌細胞株中的表達34-35
• 3.6 血清饑餓釋放后VPS4B、cyclin A和PCNA表達水平變化35-37
• 3.6.1 血清饑餓釋放對Huh7及Hep G2細胞周期的影響35-36
• 3.6.2 肝癌細胞增殖過程中VPS4B、cyclin A及PCNA蛋白水平變化36-37
• 3.7 干擾VPS4B表達對于細胞增殖和細胞周期的影響37-40
• 3.7.1 干擾VPS4B表達對細胞增殖的影響37-39
• 3.7.2 干擾VPS4B表達對細胞周期的影響39-40
• 第四章 討論40-43
• 第五章 結論43-44
• 參考文獻44-47
• 英文縮寫詞表47-49
• 綜述49-60
• 綜述參考文獻55-60
• 在攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文60-61
• 致謝61

  本文關鍵詞：VPS4B與肝細胞肝癌的相關性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：506049