發(fā)布時間：2017-06-28 15:11

  本文關鍵詞：稀有細胞的單細胞基因突變檢測，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血液內存在一些數(shù)量稀少卻具有重要臨床價值的稀有細胞,如循環(huán)腫瘤細胞、循環(huán)內皮細胞、良性的循環(huán)上皮細胞、以及孕婦外周血中胎兒有核紅細胞等,其中循環(huán)腫瘤細胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)因為可能提示了體內腫瘤的存在與復發(fā)風險,以及成為體內除原位病灶以外的腫瘤細胞的來源而成為了癌癥研究的熱點。目前絕大部分研究主要針對外周血中全體CTC進行計數(shù)以及基因突變分析,而忽略了CTC的異質性,尤其是CTC在遺傳學上的異質性與功能上異質性的相互關系,因此必須發(fā)展針對單個CTC的基因檢測技術。本文主要基于顯微操作平臺,用毛細玻璃管獲取單個細胞,然后進行全基因組放大,從而擴增目的基因并檢測突變。同時,我們根據(jù)單細胞尺度上功能蛋白與基因協(xié)同檢測的需要,將單個細胞在芯片上裂解后先進行功能蛋白檢測,然后抽取單個細胞的裂解產(chǎn)物進行基因檢測。最后,我們將基于微流控芯片的外周血中CTC的捕獲技術與單細胞基因突變檢測相結合,對肺癌患者進行實際的臨床樣本檢測。我們所發(fā)展的集成式微流控芯片系統(tǒng)能夠高效分選出患者血液中的CTC,并通過紅細胞與白細胞的負選芯片除去由于非特異性捕獲而混在CTC中的血細胞,從而得到高純度的CTC用于后續(xù)檢測。
【關鍵詞】：循環(huán)腫瘤細胞 微流控芯片 單細胞基因檢測 EGFR
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.4
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章：緒論11-30
• 1.1 背景11-14
• 1.2 早期診斷14-16
• 1.3 腫瘤的轉移和診斷16-18
• 1.3.1 腫瘤轉移16-17
• 1.3.2 腫瘤診斷17-18
• 1.4 循環(huán)腫瘤細胞檢測18-24
• 1.4.1 循環(huán)腫瘤細胞18-19
• 1.4.2 循環(huán)腫瘤細胞研究平臺—Cell Search19-20
• 1.4.3 CTC捕獲的快速發(fā)展20-24
• 1.4.3.1 基于單抗體的捕獲20-21
• 1.4.3.2 上皮間質轉化21-23
• 1.4.3.3 負性選擇23-24
• 1.5 肺癌中的常見基因檢測24-30
• 1.5.1 非小細胞肺癌（NSCLC）24
• 1.5.2 常見的基因突變檢測24-29
• 1.5.2.1 KRAS25-27
• 1.5.2.2 EGFR27-29
• 1.5.3 主要研究基因29-30
• 第二章：單個腫瘤細胞的基因突變檢測30-47
• 2.1 研究目的30
• 2.2 材料與方法30-47
• 2.2.1 實驗材料30-35
• 2.2.1.1 細胞系30-31
• 2.2.1.2 實驗試劑31-33
• 2.2.1.3 實驗設備33-34
• 2.2.1.4 基因突變引物34-35
• 2.2.2 實驗方法35-47
• 2.2.2.1 顯微操作獲取單細胞35-37
• 2.2.2.2 單細胞檢測37-47
• 2.2.2.2.1 少量細胞（10個）基因組DNA放大37-44
• 2.2.2.2.2 檢測方法的靈敏度44-46
• 2.2.2.2.3 懸浮狀態(tài)的單細胞基因檢測46
• 2.2.2.2.4 微操獲取經(jīng)固定的單個細胞46-47
• 第三章：單個腫瘤細胞核的基因突變檢測47-66
• 3.1 細胞裂解產(chǎn)物的基因檢測47-51
• 3.1.1 A549的實驗結果47-48
• 3.1.2 NCI-H1650的實驗結果48-49
• 3.1.3 NCI-H1975的實驗結果49-51
• 3.2 芯片內單個細胞核的基因檢測51-60
• 3.2.1 微流控芯片設計52-53
• 3.2.2 顯微操作取微芯片中裂解后的細胞核53-56
• 3.2.2.1 無修飾操作53
• 3.2.2.2 BSA修飾微芯片后的顯微操作53-54
• 3.2.2.3 雙重修飾后操作54-55
• 3.2.2.4 優(yōu)化55-56
• 3.2.3 芯片內單個細胞核的基因檢測56-60
• 3.3 臨床患者單個循環(huán)腫瘤細胞的基因檢測60-66
• 第四章：腫瘤細胞的分選66-76
• 4.1 魚骨型芯片中負載DNA的驗證67
• 4.2 同質性CTC捕獲理論67-68
• 4.3 CTC捕獲的模擬68-70
• 4.4 臨床樣本檢測70-71
• 4.5 CTC的釋放71-73
• 4.6 CTC的純化73-74
• 4.7 分離具有特定表型的CTC子群74-76
• 第五章：結論76-78
• 5.1 研究結論76-77
• 5.2 研究展望77-78
• 參考文獻78-84
• 致謝84-86
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術成果86

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李帥;劉曉強;;循環(huán)腫瘤細胞的檢測[J];醫(yī)學綜述;2010年06期

2 曹璐;徐文;殷正豐;;循環(huán)腫瘤細胞分離與檢測[J];第二軍醫(yī)大學學報;2010年03期

3 董印軍;宋平平;張百江;張為迪;;肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測的研究進展[J];中國肺癌雜志;2009年05期

4 周晴接;楊建民;;循環(huán)腫瘤細胞研究進展[J];世界華人消化雜志;2010年11期

5 平偉;付向寧;;肺癌循環(huán)腫瘤細胞臨床應用的研究進展[J];中國肺癌雜志;2011年06期

6 馬瓊;周勇;裘秀春;;循環(huán)腫瘤細胞自激注入的研究進展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2011年06期

7 周長春;范傳波;宋現(xiàn)讓;;循環(huán)腫瘤細胞的檢測和應用[J];分子診斷與治療雜志;2012年01期

8 宋英健;王正;楊林;;肺癌循環(huán)腫瘤細胞的研究進展[J];中國肺癌雜志;2012年10期

9 李慧;崔洪霞;程穎;;循環(huán)腫瘤細胞在肺癌中的研究進展[J];中國肺癌雜志;2012年11期

10 ;從400多億個血細胞中揪出1個循環(huán)腫瘤細胞[J];山東中醫(yī)藥大學學報;2012年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳倩;崔巍;戈烽;林平;;循環(huán)腫瘤細胞和肺癌TNM分期的相關性研究[A];中華醫(yī)學會第九次全國檢驗醫(yī)學學術會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學術會議論文匯編[C];2011年

2 宋彥齡;安源;張薇婷;朱志;俞春東;楊朝勇;;循環(huán)腫瘤細胞捕獲檢測新方法[A];中國化學會第28屆學術年會第3分會場摘要集[C];2012年

3 馬麗;文仲光;;循環(huán)腫瘤細胞的檢測及其在肺癌患者中的臨床應用[A];中國腫瘤內科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

4 張品南;許楊揚;楊小敏;;血循環(huán)腫瘤細胞研究進展[A];2008年浙江省病理學學術年會論文匯編[C];2008年

5 彭佳茜;白林靈;趙瓊;楊延蓮;王琛;;基于多肽的循環(huán)腫瘤細胞富集與檢測研究[A];中國化學會第29屆學術年會摘要集——第35分會：納米生物醫(yī)學中的化學問題[C];2014年

6 梅林航;;循環(huán)腫瘤細胞在乳腺癌中的應用[A];2013年浙江省外科學學術年會論文匯編[C];2013年

7 黃士昂;胡艷潔;范靈靈;劉偉;李欣;鄭金娥;賀艷麗;;運用多參數(shù)流式細胞計數(shù)監(jiān)測乳腺癌Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ期病人外周血中的循環(huán)腫瘤細胞及對其預后的評估[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

8 任傳利;韓崇旭;薛小平;朱小平;呂煒;周林;;胰腺癌外周血凋亡循環(huán)腫瘤細胞的檢測和輔助治療敏感性的關系[A];中華醫(yī)學會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2012年

9 陳曉霞;任勝祥;李雪飛;張玲;李瑋;周菲;高廣輝;李帥;周彩存;;循環(huán)腫瘤細胞在肺癌診斷中的作用[A];第13屆全國肺癌學術大會論文匯編[C];2013年

10 楊卓;付靜軒;王斐;崔巍;;外周血循環(huán)腫瘤細胞的特性及其檢測分析的研究進展[A];中華醫(yī)學會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 江蘇省人民醫(yī)院腫瘤科主任醫(yī)生 殷詠梅;循環(huán)腫瘤細胞檢測防癌癥復發(fā)[N];健康報;2012年

2 劉海英;循環(huán)腫瘤細胞具有“自激注入”能力[N];科技日報;2009年

3 記者 王雪飛;從400多億個血細胞中揪出1個循環(huán)腫瘤細胞[N];健康報;2012年

4 劉海英;“捕蠅紙”型循環(huán)腫瘤細胞檢測裝置問世[N];科技日報;2009年

5 劉海英;上皮間質轉化基因可用于檢測循環(huán)腫瘤細胞[N];科技日報;2009年

6 張中橋;EGFR mRNA可用于乳癌循環(huán)腫瘤細胞檢測[N];中國醫(yī)藥報;2005年

7 聞誼;美評出年度十大醫(yī)療技術創(chuàng)新[N];中國醫(yī)藥報;2009年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方主亭;肝癌動脈栓塞對循環(huán)腫瘤細胞的影響及機制實驗與臨床研究[D];復旦大學;2014年

2 孫文潔;循環(huán)腫瘤細胞及功能影像在預測和評估直腸癌放化療療效方面的研究[D];復旦大學;2014年

3 黃文濤;膽道腫瘤循環(huán)腫瘤細胞的檢測及基因組擴增[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 馬燕春;過濾裝置與腺病毒相結合捕獲活的循環(huán)腫瘤細胞的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

5 沈慶林;適配子修飾的納米基底特異性捕獲和釋放循環(huán)腫瘤細胞研究[D];武漢大學;2013年

6 朱融融;應用循環(huán)腫瘤細胞解析胰腺癌上皮—間質轉化全程及其臨床意義探究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

7 唐文博;微流控芯片分離胰腺癌患者循環(huán)腫瘤細胞的基礎實驗及其臨床應用[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2016年

8 王其美;益氣化瘀解毒方對結直腸癌循環(huán)腫瘤細胞干預作用的研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2016年

9 秦英剛;循環(huán)腫瘤細胞與中、西醫(yī)治療肺癌患者療效及預后的相關性研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

10 劉道永;肝細胞癌病人外周血中循環(huán)腫瘤細胞的檢測和臨床意義[D];復旦大學;2007年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳志清;結直腸癌外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測的臨床診療價值研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 宋云飛;循環(huán)腫瘤細胞對晚期乳腺癌預后影響的初步探究[D];福建中醫(yī)藥大學;2015年

3 陰麗媛;循環(huán)腫瘤細胞新型檢測方法的建立及其在臨床樣本中的應用[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

4 真德智;非小細胞肺癌患者術后輔助治療期間外周血循環(huán)腫瘤細胞EpCAM表達水平監(jiān)測的臨床意義[D];北京市結核病胸部腫瘤研究所;2015年

5 朱玲;免疫磁珠法富集肺癌循環(huán)腫瘤細胞及臨床意義研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

6 張亮;乳腺癌不同表型循環(huán)腫瘤細胞的檢測及其臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 董超群;羧酸甜菜堿兩性聚合物功能化尼龍導管及其捕獲循環(huán)腫瘤細胞的研究[D];南京大學;2015年

8 羅小輝;循環(huán)腫瘤細胞快速自動識別研究[D];西安電子科技大學;2014年

9 劉敏;吖啶橙熒光染色法檢測腎癌循環(huán)腫瘤細胞及其臨床意義[D];天津醫(yī)科大學;2015年

10 李浩;食管鱗癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測及臨床意義的研究[D];濟南大學;2015年

  本文關鍵詞：稀有細胞的單細胞基因突變檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：494295