本文關(guān)鍵詞：新型納米藥物載體在逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥性方面的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的乳腺癌是嚴重威脅女性健康的常見腫瘤。雖然近年來在其診斷及治療方面有了長足的進步,但乳腺癌患者的死亡率仍然居高不下,其中一個主要的原因就是腫瘤細胞可產(chǎn)生多藥耐藥性(Multidrug resistance, MDR),大幅減弱化療藥物對腫瘤細胞的殺傷,從而導(dǎo)致90%的晚期腫瘤化療的失敗。槲皮素(Quercetin,Q)是一種天然的黃酮類化合物,有研究顯示,槲皮素有助于逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的多藥耐藥性。然而,由于槲皮素水溶性差、吸收差,限制了其在臨床上的應(yīng)用,因而迫切需要開發(fā)能夠在水溶液中穩(wěn)定存在的高效載藥系統(tǒng)來運載槲皮素。聚合物膠束是近年來出現(xiàn)的一種新型納米藥物載體,同時具有親水性外殼和疏水性內(nèi)核,具有多種優(yōu)良的性能,如在體內(nèi)外環(huán)境中較高的穩(wěn)定性、對難溶性藥物的增溶作用等。聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)是經(jīng)美國食品和藥物管理局(Food and Drug Administration, FDA)批準(zhǔn)的可用于人體的藥物載體材料,具有良好的生物相容性和安全性。然而,迄今為止尚未有對于載有槲皮素的PEG-PE膠束逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥性的報道。本研究利用PEG-PE膠束可攜帶難溶性藥物的特性,制備出載有槲皮素的PEG-PE膠束(quercetin-loaded PEG-PE Micelles, M-Q),并在體外初步評估了其對耐阿霉素人乳腺癌細胞(MCF-7 ADRr)耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。方法將mPEG2000-PE和槲皮素分別溶于三氯甲烷和無水乙醇中,以不同的濃度比混合此兩種有機溶液,然后將混合溶液置于氮氣環(huán)境下蒸發(fā)至形成一層均勻干燥薄膜,靜置2h之后,加入0.9%氯化鈉注射液使薄膜水合。50℃水浴下水化30min后,常溫靜置2h,即制備出M-Q。用動態(tài)光散射儀表征其尺寸分布及Zeta電位；采用超速離心法分離游離藥物后以紫外分光光度法測定其包封率；將其聯(lián)合阿霉素一起與MCF-7 ADRr細胞共孵育72h,用MTS方法檢測腫瘤細胞的存活率,并測定其對MCF-7 ADRr細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用是否優(yōu)于游離槲皮素；為評價PEG-PE膠束自身對靶細胞有無殺傷作用,將MCF-7 ADRr細胞分別與不同濃度的PEG-PE膠束孵育72h,用MTS方法檢測腫瘤細胞的存活率。結(jié)果(1)利用動態(tài)光散射儀分別測定了空膠束和載藥膠束的粒徑,結(jié)果顯示,空膠束與載藥膠束的粒徑相似,無明顯差異,平均粒徑在11.11nm左右,空膠束與載藥膠束的Zeta電位分別為-0.165mV和-0.406mV。(2)PEG-PE聚合物膠束能有效運載槲皮素,其包封率高達74%以上。(3)MTS殺傷結(jié)果顯示,M-Q能在體外有效逆轉(zhuǎn)MCF-7 ADRr細胞對于阿霉素的耐藥性,且其逆轉(zhuǎn)作用優(yōu)于游離槲皮素(p0.05)。(4)本實驗中所用的PEG-PE膠束的安全性較好,在15-120μmol/L的濃度范圍內(nèi),對MCF-7 ADRr細胞無明顯殺傷作用。結(jié)論載有槲皮素的PEG-PE膠束能夠在體外有效逆轉(zhuǎn)MCF-7 ADRr細胞對于阿霉素的耐藥性,且其逆轉(zhuǎn)作用顯著優(yōu)于游離槲皮素。該結(jié)果提示,載有槲皮素的PEG-PE膠束在逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性方面具有潛在的應(yīng)用價值。目的肺癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率和死亡率在男性居惡性腫瘤的第1位,在女性居第2位。近十年來,肺癌的發(fā)病率和死亡率一直處于持續(xù)增長的狀態(tài)。令人擔(dān)憂的是,即使經(jīng)過治療,肺癌患者的五年存活率依然低于15%�；熓峭砥诜伟┑闹饕委煼椒ㄖ�,然而肺癌化療的效果并不十分理想,導(dǎo)致化療失敗的主要原因之一是腫瘤細胞多藥耐藥性(Multidrug resistance,MD巧的產(chǎn)生。為了克服腫瘤細胞的MDR,人們一直在探索新型的納米載藥系統(tǒng)來提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。DNA納米技術(shù)己逐漸成為納米醫(yī)學(xué)研究的熱點。DNA納米技術(shù)的快速發(fā)展使得DNA作為一種優(yōu)勢材料被廣泛使用。通過利用堿基配對法則,設(shè)計并合成大量不同幾何結(jié)構(gòu)的DNA納米結(jié)構(gòu)。在眾多DNA納米結(jié)構(gòu)中,由于DNA四面體具有簡易自組裝及高產(chǎn)的優(yōu)良特性,被認為是最實用的DNA納米結(jié)構(gòu)之一。迄今為止,尚未有DNA四面體對肺癌細胞耐藥性影響的評估,本研巧利用DNA四面體的高效自組裝特性W及阿霉素自動嵌入DNA的特性,構(gòu)建出載有阿霉素的DNA四面體,并在體外初步評估了其對耐阿霉素人肺腺癌細胞(A549 ADRr)耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。方法將溶解于TTE緩沖液的4條單鏈DNA(A、B、C和巧同化例混合于TM緩沖液,置于95’C水浴加熱2min,再置于冰浴降溫,即形成DNA四面體。利用瓊脂糖凝膠電泳法觀察DNA四面體的條帶位置,分析DNA四面體的構(gòu)建情況。取不同摩爾比的DNA四面體和網(wǎng)霉素混合,在黑色%孔板中靜置,待阿霉素充分嵌入DNA四面體后,即構(gòu)建出載有阿霉素的DNA四面體。利用芙光光譜分析儀檢測阿霉素巧光光譜值的變化,分析DNA四面體的載藥情況;通過動態(tài)光散射儀表征其尺寸分布及Zeta電位;將載有阿霉素的DNA四面體與A549AD化細胞共解育48h,用MTS法檢測對腫瘤細胞的殺傷率,并測定其對A549八D化細胞的殺傷作用是否優(yōu)于游離阿霉素。結(jié)果利用瓊脂糖凝膠電泳法觀察到DNA四面體的條帶位置高于其他兩組(A+B、A+B+C)0(2卿用動志光散射儀測定了DNA四面體的粒徑和Zeta電位,結(jié)果顯示,平均粒徑在13.81nm左右,Zeta電位為-0.427mV。(3巧0用巧光光譜分析儀檢測阿霉素巧光光譜值的變化,結(jié)果表明載藥四面體構(gòu)建成功。(4)MTS殺傷結(jié)果顯示,當(dāng)阿霉素濃度15^imol/L時,載有阿霉素的DNA四面體在體外有助于逆轉(zhuǎn)A549ADRT細胞對于阿霉素的耐藥性(p0.05)。(5)DNA四面體自身對{南赴廾饗隕鄙俗饔謾＝崧墼賾邪⒚顧氐腄NA四面體在體外有助于逆轉(zhuǎn)A549 ADRr細胞對于阿.霉素的耐藥性。該結(jié)果提示,DNA四面體作為一種新型的納米載藥系統(tǒng),在逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性方面具有潛在的應(yīng)用價值。
【關(guān)鍵詞】：PEG-PE 膠束 槲皮素 MCF-7 ADRr細胞 DNA四面體 阿霉素 A549ADRr細胞
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 第一部分 載有槲皮素的PEG-PE膠束對乳腺癌細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)6-46
• 摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一章 前言10-22
• 1. 多藥耐藥性(Multidrug resistance,MDR)10-11
• 1.1 MDR的定義10-11
• 1.2 MDR的機制11
• 1.3 MDR的逆轉(zhuǎn)方法11
• 2. 槲皮素11-17
• 2.1 槲皮素簡介11-12
• 2.2 槲皮素的藥理作用12-16
• 2.3 槲皮素應(yīng)用中存在的問題16-17
• 3. 聚合物膠束——一種新型的納米藥物載體17-20
• 3.1 聚合物膠束簡介17
• 3.2 聚合物膠束的物理性質(zhì)17-18
• 3.3 聚合物膠束的制備方法18-19
• 3.4 載體材料——聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)19-20
• 4. 本課題立項依據(jù)及研究意義20-21
• 5. 研究策略和技術(shù)路線21-22
• 5.1 擬解決的科學(xué)問題21
• 5.2 研究策略和技術(shù)路線21-22
• 第二章 材料與方法22-30
• 1. 主要材料與試劑22-23
• 1.1 細胞系22
• 1.2 mPEG_(2000)-PE22
• 1.3 阿霉素22
• 1.4 細胞培養(yǎng)試劑22
• 1.5 試劑盒22
• 1.6 化學(xué)試劑22-23
• 1.7 溶液的配置23
• 1.8 細胞培養(yǎng)耗材23
• 2. 實驗儀器和設(shè)備23-24
• 3. 實驗方法24-29
• 3.1 PE的制備24
• 3.2 mPEG_(2000)-PE的制備24-25
• 3.3 PEG-PE膠束的制備25
• 3.4 載有槲皮素的PEG-PE膠束(M-Q)的制備25-26
• 3.5 空膠束和載藥膠束的粒徑及Zeta電位的檢測26
• 3.6 M-Q包封率及載藥率的測定26-27
• 3.7 MCF-7和MCF-7 ADRr細胞系的培養(yǎng)27
• 3.8 細胞計數(shù)與操作方法27
• 3.9 M-Q對于MCF-7 ADRr細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)27-29
• 3.10 PEG-PE膠束自身對靶細胞的影響29
• 4. 統(tǒng)計學(xué)分析29-30
• 第三章 實驗結(jié)果與分析30-38
• 1. M-Q的理化性質(zhì)30-32
• 1.1 外觀30
• 1.2 粒徑30-31
• 1.3 Zeta電位31-32
• 2. M-Q的載藥率和包封率32-35
• 2.1 分離膠束化槲皮素和游離槲皮素32-33
• 2.2 測定沉淀中游離槲皮素的含量33-34
• 2.3 M-Q包封率及載藥率的測定34-35
• 3. M-Q對于MCF-7 ADRr細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)35-37
• 4. PEG-PE膠束自身對靶細胞的影響37-38
• 第四章 討論與結(jié)論38-39
• 1. 討論38
• 2. 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-46
• 第二部分 載有阿霉素的DNA四面體對肺癌細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)46-70
• 摘要46-48
• Abstract48-50
• 第一章 前言50-53
• 第二章 材料和方法53-61
• 1. 主要材料與試劑53-55
• 1.1 細胞系53
• 1.2 阿霉素53
• 1.3 單鏈寡核苷酸53
• 1.4 細胞培養(yǎng)試劑53-54
• 1.5 試劑盒54
• 1.6 化學(xué)試劑54
• 1.7 溶液的配置54-55
• 1.8 細胞培養(yǎng)耗材55
• 2. 實驗儀器和設(shè)備55-56
• 3. 實驗方法56-60
• 3.1 DNA四面體的構(gòu)建及檢測56
• 3.2 DNA四面體粒徑及Zeta電位的檢測56-57
• 3.3 載有阿霉素的DNA四面體的構(gòu)建及檢測57
• 3.4 A549和A549 ADRr細胞系的培養(yǎng)57
• 3.5 細胞計數(shù)與操作方法57
• 3.6 載有阿霉素的DNA四面體對于A549 ADRr細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)57-59
• 3.7 DNA四面體自身對靶細胞的影響59-60
• 4. 統(tǒng)計學(xué)分析60-61
• 第三章 實驗結(jié)果與分析61-66
• 1. DNA四面體的檢測61
• 2. DNA四面體的粒徑和Zeta電位61-62
• 3. 載有阿霉素的DNA四面體的構(gòu)建及檢測62-63
• 4. 載有阿霉素的DNA四面體對于A549 ADRr細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)63-65
• 5. DNA四面體自身對靶細胞的影響65-66
• 第四章 討論與結(jié)論66-68
• 1. 討論66-67
• 2. 結(jié)論67-68
• 參考文獻68-70
• 附錄一 英文縮略詞匯表70-71
• 附錄二 個人簡歷71-72
• 致謝72-74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 吳春;孔琪;李健;許威;;槲皮素微膠囊的穩(wěn)定性及緩釋性能研究[J];化學(xué)與黏合;2006年01期

2 杜方兵;包明紅;梅曉冬;;槲皮素對多藥耐藥細胞株KB-MRP的耐藥逆轉(zhuǎn)研究[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2007年09期

3 林宏英;陸曉燕;唐寧;梁偉;;長春新堿PEG-PE膠束的制備及其對乳腺癌細胞生長的抑制[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2006年08期

4 于志君;何麗婭;陳勇;吳勉云;趙雪花;王震宇;;槲皮素對胃癌MGC-803細胞VEGF-C及VEGFR-3表達水平的影響[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2009年08期

5 劉爽;姚平;李珂;林杰;郝麗萍;劉烈剛;;槲皮素對大鼠原代肝細胞酒精性氧化損傷的防護作用[J];營養(yǎng)學(xué)報;2007年03期

  本文關(guān)鍵詞：新型納米藥物載體在逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥性方面的應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：504205