本文關鍵詞：microRNA-100抑制劑慢病毒表達載體的構建及其對BEAS-2B細胞行為學的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究背景及目的】腫瘤的發(fā)生是一個復雜的過程,我們實驗室一直致力于腫瘤發(fā)病機制與干預的研究。mi RNAs(micro RNA,mi RNA,mi R)在腫瘤發(fā)生中的作用是近年來關注的熱點,我們前期的研究中用mi RNAs芯片雜交分析經過As2O3急性誘導的SHP2+/+野生型和SHP2D61G/+突變的MEFs中mi RNAs表達譜的變化。結果發(fā)現(xiàn),在數十種表達有差異的mi RNAs中,mi R-100的表達是遞減的。而SHP2D61G/+突變的MEF細胞發(fā)生了惡性轉化,并且用As2O3誘導后,細胞的惡性行為更加明顯,由此我們推測,mi R-100參與了細胞的惡性轉化過程,于是我們進一步研究mi R-100的作用。近年來,mi R-100與腫瘤關系的研究也有了新的進展。研究發(fā)現(xiàn),mi R-100在一些腫瘤中如前列腺癌中的表達是升高的,并且促進前列腺癌的轉移,發(fā)揮著促癌基因的作用;而在另一些腫瘤中,如宮頸癌、膀胱癌、肺癌中呈現(xiàn)低表達,發(fā)揮著類似于抑癌基因的作用。有人研究發(fā)現(xiàn),用低劑量的砷長期慢性誘導人支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞后,細胞的增殖和生長能力增加,發(fā)生了一定程度的惡性轉化,同時研究也發(fā)現(xiàn),長期的砷暴露也增加了肺癌的發(fā)生風險,因此mi R-100與砷都和肺癌的關系密切。于是我們選擇人支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞作為研究對象,研究mi R-100對BEAS-2B細胞行為學的影響。慢病毒具有感染效率高、感染譜廣、穩(wěn)定表達且安全性高的優(yōu)點,可以將目的基因導入細胞并穩(wěn)定的表達。因此,我們擬通過構建mi R-100抑制劑的慢病毒載體并穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞,研究沉默mi R-100表達對BEAS-2B細胞行為學的影響,為進一步研究mi R-100的功能奠定基礎。【研究方法】1.構建mi R-100抑制劑的慢病毒表達載體并穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞。2.用RT-PCR的方法檢測慢病毒感染后的BEAS-2B細胞中mi R-100的表達。3.用MTT實驗和克隆形成實驗來檢測慢病毒感染的BEAS-2B細胞生長情況;用軟瓊脂集落形成試驗來檢測細胞的非依賴生長能力;4.用粘附試驗和Transwell遷移實驗來檢測細胞的粘附能力和體外遷移能力。【研究結果】1.成功的構建了mi R-100抑制劑的慢病毒表達載體并穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞株。2.慢病毒感染的BEAS-2B中mi R-100的表達被明顯的抑制。3.MTT實驗和克隆形成實驗結果顯示,抑制mi R-100的表達后,BEAS-2B細胞生長增殖能力有所增加。4.抑制BEAS-2B細胞中mi R-100的表達后,細胞的錨定非依賴生長能力增強,形成了較大的集落。5.粘附試驗和Transwell遷移實驗結果表明,抑制mi R-100的表達后,BEAS-2B細胞的粘附和體外遷移能力有一定程度的增強。【研究結論】1.通過mi R-100抑制劑慢病毒載體穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞,成功的抑制了BEAS-2B細胞中mi R-100的表達。2.抑制mi R-100的表達,促進了BEAS-2B細胞的增殖、生長和遷移能力。
【關鍵詞】：miR-100抑制劑 慢病毒載體 BEAS-2B細胞
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 中英文縮寫一覽表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-24
• 結果24-33
• 討論33-36
• 結論36
• 參考文獻36-42
• 附錄42-43
• 致謝43-44
• 綜述44-51
• 參考文獻47-51

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1 董偉;microRNA-100抑制劑慢病毒表達載體的構建及其對BEAS-2B細胞行為學的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

  本文關鍵詞：microRNA-100抑制劑慢病毒表達載體的構建及其對BEAS-2B細胞行為學的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：493667