發(fā)布時(shí)間：2017-06-26 10:19

  本文關(guān)鍵詞：SENP1表達(dá)水平對(duì)人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制及其相關(guān)性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤在所有原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中占比約32%,約占人類惡性腫瘤的81%左右,目前認(rèn)為起源于神經(jīng)外胚層,是迄今為止最為常見的顱內(nèi)惡性腫瘤。按照WHO 2007年提出的病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),可以劃分為4個(gè)級(jí)別:Ⅰ級(jí)為毛細(xì)胞型星形膠質(zhì)瘤,占膠質(zhì)瘤的5%;Ⅱ級(jí)為擴(kuò)散型星形膠質(zhì)瘤,占膠質(zhì)瘤的30~40%;Ⅲ級(jí)為間變型星形膠質(zhì)瘤,約占15~25%,此級(jí)別腫瘤一般由Ⅱ級(jí)擴(kuò)散型星形膠質(zhì)瘤演變而來;Ⅳ級(jí)為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤,占顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的30%左右。另外,有文獻(xiàn)發(fā)表相關(guān)報(bào)道,人類腦膠質(zhì)瘤目前的發(fā)病率為3.87人/10萬人,在全身惡性腫瘤的發(fā)病中約占1%~3%,而接受手術(shù)、放療和化療的綜合治療后,患者的平均生存期也僅為8~11個(gè)月,由此推斷每年死于惡性腦膠質(zhì)瘤的患者不少于60萬人,而且,此數(shù)目仍逐年增長趨勢。因此,人類腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的研究已經(jīng)成為一個(gè)亟待解決的課題。隨著醫(yī)療領(lǐng)域的研究進(jìn)展,研究者在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制方面的了解更為深入,并為研制新的腫瘤抑制藥物提供充足的理論基礎(chǔ)。通過對(duì)正常腦組織以及不同級(jí)別星形膠質(zhì)瘤組織中,SUMO特異性蛋白酶1(SENP1)的表達(dá)水平的檢測,分析其與病情進(jìn)展的相關(guān)性,采用RNA干擾技術(shù)敲減U251MG膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中SENP1的表達(dá),研究其表達(dá)水平對(duì)U251細(xì)胞的增殖和凋亡的影響,以及可能存在的分子調(diào)控機(jī)制。方法通過采用RT-q PCR和Western blotting兩種方法,檢測正常對(duì)照組(3例)和星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤組(28例)標(biāo)本中,SENP1在m RNA水平和蛋白水平上表達(dá)的差異性。通過設(shè)計(jì)合成具有SENP1特異性的si RNA,按照體積2ml、2.5×105個(gè)/孔,將U251MG細(xì)胞接種于6孔板之中,在接種12小時(shí)后轉(zhuǎn)染si-NC(正常對(duì)照組)、si-1、si-2(SENP1敲減組),當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上后,轉(zhuǎn)染細(xì)胞然后繼續(xù)將其培養(yǎng)48小時(shí),采用RT-q PCR和Western blotting方法來檢測SENP1在m RNA和蛋白水平上的表達(dá)的情況。與此同時(shí),在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251MG中沉默SENP1,在流式細(xì)胞儀上,通過對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面上的磷脂酰絲氨酸(PS)進(jìn)行檢測,以評(píng)估膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的數(shù)量。最后,在U251MG細(xì)胞中將SENP1的表達(dá)敲減,再通過Western blotting方法檢測胞內(nèi)的AKT的蛋白表達(dá)的情況及磷酸化的水平,以及該通路下游的靶因子p21,cyclin D1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果通過對(duì)所收集的31例腦標(biāo)本組織進(jìn)行RT-q PCR檢測時(shí)發(fā)現(xiàn):在人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤中,SENP1的m RNA表達(dá)水平明顯高于正常腦組織(P0.05),并且隨腫瘤的惡性程度的增高表達(dá)水平亦增高,而且在高級(jí)別的星形細(xì)胞膠質(zhì)瘤(Ⅲ、Ⅳ級(jí),WHO分級(jí))中增高的水平更為顯著(P0.01);在蛋白水平上,通過Western blotting方法檢測,SENP1在正常組織和不同級(jí)別膠質(zhì)細(xì)胞瘤之間蛋白水平的差異性結(jié)果,與m RNA水平上的表達(dá)情況類似。轉(zhuǎn)染SENP1 si RNA后,U251MG細(xì)胞中SENP1的m RNA水平上的表達(dá)受到抑制(P0.01),蛋白水平上的表達(dá)也呈現(xiàn)降低。細(xì)胞凋亡的分析結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染si-1、si-2(SENP1敲減組)的U251MG細(xì)胞,與si-NC(正常對(duì)照組)相比,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增加,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析凋亡率相對(duì)于正常對(duì)照組亦顯著增加(P0.05),該結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在U251MG細(xì)胞中敲減SENP1后,在蛋白水平上,通過Western blotting實(shí)驗(yàn)方法檢測Akt、周期蛋白cyclin D1、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)的負(fù)性調(diào)節(jié)因子p21的表達(dá)情況,分析發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,Akt的磷酸化水平明顯降低且其下游靶因子cyclin D1的表達(dá)亦隨之降低,而其下游與細(xì)胞周期相關(guān)的p21蛋白的表達(dá)則隨之升高。結(jié)論1 SENP1在人腦正常組織和不同級(jí)別膠質(zhì)瘤標(biāo)本中的表達(dá)差異與該類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,可以作為臨床監(jiān)測以及預(yù)后評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。2 SENP1可以通過調(diào)控PI3K-Akt通路介導(dǎo)的抗凋亡途徑,即通過調(diào)控Akt的磷酸化水平,影響其下游基因p21,cyclin D1蛋白的表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)U251MG細(xì)胞的增殖或者凋亡,從而進(jìn)一步證明了在促進(jìn)癌癥發(fā)生發(fā)展過程中,SENP1可能是一種新的分子生物學(xué)機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：腦膠質(zhì)瘤 SENP1 U251MG細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 PI3K-Akt信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 第一節(jié) SENP1 在人星形膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及與疾病進(jìn)展的關(guān)聯(lián)11-23
• 前言11
• 材料與方法11-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-23
• 第二節(jié) RNA干擾敲減SENP1 基因表達(dá)后對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞株U251MG增殖和凋亡的影響23-30
• 前言23-24
• 材料與方法24-27
• 結(jié)果27-28
• 附圖28-30
• 第三節(jié) SENP1 對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251 凋亡作用的分子機(jī)制研究30-34
• 前言30
• 材料與方法30-31
• 結(jié)果31-33
• 附圖33-34
• 討論34-39
• 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述SENP1 靶向治療研究進(jìn)展42-54
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王少華;黃振平;田農(nóng);陳穗樺;;眼內(nèi)直視下鞏膜外冷凝視網(wǎng)膜裂孔[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2007年03期

  本文關(guān)鍵詞：SENP1表達(dá)水平對(duì)人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制及其相關(guān)性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：485803