microRNA-100抑制劑慢病毒表達載體的構(gòu)建及其對BEAS-2B細胞行為學的影響
發(fā)布時間:2017-06-28 11:19
本文關(guān)鍵詞:microRNA-100抑制劑慢病毒表達載體的構(gòu)建及其對BEAS-2B細胞行為學的影響,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:【研究背景及目的】腫瘤的發(fā)生是一個復雜的過程,我們實驗室一直致力于腫瘤發(fā)病機制與干預(yù)的研究。mi RNAs(micro RNA,mi RNA,mi R)在腫瘤發(fā)生中的作用是近年來關(guān)注的熱點,我們前期的研究中用mi RNAs芯片雜交分析經(jīng)過As2O3急性誘導的SHP2+/+野生型和SHP2D61G/+突變的MEFs中mi RNAs表達譜的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在數(shù)十種表達有差異的mi RNAs中,mi R-100的表達是遞減的。而SHP2D61G/+突變的MEF細胞發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化,并且用As2O3誘導后,細胞的惡性行為更加明顯,由此我們推測,mi R-100參與了細胞的惡性轉(zhuǎn)化過程,于是我們進一步研究mi R-100的作用。近年來,mi R-100與腫瘤關(guān)系的研究也有了新的進展。研究發(fā)現(xiàn),mi R-100在一些腫瘤中如前列腺癌中的表達是升高的,并且促進前列腺癌的轉(zhuǎn)移,發(fā)揮著促癌基因的作用;而在另一些腫瘤中,如宮頸癌、膀胱癌、肺癌中呈現(xiàn)低表達,發(fā)揮著類似于抑癌基因的作用。有人研究發(fā)現(xiàn),用低劑量的砷長期慢性誘導人支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞后,細胞的增殖和生長能力增加,發(fā)生了一定程度的惡性轉(zhuǎn)化,同時研究也發(fā)現(xiàn),長期的砷暴露也增加了肺癌的發(fā)生風險,因此mi R-100與砷都和肺癌的關(guān)系密切。于是我們選擇人支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞作為研究對象,研究mi R-100對BEAS-2B細胞行為學的影響。慢病毒具有感染效率高、感染譜廣、穩(wěn)定表達且安全性高的優(yōu)點,可以將目的基因?qū)爰毎⒎(wěn)定的表達。因此,我們擬通過構(gòu)建mi R-100抑制劑的慢病毒載體并穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞,研究沉默mi R-100表達對BEAS-2B細胞行為學的影響,為進一步研究mi R-100的功能奠定基礎(chǔ)!狙芯糠椒ā1.構(gòu)建mi R-100抑制劑的慢病毒表達載體并穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞。2.用RT-PCR的方法檢測慢病毒感染后的BEAS-2B細胞中mi R-100的表達。3.用MTT實驗和克隆形成實驗來檢測慢病毒感染的BEAS-2B細胞生長情況;用軟瓊脂集落形成試驗來檢測細胞的非依賴生長能力;4.用粘附試驗和Transwell遷移實驗來檢測細胞的粘附能力和體外遷移能力!狙芯拷Y(jié)果】1.成功的構(gòu)建了mi R-100抑制劑的慢病毒表達載體并穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞株。2.慢病毒感染的BEAS-2B中mi R-100的表達被明顯的抑制。3.MTT實驗和克隆形成實驗結(jié)果顯示,抑制mi R-100的表達后,BEAS-2B細胞生長增殖能力有所增加。4.抑制BEAS-2B細胞中mi R-100的表達后,細胞的錨定非依賴生長能力增強,形成了較大的集落。5.粘附試驗和Transwell遷移實驗結(jié)果表明,抑制mi R-100的表達后,BEAS-2B細胞的粘附和體外遷移能力有一定程度的增強!狙芯拷Y(jié)論】1.通過mi R-100抑制劑慢病毒載體穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞,成功的抑制了BEAS-2B細胞中mi R-100的表達。2.抑制mi R-100的表達,促進了BEAS-2B細胞的增殖、生長和遷移能力。
【關(guān)鍵詞】:miR-100抑制劑 慢病毒載體 BEAS-2B細胞
【學位授予單位】:安徽醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R730.2
【目錄】:
- 中英文縮寫一覽表5-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-11
- 前言11-14
- 材料與方法14-24
- 結(jié)果24-33
- 討論33-36
- 結(jié)論36
- 參考文獻36-42
- 附錄42-43
- 致謝43-44
- 綜述44-51
- 參考文獻47-51
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1 董偉;microRNA-100抑制劑慢病毒表達載體的構(gòu)建及其對BEAS-2B細胞行為學的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2015年
本文關(guān)鍵詞:microRNA-100抑制劑慢病毒表達載體的構(gòu)建及其對BEAS-2B細胞行為學的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號:493667
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