本文關(guān)鍵詞：HELQ激活CHK1-RAD51信號通路抑制人骨肉瘤細胞惡性表型，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討HELQ對人骨肉瘤細胞DNA損傷修復(fù)及惡性表型的影響及分子機制。方法:構(gòu)建靶向HELQ的慢病毒載體(Lv-sh HELQ、Lv-HELQ)和陰性對照載體,分別轉(zhuǎn)染人骨肉瘤細胞系143B和U2-OS細胞,陰性慢病毒轉(zhuǎn)染為陰性對照。轉(zhuǎn)染48h后,分別運用Transwell實驗、劃痕實驗、CCK8實驗和彗星實驗檢測人骨肉瘤細胞的侵襲、遷移、增殖能力以及細胞中DNA損傷水平。運用熒光定量PCR實驗檢測細胞中HELQ mRNA表達水平,Western Blot實驗檢測細胞中HELQ、CHK1以及RAD51蛋白表達水平。結(jié)果:骨肉瘤細胞系143B和U2-OS細胞中HELQ mRNA表達水平明顯低于成骨細胞,而HELQ蛋白表達水平卻明顯高于成骨細胞。與陰性對照組相比,下調(diào)HELQ的表達水平可以顯著增強骨肉瘤細胞的侵襲、遷移以及增殖能力,而上調(diào)HELQ的表達水平可以顯著抑制骨肉瘤細胞的侵襲、遷移以及增殖能力;上調(diào)HELQ的骨肉瘤細胞中DNA損傷水平明顯下降,而下調(diào)HELQ的骨肉瘤細胞中DNA損傷水平明顯上升。與陰性對照相比,轉(zhuǎn)染Lv-HELQ的骨肉瘤細胞中HELQ、CHK1、RAD51蛋白表達水平明顯升高,而轉(zhuǎn)染Lv-sh HELQ的骨肉瘤細胞中HELQ、CHK1、RAD51蛋白表達水平明顯下降。結(jié)論:HELQ可激活CHK1-RAD51信號通路促進DNA修復(fù)并抑制骨肉瘤細胞的惡性表型。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 HELQ DNA損傷 CHK1 RAD51
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R738
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 中英文縮略詞表7-8
• 第1章 引言8-10
• 第2章 材料與方法10-24
• 2.1 細胞株10
• 2.2 慢病毒載體10
• 2.3 主要儀器10-11
• 2.4 主要試劑11-12
• 2.4.1 細胞培養(yǎng)主要試劑11
• 2.4.2 熒光定量PCR主要試劑11
• 2.4.3 Western Blot實驗主要試劑11-12
• 2.4.4 其他12
• 2.5 主要試劑的配制12-14
• 2.5.1 細胞培養(yǎng)主要試劑配制12
• 2.5.2 qRT-PCRPCR實驗主要試劑配制12
• 2.5.3 Western Blot實驗主要試劑配制12-14
• 2.6 實驗方法14-23
• 2.6.1 細胞培養(yǎng)14-15
• 2.6.2 慢病毒轉(zhuǎn)染15
• 2.6.3 qRT-PCR檢測細胞HELQ mRNA表達水平15-18
• 2.6.4 Western Blot檢測細胞HELQ、CHK1、RAD51蛋白的表達水平18-21
• 2.6.5 Transwell invasion實驗檢測細胞侵襲能力21
• 2.6.6 Wound Healing實驗檢測細胞遷移能力21
• 2.6.7 CCK8實驗檢測細胞增殖能力21-22
• 2.6.8 彗星實驗檢測細胞DNA損傷水平22-23
• 2.7 統(tǒng)計處理23-24
• 第3章 結(jié)果24-31
• 3.1 人骨肉瘤細胞與成骨細胞中HELQ m RNA表達情況24
• 3.2 人骨肉瘤細胞與成骨細胞中HELQ蛋白表達情況24-26
• 3.3 HELQ對人骨肉瘤U2-OS和 143B細胞侵襲能力的影響26-27
• 3.4 HELQ對人骨肉瘤 143B和U2-OS細胞遷移能力的影響27-28
• 3.5 HELQ對人骨肉瘤 143B和U2-OS細胞增殖能力的影響28
• 3.6 HELQ對人骨肉瘤 143B和U2-OS細胞DNA損傷水平的影響28-29
• 3.7 HELQ對CHK1-RAD51信號通路的影響29-31
• 第4章 討論31-34
• 第5章 結(jié)論與展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-39
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果39-40
• 綜述 DNA損傷修復(fù)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的研究進展40-44
• 參考文獻44

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