本文關(guān)鍵詞：稀有細(xì)胞的單細(xì)胞基因突變檢測(cè)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血液內(nèi)存在一些數(shù)量稀少卻具有重要臨床價(jià)值的稀有細(xì)胞,如循環(huán)腫瘤細(xì)胞、循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞、良性的循環(huán)上皮細(xì)胞、以及孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞等,其中循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)因?yàn)榭赡芴崾玖梭w內(nèi)腫瘤的存在與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),以及成為體內(nèi)除原位病灶以外的腫瘤細(xì)胞的來(lái)源而成為了癌癥研究的熱點(diǎn)。目前絕大部分研究主要針對(duì)外周血中全體CTC進(jìn)行計(jì)數(shù)以及基因突變分析,而忽略了CTC的異質(zhì)性,尤其是CTC在遺傳學(xué)上的異質(zhì)性與功能上異質(zhì)性的相互關(guān)系,因此必須發(fā)展針對(duì)單個(gè)CTC的基因檢測(cè)技術(shù)。本文主要基于顯微操作平臺(tái),用毛細(xì)玻璃管獲取單個(gè)細(xì)胞,然后進(jìn)行全基因組放大,從而擴(kuò)增目的基因并檢測(cè)突變。同時(shí),我們根據(jù)單細(xì)胞尺度上功能蛋白與基因協(xié)同檢測(cè)的需要,將單個(gè)細(xì)胞在芯片上裂解后先進(jìn)行功能蛋白檢測(cè),然后抽取單個(gè)細(xì)胞的裂解產(chǎn)物進(jìn)行基因檢測(cè)。最后,我們將基于微流控芯片的外周血中CTC的捕獲技術(shù)與單細(xì)胞基因突變檢測(cè)相結(jié)合,對(duì)肺癌患者進(jìn)行實(shí)際的臨床樣本檢測(cè)。我們所發(fā)展的集成式微流控芯片系統(tǒng)能夠高效分選出患者血液中的CTC,并通過(guò)紅細(xì)胞與白細(xì)胞的負(fù)選芯片除去由于非特異性捕獲而混在CTC中的血細(xì)胞,從而得到高純度的CTC用于后續(xù)檢測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：循環(huán)腫瘤細(xì)胞 微流控芯片 單細(xì)胞基因檢測(cè) EGFR
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.4
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章：緒論11-30
• 1.1 背景11-14
• 1.2 早期診斷14-16
• 1.3 腫瘤的轉(zhuǎn)移和診斷16-18
• 1.3.1 腫瘤轉(zhuǎn)移16-17
• 1.3.2 腫瘤診斷17-18
• 1.4 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)18-24
• 1.4.1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞18-19
• 1.4.2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究平臺(tái)—Cell Search19-20
• 1.4.3 CTC捕獲的快速發(fā)展20-24
• 1.4.3.1 基于單抗體的捕獲20-21
• 1.4.3.2 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化21-23
• 1.4.3.3 負(fù)性選擇23-24
• 1.5 肺癌中的常見(jiàn)基因檢測(cè)24-30
• 1.5.1 非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）24
• 1.5.2 常見(jiàn)的基因突變檢測(cè)24-29
• 1.5.2.1 KRAS25-27
• 1.5.2.2 EGFR27-29
• 1.5.3 主要研究基因29-30
• 第二章：?jiǎn)蝹�(gè)腫瘤細(xì)胞的基因突變檢測(cè)30-47
• 2.1 研究目的30
• 2.2 材料與方法30-47
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料30-35
• 2.2.1.1 細(xì)胞系30-31
• 2.2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑31-33
• 2.2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備33-34
• 2.2.1.4 基因突變引物34-35
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法35-47
• 2.2.2.1 顯微操作獲取單細(xì)胞35-37
• 2.2.2.2 單細(xì)胞檢測(cè)37-47
• 2.2.2.2.1 少量細(xì)胞（10個(gè)）基因組DNA放大37-44
• 2.2.2.2.2 檢測(cè)方法的靈敏度44-46
• 2.2.2.2.3 懸浮狀態(tài)的單細(xì)胞基因檢測(cè)46
• 2.2.2.2.4 微操獲取經(jīng)固定的單個(gè)細(xì)胞46-47
• 第三章：?jiǎn)蝹�(gè)腫瘤細(xì)胞核的基因突變檢測(cè)47-66
• 3.1 細(xì)胞裂解產(chǎn)物的基因檢測(cè)47-51
• 3.1.1 A549的實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-48
• 3.1.2 NCI-H1650的實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-49
• 3.1.3 NCI-H1975的實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-51
• 3.2 芯片內(nèi)單個(gè)細(xì)胞核的基因檢測(cè)51-60
• 3.2.1 微流控芯片設(shè)計(jì)52-53
• 3.2.2 顯微操作取微芯片中裂解后的細(xì)胞核53-56
• 3.2.2.1 無(wú)修飾操作53
• 3.2.2.2 BSA修飾微芯片后的顯微操作53-54
• 3.2.2.3 雙重修飾后操作54-55
• 3.2.2.4 優(yōu)化55-56
• 3.2.3 芯片內(nèi)單個(gè)細(xì)胞核的基因檢測(cè)56-60
• 3.3 臨床患者單個(gè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的基因檢測(cè)60-66
• 第四章：腫瘤細(xì)胞的分選66-76
• 4.1 魚(yú)骨型芯片中負(fù)載DNA的驗(yàn)證67
• 4.2 同質(zhì)性CTC捕獲理論67-68
• 4.3 CTC捕獲的模擬68-70
• 4.4 臨床樣本檢測(cè)70-71
• 4.5 CTC的釋放71-73
• 4.6 CTC的純化73-74
• 4.7 分離具有特定表型的CTC子群74-76
• 第五章：結(jié)論76-78
• 5.1 研究結(jié)論76-77
• 5.2 研究展望77-78
• 參考文獻(xiàn)78-84
• 致謝84-86
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)成果86

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本文編號(hào)：494295