本文關(guān)鍵詞：ALA介導(dǎo)的光動(dòng)力療法誘導(dǎo)皮膚癌A375細(xì)胞與A431細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究5-α氨基酮戊酸(ALA)介導(dǎo)的光動(dòng)力療法(ALA-PDT)對(duì)皮膚癌A375細(xì)胞與A431細(xì)胞的殺傷作用及其誘導(dǎo)其凋亡機(jī)制,為ALA-PDT應(yīng)用于臨床提供治療參數(shù)和理論依據(jù)。方法:以皮膚黑色素瘤A375細(xì)胞與鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞為研究對(duì)象,1.研究ALA-PDT對(duì)皮膚癌細(xì)胞的殺傷作用,A375細(xì)胞與A431細(xì)胞與不同的ALA濃度孵育,在PDT作用后不同的時(shí)間,用噻唑藍(lán)法(MTT)法檢測(cè)其增殖抑制率。2.研究ALA-PDT誘導(dǎo)A375細(xì)胞與A431細(xì)胞發(fā)生凋亡機(jī)制。首先用TUNEL染色法分析ALA-PDT作用后A375細(xì)胞與A431細(xì)胞的凋亡率;接著,用Western-blot方法檢測(cè)ALA-PDT后兩株細(xì)胞凋亡過(guò)程中,外源性凋亡途徑相關(guān)蛋白Caspase8,線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白Bcl-2,Bax與Caspase9以及Caspase3與PARP的表達(dá)情況;最后,用免疫組化法檢測(cè)A375細(xì)胞與A431細(xì)胞在ALA-PDT作用前后細(xì)胞色素c(Cyt-c)在細(xì)胞內(nèi)的分布情況,旨在從內(nèi)源性與外源性途徑揭示ALA-PDT誘發(fā)皮膚癌細(xì)胞凋亡機(jī)制。結(jié)果:1.MTT比色法結(jié)果顯示不同濃度的ALA-PDT組對(duì)A375細(xì)胞與A431細(xì)胞均有殺傷作用,并與ALA藥物濃度和ALA-PDT作用后的時(shí)間密切相關(guān),在0.4mmol/L ALA-PDT作用后4h,對(duì)A375細(xì)胞的增殖抑制作用達(dá)到最大程度;在0.6mmol/L ALA-PDT作用后8h,對(duì)A431細(xì)胞的增殖抑制作用達(dá)到最大程度,趨于平衡。2.TUNEL染色結(jié)果顯示ALA-PDT作用后陽(yáng)性反應(yīng)在細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮區(qū)出現(xiàn)棕黃色沉淀反應(yīng),即細(xì)胞發(fā)生凋亡,且呈時(shí)間依賴性增加。A375細(xì)胞在ALA-PDT作用后0.5h,1h,2h,4h與6h的凋亡率分別是11.79%,44.84%,63.75%,75.33%與90%。A431細(xì)胞在ALA-PDT作用后1h,2h,4h,6h與8h的凋亡率分別是10%,25%,55.5%,61.54%與70%。3.Western blot的檢測(cè)結(jié)果顯示ALA-PDT作用激活了A375細(xì)胞與A431細(xì)胞的外源性凋亡途徑和線粒體凋亡途徑,啟動(dòng)了Bcl-2家族及Caspase家族參與凋亡過(guò)程。隨著ALA-PDT作用后孵育時(shí)間的延長(zhǎng),抗凋亡蛋白Bcl-2下調(diào),促凋亡蛋白Bax上調(diào);出現(xiàn)Caspase蛋白的級(jí)聯(lián)反應(yīng)及剪切。A375細(xì)胞在ALA-PDT作用后0.5h,1h與2h出現(xiàn)Caspase3,8與9剪切體且上調(diào);但是在ALA-PDT作用后4h與6h上述剪切體下調(diào)。A431細(xì)胞在ALA-PDT作用后1h,2h與4h出現(xiàn)上述剪切體且上調(diào);但是ALA-PDT作用后6h與8h上述剪切體下調(diào);而且,ALA-PDT作用后,A375細(xì)胞與A431細(xì)胞出現(xiàn)PARP前體的下調(diào)和剪切體的上調(diào),最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。4.Cyt-c免疫組化結(jié)果顯示ALA-PDT作用前,陽(yáng)性反應(yīng)在皮膚癌A375細(xì)胞與A431細(xì)胞胞質(zhì)核周出現(xiàn)棕黑色沉淀;ALA-PDT作用后,棕黑色沉淀向遠(yuǎn)離核周的胞質(zhì)區(qū)均勻鋪展,即細(xì)胞色素C在ALA-PDT作用后,由富含線粒體的核周區(qū)釋放至胞質(zhì),參與細(xì)胞的凋亡過(guò)程。結(jié)論:ALA-PDT能明顯抑制A375細(xì)胞與A431細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。凋亡的發(fā)生與啟動(dòng)細(xì)胞外源性凋亡途徑和細(xì)胞色素C相關(guān)的線粒體凋亡途徑相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：5-α氨基酮戊酸 光動(dòng)力療法 皮膚癌 凋亡
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.5;R730.43
【目錄】：

• 英文縮略詞4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-19
• 1 實(shí)驗(yàn)材料11-14
• 1.1 細(xì)胞系11
• 1.2 主要試劑11-12
• 1.3 主要儀器12
• 1.4 主要溶液的配制12-14
• 2 實(shí)驗(yàn)方法14-19
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)14
• 2.2 MTT比色法檢測(cè)ALA-PDT對(duì)A375 細(xì)胞與A431 細(xì)胞的殺傷作用14-15
• 2.3 TUNEL染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率15-16
• 2.4 Western blot方法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白16-18
• 2.5 免疫組化-SABC法檢測(cè)Cyt-c的細(xì)胞定位18-19
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19
• 結(jié)果19-26
• 1 ALA-PDT可顯著殺傷A375 細(xì)胞與A431 細(xì)胞19-22
• 2 TUNEL染色法的檢測(cè)結(jié)果22-23
• 3 Western-blot檢測(cè)結(jié)果23-25
• 4 免疫組化-SABC法檢測(cè)Cyt-c蛋白的表達(dá)25-26
• 討論26-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 綜述34-41
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 致謝41

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本文編號(hào)：505314