本文關(guān)鍵詞：GEBP11短肽用于胃癌血管的共聚焦激光顯微內(nèi)鏡分子成像研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】胃癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,早期診斷及治療能顯著改善胃癌患者的預(yù)后。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤血管生成在腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移等過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用,早期腫瘤血管表達(dá)的異質(zhì)性分子與腫瘤患者的預(yù)后關(guān)系密切。目前腫瘤血管診斷的技術(shù)手段主要為免疫組化染色進(jìn)行微血管密度(Micro vessel density,MVD)測(cè)定,但其因存在侵入性、過(guò)程繁瑣等不足,難以實(shí)現(xiàn)腫瘤血管的實(shí)時(shí)定位與在體檢測(cè),使其應(yīng)用受到一定的限制。近年發(fā)展的共聚焦激光顯微內(nèi)鏡(Confocal Laser Endomicroscopy,CLE)技術(shù),能夠在內(nèi)鏡檢查的同時(shí)顯示細(xì)胞水平結(jié)構(gòu),進(jìn)行實(shí)時(shí)病理診斷,為實(shí)現(xiàn)胃癌血管的活體檢測(cè)提供了契機(jī)。利用特定的技術(shù)手段將CLE對(duì)比劑與腫瘤血管異質(zhì)性分子耦聯(lián),通過(guò)CLE進(jìn)行腫瘤血管靶向分子成像,有望實(shí)現(xiàn)胃癌血管的活體實(shí)時(shí)檢測(cè)與動(dòng)態(tài)評(píng)估。前期工作中,我們篩選出能與胃癌血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性結(jié)合的環(huán)狀短肽GEBP11(具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán))并用131I進(jìn)行標(biāo)記,制備了同位素探針,成功進(jìn)行了單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)成像(Single photon emission computed tomography,SPECT)、契倫科夫分子成像,證實(shí)其具有良好的在體腫瘤血管靶向性和活體成像效果。本課題擬通過(guò)制備CLE分子成像探針FITC-GEBP11,進(jìn)行體外細(xì)胞、荷瘤裸鼠及新鮮人體胃癌組織的CLE分子成像,評(píng)價(jià)FITC-GEBP11短肽探針在胃癌血管靶向CLE分子成像中的效果,探索胃癌血管CLE分子成像新模式,有可能為胃癌血管靶向診斷提供內(nèi)窺鏡分子影像新方法�！灸康摹�1.評(píng)價(jià)短肽探針FITC-GEBP11在胃癌血管CLE分子成像中的效果;2.探討靶向胃癌血管的CLE分子成像新模式診斷胃癌的可行性�！痉椒ā�1.構(gòu)建胃癌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)模型(Co-HUVECs),制備短肽熒光探針FITC-GEBP11,與Co-HUVECs共孵育后,通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)、免疫細(xì)胞熒光及細(xì)胞CLE成像,體外檢測(cè)短肽探針FITC-GEBP11與Co-HUVECs的結(jié)合特異性;SGC7901和HUVECs為對(duì)照細(xì)胞,FITC-URP為對(duì)照肽。2.用SGC7901-Luc細(xì)胞構(gòu)建裸鼠皮下及原位荷人胃癌移植瘤模型,應(yīng)用IVIS成像儀對(duì)荷瘤鼠進(jìn)行生物自發(fā)光成像掃描,取腫瘤直徑為0.8-1.0cm的裸鼠進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);通過(guò)尾靜脈向裸鼠體內(nèi)注入FITC-GEBP11短肽探針后,進(jìn)行整體及離體器官熒光信號(hào)檢測(cè),探索獲得最佳成像效果的藥物濃度和成像時(shí)間。3.在熒光信號(hào)最強(qiáng)時(shí)間點(diǎn)行活體荷瘤裸鼠腫瘤組織的CLE分子成像,鑒定FITC-GEBP11短肽探針的腫瘤靶向性及CLE活體腫瘤血管靶向成像的效果。4.CLE成像結(jié)束后,取裸鼠腫瘤組織迅速進(jìn)行冰凍切片,通過(guò)臺(tái)式共聚焦激光顯微鏡觀察FITC-GEBP11短肽探針與腫瘤血管的結(jié)合情況;將裸鼠腫瘤組織進(jìn)行HE染色,區(qū)分組織類(lèi)型。5.收集胃癌手術(shù)患者的新鮮胃癌組織和對(duì)應(yīng)的癌旁組織,在室溫下與FITC-GEBP11短肽探針共孵育30min后,進(jìn)行CLE分子成像,檢測(cè)與胃癌血管結(jié)合的FITC-GEBP11短肽探針的熒光信號(hào),探索胃癌血管CLE成像的可行性;對(duì)照組與FITC-URP短肽共孵育,處理方法相同。6.CLE成像結(jié)束后,迅速將人胃癌組織進(jìn)行冰凍切片,通過(guò)臺(tái)式共聚焦激光顯微鏡觀察FITC-GEBP11短肽探針與胃癌血管的結(jié)合情況;將人胃癌組織進(jìn)行HE染色,區(qū)分組織類(lèi)型�！窘Y(jié)果】1.FITC-GEBP11短肽探針的體外生物學(xué)活性鑒定1)成功構(gòu)建了胃癌SGC7901細(xì)胞與HUVECs共培養(yǎng)模型(Co-HUVECs);用FITC-GEBP11短肽探針處理細(xì)胞后,流式細(xì)胞技術(shù)顯示,在Co-HUVECs中檢測(cè)到較高的熒光信號(hào),對(duì)照細(xì)胞和對(duì)照肽組信號(hào)較低。2)細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)及體外細(xì)胞CLE結(jié)果證實(shí),FITC-GEBP11短肽探針能與Co-HUVECs特異性結(jié)合,且主要結(jié)合于細(xì)胞的胞膜和胞漿,對(duì)照細(xì)胞HUVECs、SGC7901及對(duì)照肽FITC-URP組呈弱結(jié)合或不結(jié)合。2.FITC-GEBP11短肽探針在荷人胃癌裸鼠中的活體CLE分子成像1)成功構(gòu)建荷人胃癌裸鼠皮下和原位移植瘤模型,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程無(wú)并發(fā)癥發(fā)生。2)FITC-GEBP11短肽探針以1μg/g體重的用量經(jīng)尾靜脈注入裸鼠體內(nèi),觀察到在裸鼠腫瘤組織部位有較強(qiáng)的信號(hào)聚集,并在24h左右時(shí)熒光強(qiáng)信號(hào)最強(qiáng);離體器官熒光成像結(jié)果顯示,FITC-GEBP11短肽探針能特異性濃聚于裸鼠腫瘤組織;胃腸組織及肝腎組織中觀察到較強(qiáng)的熒光信號(hào);對(duì)照肽FITC-URP組腫瘤組織部位未檢測(cè)到特異性的熒光信號(hào)。3)在荷人胃癌裸鼠皮下及原位移植瘤模型中,尾靜脈注射FITC-GEBP11短肽探針后,CLE在兩種動(dòng)物模型的裸鼠腫瘤組織中都可檢測(cè)到特異性的熒光信號(hào),對(duì)照肽FITC-URP組未檢測(cè)到特異性的熒光信號(hào)。4)將裸鼠腫瘤組織冰凍切片行免疫熒光結(jié)果證實(shí),FITC-GEBP11短肽探針能特異性靶向裸鼠腫瘤組織血管;HE染色證實(shí)為胃癌組織。3.離體人胃癌組織的血管靶向CLE分子成像1)共收集了28例行胃癌手術(shù)切除患者的新鮮胃癌組織和相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本;2)新鮮人體胃癌和癌旁組織與FITC-GEBP11短肽探針共孵育后,CLE在胃癌組織中可檢測(cè)到特異性的熒光信號(hào),癌旁組織和對(duì)照肽FITC-URP組無(wú)特異性熒光信號(hào);3)人體胃癌和癌旁組織進(jìn)行冰凍切片后的免疫熒光結(jié)果證實(shí),FITC-GEBP11短肽探針能特異性靶向結(jié)合于腫瘤組織血管;4)CLE掃描結(jié)果:在28例胃癌組織中有26例檢測(cè)到了特異性的熒光信號(hào)(+~+++);而癌旁組織標(biāo)本有8例僅能觀察到較弱的熒光信號(hào)(+),另外20例標(biāo)本未觀察到特異的熒光信號(hào)(-)。與癌旁組織相比,胃癌組織的CLE分子成像結(jié)果具有顯著性差異;腫瘤組織分化程度與CLE分子成像半定量結(jié)果具有較好的相關(guān)性(Spearman r=0.69,P0.001);利用GEBP11進(jìn)行CLE分子成像診斷胃癌與HE染色病理組織學(xué)診斷結(jié)果的一致性較好(Kappa=0.64,95%可信區(qū)間:0.35-0.84)�！窘Y(jié)論】1.成功制備FITC-GEBP11短肽探針,并進(jìn)行體外細(xì)胞CLE分子成像。成像結(jié)果證實(shí),FITC-GEBP11短肽能夠特異性結(jié)合于Co-HUVECs細(xì)胞的胞膜和胞漿,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供體外實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.FITC-GEBP11短肽探針經(jīng)尾靜脈注射入荷瘤裸鼠體內(nèi),大體熒光成像顯示:GEBP11短肽能特異性濃聚于裸鼠腫瘤組織;通過(guò)CLE分子成像能夠較好的檢測(cè)荷瘤裸鼠腫瘤組織的熒光信號(hào)。這表明,利用FITC-GEBP11短肽探針進(jìn)行靶向胃癌血管的活體CLE分子成像具有可行性。3.FITC-GEBP11短肽探針與離體新鮮人胃癌組織孵育后,能特異性結(jié)合于腫瘤組織血管;通過(guò)CLE分子成像檢測(cè)到特異結(jié)合于胃癌血管的高熒光信號(hào),能夠區(qū)別胃癌與癌旁組織,且組織分化程度越低,GEBP11陽(yáng)性率越高。胃粘膜局部應(yīng)用短肽熒光探針進(jìn)行靶向胃癌血管的CLE分子成像,有可能成為一種診斷胃癌的影像學(xué)新方法。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 血管生成 共聚焦激光顯微內(nèi)鏡(CLE) GEBP11 分子成像
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-8
• 中文摘要8-12
• Abstract12-16
• 前言16-18
• 文獻(xiàn)回顧18-38
• 1 胃癌與血管生成18-24
• 2 迅速發(fā)展的內(nèi)鏡檢查技術(shù)為胃癌的診斷提供了新方法24-26
• 3 共聚焦激光顯微內(nèi)鏡（CLE）在消化系疾病中的應(yīng)用進(jìn)展26-33
• 4 GEBP11研究背景33-38
• 第一部分 FITC-GEBP11短肽熒光探針的制備及體外生物學(xué)活性鑒定38-49
• 引言38
• 1 材料38-40
• 2 方法40-43
• 3 結(jié)果43-47
• 4 討論47-49
• 第二部分 FITC-GEBP11短肽探針在荷人胃癌裸鼠中的活體CLE分子成像49-60
• 引言49
• 1 材料49-50
• 2 方法50-54
• 3 結(jié)果54-58
• 4 討論58-60
• 第三部分 離體人胃癌組織的血管靶向CLE分子成像研究60-66
• 引言60
• 1 材料60-61
• 2 方法61-62
• 3 結(jié)果62-64
• 4 討論64-66
• 小結(jié)66-67
• 參考文獻(xiàn)67-79
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果79-81
• 致謝81-82

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