本文關鍵詞：輪枝孢菌素A抑制結腸癌細胞遷移的分子機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：輪枝孢菌素A (Verticillin A)屬二酮哌嗪類化合物,本文從蘑菇黃赭鵝膏菌(含菌寄生菌歪孢菌)中分離提取得到輪枝孢菌素A,具有抗腫瘤轉移活性。腫瘤細胞轉移是制約腫瘤治療的一大障礙,找到一種能夠抑制腫瘤細胞轉移的藥物將具有非常重大的意義。本文研究了輪枝孢菌素A抑制結腸癌細胞遷移的分子機制,通過細胞劃痕實驗、Transwell跨膜遷移實驗發(fā)現(xiàn)輪枝孢菌素A在體外能有效抑制結腸癌細胞遷移,接著通過PCR、Western Blot等試驗篩選細胞遷移相關的關鍵基因,找出輪枝孢菌素A的作用靶點為c-Met。進一步研究發(fā)現(xiàn),輪枝孢菌素A通過c-Met調節(jié)下游PI3K-Akt和Ras/Raf-MAPK信號,進而抑制結腸癌細胞遷移。此外,在分子水平,輪枝孢菌素A能夠有效阻礙肝細胞生長因子HGF激發(fā)的c-Met磷酸化作用。通過Transwell實驗模擬體內腫瘤細胞遷移過程也發(fā)現(xiàn)輪枝孢菌素A能夠有效逆轉HGF誘導的細胞遷移運動。BAL B/c小鼠體內試驗發(fā)現(xiàn),輪枝孢菌素A單藥抑制結腸癌細胞CT26肺部轉移的效果不是很明顯,但與TF RAIL配伍使用后,則可以有效抑制腫瘤細胞轉移,抑制率近50%。這種藥物協(xié)同作用的分子機制目前還不清楚,有待進一步研究。概括起來,輪枝孢菌素A能夠有效抑制結腸癌細胞遷移運動能力,并通過抑制c-Met的表達來下調下游PI3K-Akt 和 Ras/Raf-MAPK信號通路,進而抑制腫瘤細胞遷移。本研究首次揭示了輪枝孢菌素A抑制腫瘤轉移方面的作用,為今后輪枝孢菌素A作為候選抗癌藥物更深遠的開發(fā)研究提供理論支持。
【關鍵詞】：輪枝孢菌素A 結腸癌 細胞遷移 c-Met
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 致謝8-9
• 縮略詞表9-11
• 摘要11-12
• Abstract12-13
• 1 緒論13-25
• 1.1 腫瘤轉移過程13
• 1.2 腫瘤細胞遷移的機制13-18
• 1.2.1 誘導腫瘤細胞運動的因素13-14
• 1.2.2 腫瘤細胞遷移的過程14-18
• 1.3 HGF/c-Met信號通路在腫瘤細胞遷移過程的研究進展18-22
• 1.3.1 HGF/c-Met在癌癥中的表達18-19
• 1.3.2 上皮—間充質轉移(EMT)與HGF/c-Met之間的關系19-20
• 1.3.3 HGF/c-Met信號20-22
• 1.4 輪枝孢菌素A的研究現(xiàn)狀22-23
• 1.5 總結與展望23
• 1.6 本研究的研究目的與研究內容23-25
• 2 材料與方法25-38
• 2.1 材料25-29
• 2.1.1 主要儀器25
• 2.1.2 主要試劑及公司25-26
• 2.1.3 培養(yǎng)液、試劑和緩沖液的配制方法26-29
• 2.2 方法29-38
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)29-30
• 2.2.2 細胞存活能力測試(MTT)30-31
• 2.2.3 細胞劃痕實驗31-32
• 2.2.4 Transwell細胞跨膜遷移實驗32-33
• 2.2.5 RT-PCR實驗33-34
• 2.2.6 實時定量PCR分析34-35
• 2.2.7 蛋白免疫印跡35-36
• 2.2.8 c-Met小RNA干擾36
• 2.2.9 BALB/c小鼠體內腫瘤轉移實驗36-37
• 2.2.10 統(tǒng)計分析37-38
• 3 結果與分析38-52
• 3.1 輪枝孢菌素A對腫瘤細胞增殖抑制的作用38
• 3.2 輪枝孢菌素A在體外有效抑制結腸癌細胞的遷移38-41
• 3.3 與腫瘤轉移相關的關鍵基因篩選41-42
• 3.4 輪枝孢菌素A通過下調c-Met抑制結腸癌細胞的遷移42-45
• 3.5 輪枝孢菌素A通過c-Met調節(jié)的下游信號通路45-46
• 3.6 輪枝孢菌素A在轉錄水平下調c-Met表達46-47
• 3.7 輪枝孢菌素A抑制HGF誘導的Met磷酸化作用47-50
• 3.8 輪枝孢菌素A在體內抑制結腸癌細胞轉移50-52
• 4 討論52-54
• 5 全文總結及創(chuàng)新點54-55
• 5.1 全文總結54
• 5.2 創(chuàng)新點54-55
• 參考文獻55-64
• 個人簡歷64

【共引文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張可爽;c-met在大腸癌組織中的表達及與腫瘤血管生成的關系[D];青島大學;2010年

  本文關鍵詞：輪枝孢菌素A抑制結腸癌細胞遷移的分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：504467