本文關(guān)鍵詞：輪枝孢菌素A抑制結(jié)腸癌細(xì)胞遷移的分子機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：輪枝孢菌素A (Verticillin A)屬二酮哌嗪類化合物,本文從蘑菇黃赭鵝膏菌(含菌寄生菌歪孢菌)中分離提取得到輪枝孢菌素A,具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性。腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移是制約腫瘤治療的一大障礙,找到一種能夠抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥物將具有非常重大的意義。本文研究了輪枝孢菌素A抑制結(jié)腸癌細(xì)胞遷移的分子機(jī)制,通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell跨膜遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)輪枝孢菌素A在體外能有效抑制結(jié)腸癌細(xì)胞遷移,接著通過PCR、Western Blot等試驗(yàn)篩選細(xì)胞遷移相關(guān)的關(guān)鍵基因,找出輪枝孢菌素A的作用靶點(diǎn)為c-Met。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),輪枝孢菌素A通過c-Met調(diào)節(jié)下游PI3K-Akt和Ras/Raf-MAPK信號(hào),進(jìn)而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞遷移。此外,在分子水平,輪枝孢菌素A能夠有效阻礙肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子HGF激發(fā)的c-Met磷酸化作用。通過Transwell實(shí)驗(yàn)?zāi)M體內(nèi)腫瘤細(xì)胞遷移過程也發(fā)現(xiàn)輪枝孢菌素A能夠有效逆轉(zhuǎn)HGF誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)。BAL B/c小鼠體內(nèi)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),輪枝孢菌素A單藥抑制結(jié)腸癌細(xì)胞CT26肺部轉(zhuǎn)移的效果不是很明顯,但與TF RAIL配伍使用后,則可以有效抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移,抑制率近50%。這種藥物協(xié)同作用的分子機(jī)制目前還不清楚,有待進(jìn)一步研究。概括起來,輪枝孢菌素A能夠有效抑制結(jié)腸癌細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力,并通過抑制c-Met的表達(dá)來下調(diào)下游PI3K-Akt 和 Ras/Raf-MAPK信號(hào)通路,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞遷移。本研究首次揭示了輪枝孢菌素A抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面的作用,為今后輪枝孢菌素A作為候選抗癌藥物更深遠(yuǎn)的開發(fā)研究提供理論支持。
【關(guān)鍵詞】：輪枝孢菌素A 結(jié)腸癌 細(xì)胞遷移 c-Met
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 致謝8-9
• 縮略詞表9-11
• 摘要11-12
• Abstract12-13
• 1 緒論13-25
• 1.1 腫瘤轉(zhuǎn)移過程13
• 1.2 腫瘤細(xì)胞遷移的機(jī)制13-18
• 1.2.1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的因素13-14
• 1.2.2 腫瘤細(xì)胞遷移的過程14-18
• 1.3 HGF/c-Met信號(hào)通路在腫瘤細(xì)胞遷移過程的研究進(jìn)展18-22
• 1.3.1 HGF/c-Met在癌癥中的表達(dá)18-19
• 1.3.2 上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)移(EMT)與HGF/c-Met之間的關(guān)系19-20
• 1.3.3 HGF/c-Met信號(hào)20-22
• 1.4 輪枝孢菌素A的研究現(xiàn)狀22-23
• 1.5 總結(jié)與展望23
• 1.6 本研究的研究目的與研究?jī)?nèi)容23-25
• 2 材料與方法25-38
• 2.1 材料25-29
• 2.1.1 主要儀器25
• 2.1.2 主要試劑及公司25-26
• 2.1.3 培養(yǎng)液、試劑和緩沖液的配制方法26-29
• 2.2 方法29-38
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)29-30
• 2.2.2 細(xì)胞存活能力測(cè)試(MTT)30-31
• 2.2.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)31-32
• 2.2.4 Transwell細(xì)胞跨膜遷移實(shí)驗(yàn)32-33
• 2.2.5 RT-PCR實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.2.6 實(shí)時(shí)定量PCR分析34-35
• 2.2.7 蛋白免疫印跡35-36
• 2.2.8 c-Met小RNA干擾36
• 2.2.9 BALB/c小鼠體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)36-37
• 2.2.10 統(tǒng)計(jì)分析37-38
• 3 結(jié)果與分析38-52
• 3.1 輪枝孢菌素A對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制的作用38
• 3.2 輪枝孢菌素A在體外有效抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移38-41
• 3.3 與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的關(guān)鍵基因篩選41-42
• 3.4 輪枝孢菌素A通過下調(diào)c-Met抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移42-45
• 3.5 輪枝孢菌素A通過c-Met調(diào)節(jié)的下游信號(hào)通路45-46
• 3.6 輪枝孢菌素A在轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)c-Met表達(dá)46-47
• 3.7 輪枝孢菌素A抑制HGF誘導(dǎo)的Met磷酸化作用47-50
• 3.8 輪枝孢菌素A在體內(nèi)抑制結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移50-52
• 4 討論52-54
• 5 全文總結(jié)及創(chuàng)新點(diǎn)54-55
• 5.1 全文總結(jié)54
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷64

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張可爽;c-met在大腸癌組織中的表達(dá)及與腫瘤血管生成的關(guān)系[D];青島大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：輪枝孢菌素A抑制結(jié)腸癌細(xì)胞遷移的分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：504467