本文關(guān)鍵詞：小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞TP53基因純合性缺失的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：(1)初步探討小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞(DTC)DNA的獲取方法。(2)初步觀察和比較小鼠口腔癌模型頜下淋巴結(jié)DTC與其原發(fā)灶在各病變時(shí)期TP53基因純合性缺失的情況及探討其意義。方法：(1)4NQO飲水法建立小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型,收集其舌部組織和頜下淋巴結(jié),分為正常、輕至中度異常增生、重度異常增生,口腔鱗癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5組。(2)舌部組織DNA直接提��；淋巴結(jié)組織行連續(xù)冰凍切片,pan-CK免疫組化染色檢測(cè)CK陽性細(xì)胞(CK+)有無并明確定位,取鄰近切片HE染色后使用激光捕獲顯微切割技術(shù)(LCM)獲取CK+細(xì)胞,全基因組擴(kuò)增技術(shù)(WGA)擴(kuò)增獲其DNA；(4)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)淋巴結(jié)CK+細(xì)胞TP53基因的第5至第8外顯子純合性缺失情況,并與小鼠正常淋巴結(jié)以及口腔原發(fā)灶組織比較。結(jié)果：(1)小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型各病變期頜下淋巴結(jié)中獲得有CK+(DTC)細(xì)胞的標(biāo)本共8個(gè),每個(gè)標(biāo)本使用LCM獲取CK+細(xì)胞各3例,共獲得24例；WGA擴(kuò)增技術(shù)成功獲取頜下淋巴結(jié)CK+細(xì)胞DNA 15例,總成功率62.5%。(2)TP53基因5-8外顯子(exon)在各病變階段轉(zhuǎn)移灶頜下淋巴結(jié)CK+細(xì)胞中均有出現(xiàn)：輕至中度異常增生組exon 5,1例(1/2)；重度異常增生組exon51例(1/2),exon 81例(1/2)；口腔癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組exon 51例(1/3),口腔癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組exon 52例(2/8),exon 81例(1/8)。在原發(fā)灶中口腔癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(exon 51例(1/3)和口腔癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(exon 5、6、8各1例,均為1/4)也有出現(xiàn),而在癌前病變?cè)l(fā)灶中未出現(xiàn)。結(jié)論：(1)冰凍連續(xù)切片、LCM及單細(xì)胞WGA結(jié)合,是精確獲取DTC細(xì)胞并進(jìn)行DNA分析的可靠技術(shù)；(2)從小鼠口腔癌模型各病變階段獲取的淋巴結(jié)CK+細(xì)胞,可能就是DTC細(xì)胞；(3)小鼠口腔癌病變的過程中,TP53基因的外顯子的突變可能使得DTC獲得了遷徙能力,在口腔癌的轉(zhuǎn)移過程中可能起到了重要作用。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 pan-CK 播散細(xì)胞 LCM TP53 純合性缺失
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.8;R-332
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-15
• 1、材料與方法15-27
• 2、結(jié)果27-37
• 3、討論37-45
• 4、問題與展望45-46
• 5、結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 附錄53-54
• 綜述：TP53基因在研究進(jìn)展及檢測(cè)其突變的新方法54-63
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 致謝63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文64

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本文編號(hào)：499920