本文關鍵詞：GEBP11短肽用于胃癌血管的共聚焦激光顯微內鏡分子成像研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】胃癌是世界范圍內最常見的消化道惡性腫瘤之一,早期診斷及治療能顯著改善胃癌患者的預后。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤血管生成在腫瘤的生長、侵襲、轉移等過程中發(fā)揮著非常重要的作用,早期腫瘤血管表達的異質性分子與腫瘤患者的預后關系密切。目前腫瘤血管診斷的技術手段主要為免疫組化染色進行微血管密度(Micro vessel density,MVD)測定,但其因存在侵入性、過程繁瑣等不足,難以實現(xiàn)腫瘤血管的實時定位與在體檢測,使其應用受到一定的限制。近年發(fā)展的共聚焦激光顯微內鏡(Confocal Laser Endomicroscopy,CLE)技術,能夠在內鏡檢查的同時顯示細胞水平結構,進行實時病理診斷,為實現(xiàn)胃癌血管的活體檢測提供了契機。利用特定的技術手段將CLE對比劑與腫瘤血管異質性分子耦聯(lián),通過CLE進行腫瘤血管靶向分子成像,有望實現(xiàn)胃癌血管的活體實時檢測與動態(tài)評估。前期工作中,我們篩選出能與胃癌血管內皮細胞特異性結合的環(huán)狀短肽GEBP11(具有自主知識產權)并用131I進行標記,制備了同位素探針,成功進行了單光子發(fā)射計算機成像(Single photon emission computed tomography,SPECT)、契倫科夫分子成像,證實其具有良好的在體腫瘤血管靶向性和活體成像效果。本課題擬通過制備CLE分子成像探針FITC-GEBP11,進行體外細胞、荷瘤裸鼠及新鮮人體胃癌組織的CLE分子成像,評價FITC-GEBP11短肽探針在胃癌血管靶向CLE分子成像中的效果,探索胃癌血管CLE分子成像新模式,有可能為胃癌血管靶向診斷提供內窺鏡分子影像新方法�！灸康摹�1.評價短肽探針FITC-GEBP11在胃癌血管CLE分子成像中的效果;2.探討靶向胃癌血管的CLE分子成像新模式診斷胃癌的可行性�！痉椒ā�1.構建胃癌細胞與內皮細胞共培養(yǎng)模型(Co-HUVECs),制備短肽熒光探針FITC-GEBP11,與Co-HUVECs共孵育后,通過流式細胞技術、免疫細胞熒光及細胞CLE成像,體外檢測短肽探針FITC-GEBP11與Co-HUVECs的結合特異性;SGC7901和HUVECs為對照細胞,FITC-URP為對照肽。2.用SGC7901-Luc細胞構建裸鼠皮下及原位荷人胃癌移植瘤模型,應用IVIS成像儀對荷瘤鼠進行生物自發(fā)光成像掃描,取腫瘤直徑為0.8-1.0cm的裸鼠進行后續(xù)實驗;通過尾靜脈向裸鼠體內注入FITC-GEBP11短肽探針后,進行整體及離體器官熒光信號檢測,探索獲得最佳成像效果的藥物濃度和成像時間。3.在熒光信號最強時間點行活體荷瘤裸鼠腫瘤組織的CLE分子成像,鑒定FITC-GEBP11短肽探針的腫瘤靶向性及CLE活體腫瘤血管靶向成像的效果。4.CLE成像結束后,取裸鼠腫瘤組織迅速進行冰凍切片,通過臺式共聚焦激光顯微鏡觀察FITC-GEBP11短肽探針與腫瘤血管的結合情況;將裸鼠腫瘤組織進行HE染色,區(qū)分組織類型。5.收集胃癌手術患者的新鮮胃癌組織和對應的癌旁組織,在室溫下與FITC-GEBP11短肽探針共孵育30min后,進行CLE分子成像,檢測與胃癌血管結合的FITC-GEBP11短肽探針的熒光信號,探索胃癌血管CLE成像的可行性;對照組與FITC-URP短肽共孵育,處理方法相同。6.CLE成像結束后,迅速將人胃癌組織進行冰凍切片,通過臺式共聚焦激光顯微鏡觀察FITC-GEBP11短肽探針與胃癌血管的結合情況;將人胃癌組織進行HE染色,區(qū)分組織類型。【結果】1.FITC-GEBP11短肽探針的體外生物學活性鑒定1)成功構建了胃癌SGC7901細胞與HUVECs共培養(yǎng)模型(Co-HUVECs);用FITC-GEBP11短肽探針處理細胞后,流式細胞技術顯示,在Co-HUVECs中檢測到較高的熒光信號,對照細胞和對照肽組信號較低。2)細胞免疫熒光實驗及體外細胞CLE結果證實,FITC-GEBP11短肽探針能與Co-HUVECs特異性結合,且主要結合于細胞的胞膜和胞漿,對照細胞HUVECs、SGC7901及對照肽FITC-URP組呈弱結合或不結合。2.FITC-GEBP11短肽探針在荷人胃癌裸鼠中的活體CLE分子成像1)成功構建荷人胃癌裸鼠皮下和原位移植瘤模型,整個實驗過程無并發(fā)癥發(fā)生。2)FITC-GEBP11短肽探針以1μg/g體重的用量經尾靜脈注入裸鼠體內,觀察到在裸鼠腫瘤組織部位有較強的信號聚集,并在24h左右時熒光強信號最強;離體器官熒光成像結果顯示,FITC-GEBP11短肽探針能特異性濃聚于裸鼠腫瘤組織;胃腸組織及肝腎組織中觀察到較強的熒光信號;對照肽FITC-URP組腫瘤組織部位未檢測到特異性的熒光信號。3)在荷人胃癌裸鼠皮下及原位移植瘤模型中,尾靜脈注射FITC-GEBP11短肽探針后,CLE在兩種動物模型的裸鼠腫瘤組織中都可檢測到特異性的熒光信號,對照肽FITC-URP組未檢測到特異性的熒光信號。4)將裸鼠腫瘤組織冰凍切片行免疫熒光結果證實,FITC-GEBP11短肽探針能特異性靶向裸鼠腫瘤組織血管;HE染色證實為胃癌組織。3.離體人胃癌組織的血管靶向CLE分子成像1)共收集了28例行胃癌手術切除患者的新鮮胃癌組織和相應的癌旁組織標本;2)新鮮人體胃癌和癌旁組織與FITC-GEBP11短肽探針共孵育后,CLE在胃癌組織中可檢測到特異性的熒光信號,癌旁組織和對照肽FITC-URP組無特異性熒光信號;3)人體胃癌和癌旁組織進行冰凍切片后的免疫熒光結果證實,FITC-GEBP11短肽探針能特異性靶向結合于腫瘤組織血管;4)CLE掃描結果:在28例胃癌組織中有26例檢測到了特異性的熒光信號(+~+++);而癌旁組織標本有8例僅能觀察到較弱的熒光信號(+),另外20例標本未觀察到特異的熒光信號(-)。與癌旁組織相比,胃癌組織的CLE分子成像結果具有顯著性差異;腫瘤組織分化程度與CLE分子成像半定量結果具有較好的相關性(Spearman r=0.69,P0.001);利用GEBP11進行CLE分子成像診斷胃癌與HE染色病理組織學診斷結果的一致性較好(Kappa=0.64,95%可信區(qū)間:0.35-0.84)�！窘Y論】1.成功制備FITC-GEBP11短肽探針,并進行體外細胞CLE分子成像。成像結果證實,FITC-GEBP11短肽能夠特異性結合于Co-HUVECs細胞的胞膜和胞漿,為后續(xù)實驗提供體外實驗依據(jù)。2.FITC-GEBP11短肽探針經尾靜脈注射入荷瘤裸鼠體內,大體熒光成像顯示:GEBP11短肽能特異性濃聚于裸鼠腫瘤組織;通過CLE分子成像能夠較好的檢測荷瘤裸鼠腫瘤組織的熒光信號。這表明,利用FITC-GEBP11短肽探針進行靶向胃癌血管的活體CLE分子成像具有可行性。3.FITC-GEBP11短肽探針與離體新鮮人胃癌組織孵育后,能特異性結合于腫瘤組織血管;通過CLE分子成像檢測到特異結合于胃癌血管的高熒光信號,能夠區(qū)別胃癌與癌旁組織,且組織分化程度越低,GEBP11陽性率越高。胃粘膜局部應用短肽熒光探針進行靶向胃癌血管的CLE分子成像,有可能成為一種診斷胃癌的影像學新方法。
【關鍵詞】：胃癌 血管生成 共聚焦激光顯微內鏡(CLE) GEBP11 分子成像
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 縮略語表5-8
• 中文摘要8-12
• Abstract12-16
• 前言16-18
• 文獻回顧18-38
• 1 胃癌與血管生成18-24
• 2 迅速發(fā)展的內鏡檢查技術為胃癌的診斷提供了新方法24-26
• 3 共聚焦激光顯微內鏡（CLE）在消化系疾病中的應用進展26-33
• 4 GEBP11研究背景33-38
• 第一部分 FITC-GEBP11短肽熒光探針的制備及體外生物學活性鑒定38-49
• 引言38
• 1 材料38-40
• 2 方法40-43
• 3 結果43-47
• 4 討論47-49
• 第二部分 FITC-GEBP11短肽探針在荷人胃癌裸鼠中的活體CLE分子成像49-60
• 引言49
• 1 材料49-50
• 2 方法50-54
• 3 結果54-58
• 4 討論58-60
• 第三部分 離體人胃癌組織的血管靶向CLE分子成像研究60-66
• 引言60
• 1 材料60-61
• 2 方法61-62
• 3 結果62-64
• 4 討論64-66
• 小結66-67
• 參考文獻67-79
• 個人簡歷和研究成果79-81
• 致謝81-82

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本文編號：504763