本文關(guān)鍵詞：腹水來(lái)源胃癌細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(International Agency for Research on Cancer)對(duì)2012年全球范圍內(nèi)27個(gè)主要惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率進(jìn)行了估計(jì)。報(bào)告顯示,2012年共有141,000,000新發(fā)病例,其中有82,000,000例死于癌癥。最常見(jiàn)的腫瘤分別為肺癌(1820,000例),乳腺癌(1670,000例),結(jié)直腸癌(1360,000例);死亡率最高的是肺癌(1600,000例),肝癌(745,000例),胃癌(723,000例)。胃癌是全球人口的第三大惡性腫瘤死亡原因[1]。陳萬(wàn)青等通過(guò)對(duì)大數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)估計(jì)了中國(guó)人癌癥新發(fā)病例和死亡率。結(jié)果顯示:2015年,中國(guó)將有4292,000例新發(fā)癌癥病人和2814,000例死亡,其中胃癌在中國(guó)的發(fā)病率及死亡率穩(wěn)居所有腫瘤的第二位[2],5年生存率也只有大約20%[3]。胃癌,指的是來(lái)源于胃黏膜的腫瘤(腺癌)、來(lái)源于胃壁結(jié)締組織的腫瘤(胃腸道間質(zhì)瘤)、來(lái)源于神經(jīng)內(nèi)分泌組織的腫瘤(類癌)以及來(lái)源于淋巴組織的腫瘤(淋巴瘤)[4]。目前胃癌主要采用以手術(shù)為主的綜合治療方式,但是許多經(jīng)過(guò)胃根治性性切除手術(shù)的胃癌患者依舊會(huì)存在腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。其中,腹膜轉(zhuǎn)移就是最常見(jiàn)的胃癌根治性手術(shù)患者治療失敗的原因,占總復(fù)發(fā)率的20%-53.5%[5-8],中位生存期短,僅為3.1-5.7個(gè)月,生活質(zhì)量差[9-12]。而胃癌腹膜轉(zhuǎn)移患者會(huì)產(chǎn)生惡性腹水。胃癌的早期臨床表現(xiàn)比較隱匿,大部分初診時(shí)已為晚期,多數(shù)已失去了治療的最佳時(shí)機(jī),治療效果差。近十幾年來(lái),進(jìn)展期胃癌(advanced gastric cancer,AGC)患者的化療療效仍不理想[13],對(duì)于晚期胃癌患者大多進(jìn)行姑息化療提高生活質(zhì)量、延長(zhǎng)生存期[14,15],此外,與分子靶向藥物的聯(lián)合治療是全世界胃癌治療的發(fā)展趨勢(shì)。1951年,人類第一株腫瘤細(xì)胞Hela細(xì)胞建立,至今已經(jīng)60多年。至此,人類腫瘤細(xì)胞系對(duì)癌癥的研究就產(chǎn)生了巨大的影響,大大地促進(jìn)了各種癌癥治療的發(fā)展,造福于人類[16-18]。癌癥往往肆意地在人類體內(nèi)瘋長(zhǎng),矛盾的是,卻很難在體外培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。那么一個(gè)強(qiáng)有力的、高效的細(xì)胞系模型可以預(yù)測(cè)病人對(duì)各種藥物系統(tǒng)的反應(yīng),這將會(huì)極大的提高新藥的開(kāi)發(fā),最終實(shí)現(xiàn)癌癥患者的個(gè)體化治療[19]。原代細(xì)胞培養(yǎng),就是將取得的腫瘤組織或細(xì)胞在體外進(jìn)行首次培養(yǎng),通過(guò)原代培養(yǎng)獲得的腫瘤細(xì)胞可為日益深入的腫瘤研究及治療提供充足有效的細(xì)胞來(lái)源。原代培養(yǎng)細(xì)胞離體時(shí)間短,性狀與體內(nèi)相似,為人們對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究,繪制腫瘤轉(zhuǎn)移瘤基因圖譜,抗腫瘤藥物敏感性檢測(cè),甚至腫瘤的基因治療等研究提供了一個(gè)有效平臺(tái)。盡管建立腫瘤細(xì)胞系的技術(shù)方法在不斷改進(jìn)[17],至今仍然很難找到一種將人體腫瘤規(guī)范化高效率的建立成高質(zhì)量、永恒的細(xì)胞系的方法。所以能夠體外成功獲取胃癌原代細(xì)胞是實(shí)現(xiàn)胃癌個(gè)體化治療的關(guān)鍵。手術(shù)標(biāo)本獲取不易,而且許多患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是晚期,喪失了手術(shù)治療的時(shí)機(jī),使得通過(guò)原發(fā)腫瘤進(jìn)行原代培養(yǎng)獲取腫瘤細(xì)胞株變得比較困難。而獲得進(jìn)展期胃癌患者的腹水相對(duì)容易,給患者帶來(lái)的痛苦小,可以成為建立原代腫瘤細(xì)胞很好的來(lái)源。目的本實(shí)驗(yàn)主要以胃癌患者腹水來(lái)源的胃癌細(xì)胞為主要研究對(duì)象,目的就是探索出一種相對(duì)成熟的原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及純化后細(xì)胞株的鑒定方法,為腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移侵襲機(jī)制的研究,繪制胃癌轉(zhuǎn)移瘤基因圖譜,抗腫瘤藥物敏感性檢測(cè),甚至胃癌轉(zhuǎn)移瘤的基因治療等研究提供一個(gè)有效平臺(tái)。方法搜集臨床胃癌患者新鮮腹水來(lái)源的胃癌細(xì)胞并進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),主要通過(guò)低濃度胰酶消化法及差速貼壁法進(jìn)行原代細(xì)胞的純化,獲得能夠穩(wěn)定傳代的胃癌轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞株。并通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)、HE染色、免疫熒光檢測(cè)、繪制細(xì)胞增殖曲線、檢測(cè)細(xì)胞侵襲遷移能力、構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型等方法對(duì)其進(jìn)行鑒定。結(jié)果成功建立1例能夠穩(wěn)定傳代的腹水胃腺癌細(xì)胞株(本實(shí)驗(yàn)室將其命名為CFJ)。該細(xì)胞株細(xì)胞形態(tài)一致,表達(dá)上皮的生物標(biāo)志物,細(xì)胞核呈現(xiàn)出明顯的異型性,有一定的增殖能力和遷移能力,能在裸鼠皮下成功構(gòu)建移植瘤模型,并可見(jiàn)裸鼠縱膈、腋窩等多處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。結(jié)論胃癌轉(zhuǎn)移性腹水可以成為建立原代腫瘤細(xì)胞的很好來(lái)源,獲得并純化的腫瘤細(xì)胞系可為后期胃癌相關(guān)的基礎(chǔ)及臨床研究提供了一個(gè)有效平臺(tái)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 腹水 原代培養(yǎng) 轉(zhuǎn)化 成瘤
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮略詞表12-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-29
• 結(jié)果29-34
• 討論34-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 綜述 胃癌細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定的研究進(jìn)展40-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果57-58
• 致謝58

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本文編號(hào)：498201