本文關鍵詞：NU7441對肝癌HepG2細胞放療敏感性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer,PLC)是一種惡性程度高、治愈率低的臨床常見惡性腫瘤,居全球惡性腫瘤發(fā)病率的第六位,病死率的第三位。臨床上原發(fā)性肝癌的主要治療方法包括手術治療、化療、放療、肝動脈化療栓塞、分子靶向治療、中醫(yī)治療等方法。由于肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的早期臨床癥狀不明顯,大部分患者就診時已處于肝癌晚期,失去了手術機會。隨著肝癌精確放療技術的發(fā)展,放射治療已成為晚期肝癌的主要治療方法之一。放療無異于電離輻射,腫瘤細胞受到射線照射后,會發(fā)生DNA損傷,損傷如果得不到及時精確地修復,就會出現(xiàn)細胞凋亡。腫瘤細胞具有高效的修復機制,在受到電離輻射時,細胞DNA雙鏈斷裂,繼之啟動修復機制。真核細胞DNA損傷主要存在兩種修復方式:非同源末端連接(Non homologous end joining,NHEJ)和同源重組(Homologous recombination,HR)。在電離輻射引起的DNA損傷中,修復途徑以非同源末端連接為主,抑制DNA修復途徑有利于促進腫瘤細胞凋亡,提高腫瘤放射治療的療效。DNA依賴性蛋白激酶(DNA dependent protein kinase,DNA-PK)復合物是非同源末端連接修復途徑的關鍵組分,且DNA-PK的催化亞單位(DNA dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)是其中的關鍵蛋白。目前多種DNA-PK抑制劑已用于腫瘤放療增敏的實驗研究,人工合成的小分子化合物NU7441作為DNA-PK的特異性抑制劑,在乳腺癌、肺癌、白血病、前列腺癌聯(lián)合放療的研究中表現(xiàn)出放射增敏效應。NU7026是另一種DNA-PK抑制劑。有關NU7441與肝癌關系的研究目前國內外尚乏報道,本研究以肝癌Hep G2細胞為研究對象,擬采用Cell Counting Kits-8(CCK-8)、Western blot、免疫熒光共聚焦、單細胞凝膠電泳及流式細胞術的方法,探討NU7441對肝癌Hep G2細胞放療敏感性的作用及其作用機制,為臨床肝癌放療增敏劑的開發(fā)與應用提供新思路。方法:1應用CCK-8實驗檢測NU7441在不同濃度(0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L)及不同作用時間(12h、24h、48h和72h)下對Hep G2細胞增殖的影響,并繪制相應的作用曲線。2應用Western blot的方法檢測①DNA-PKcs在正常肝細胞LO2、肝癌細胞Hep G2細胞及4Gy 60Coγ射線照射后的Hep G2細胞中的表達情況;②NU7441對4Gy 60Coγ射線照射后的Hep G2細胞中Ku70、Ku80、DNA-PKcs及p DNA-PKcs(S2056)蛋白表達的影響;③NU7441和另一種放療增敏劑NU7026在相同條件對p DNA-PKcs(S2056)蛋白表達的影響。3應用單細胞凝膠電泳實驗及免疫熒光共聚焦實驗檢測在NU7441有無的情況下,4Gy 60Coγ射線照射后的Hep G2細胞在不同時間點的DNA損傷修復情況。4應用流式細胞術檢測Hep G2細胞在對照組(Control)、單純照射組(IR)、單純加藥組(NU7441)、加藥聯(lián)合放射組(NU7441+IR)中,作用12h后,比較各組細胞在細胞周期的各時相中所占的比例。5采用統(tǒng)計學軟件SPSS17.0進行實驗數(shù)據(jù)分析,實驗結果用均數(shù)±標準差表示。兩獨立樣本采用t檢驗,多個獨立樣本的比較采One-Way ANOVA的分析方法,組間比較采用SNK方法,P0.05視為有統(tǒng)計學差異。結果:1 CCK-8增殖實驗表明:NU7441對Hep G2細胞的增殖具有一定的抑制作用,且具有濃度和時間依賴性;NU7441在濃度為5μmol/L及以上濃度下,這用抑制作用更加明顯(P0.05)。2 Western blot實驗表明:①DNA-PKcs在LO2細胞、Hep G2細胞及4Gy 60Coγ射線照射后Hep G2細胞中的表達依次增高;②與未加藥照射組相比,在NU7441作用下,4Gy 60Coγ射線照射后Hep G2細胞中Ku70、Ku80及DNA-PKcs的蛋白表達量沒有明顯變化,而磷酸化p DNA-PKcs(S2056)的蛋白表達量明顯降低,NU7441的抑制作用主要是影響了DNA-PKcs的活性;③在相同實驗條件下,NU7441組比NU7026組p DNA-PKcs(S2056)的蛋白表達量下降明顯,NU7441對DNA-PKcs的活性抑制作用強于NU7026。3免疫熒光實驗表明:Hep G2細胞在受照射后,細胞中的γH2AX焦點數(shù)量在一定時間范圍在先增加后減少,在加入NU7441作用以后,γH2AX焦點數(shù)量也是先增加后減少,但與單純照射組相比,γH2AX焦點數(shù)量下降的速率比照射組緩慢(P0.05)。4中性單細胞凝膠電泳實驗表明:Hep G2細胞在經(jīng)過4Gy 60Coγ射線處理后,DNA發(fā)生損傷,表現(xiàn)為照射組彗星細胞的尾矩明顯大于無任何處理組(P0.05);經(jīng)過4h的修復后,加入NU7441照射組的修復速度較單純照射組減慢,表現(xiàn)為加藥照射組的尾矩比照射組大(P0.05)。5流式細胞術檢測細胞周期的實驗表明:與無任何處理Control組相比,IR組的G2/M期細胞的比例明顯增加(P0.05),NU7441組沒有統(tǒng)計學差異(P0.05);(NU7441+IR)組的G2/M期細胞的比例較IR組明顯增加(P0.05),且細胞凋亡率與Control組相比明顯增加(P0.05)。結論:NU7441對Hep G2細胞的增殖具有抑制作用,且這種作用具有時效和量效關系。NU7441通過抑制DNA-PKcs的活性,抑制輻射后Hep G2細胞DNA損傷的修復;同時通過引起細胞發(fā)生G2/M期的阻滯,誘導細胞凋亡,從而增加Hep G2細胞對輻射的敏感性,因此NU7441具有潛在放療增敏作用。
【關鍵詞】：NU7441 肝癌 放療增敏 非同源末端連接 DNA-PK 細胞周期
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 結果22-26
• 附圖26-27
• 附表27-28
• 討論28-30
• 結論3330
• 參考文獻30-34
• 綜述 DNA依賴性蛋白激酶及其抑制劑與腫瘤治療的研究進展34-45
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳霞;趙枰;魯曉燕;;血清中人附睪上皮分泌蛋白4的測定與卵巢上皮性腫瘤患者臨床病理特征的關系[J];標記免疫分析與臨床;2010年06期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李玲;兔實驗性大腸埃希菌腦膜炎脈絡叢GLUT1的變化[D];中南大學;2013年

  本文關鍵詞：NU7441對肝癌HepG2細胞放療敏感性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：485762