本文關(guān)鍵詞：GRHL1基因在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)揮的作用及相關(guān)機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討GRHL1(Grainy head-like 1)在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況及其癌癥相關(guān)性作用,并研究其表達(dá)下調(diào)的發(fā)生機(jī)制。方法:通過免疫組化和熒光定量PCR檢測GRHL1在肺癌與癌旁肺組織中的表達(dá)是否存在差異;進(jìn)而通過過表達(dá)GRHL1,采用MTT、克隆形成實驗、Transwell實驗和流式細(xì)胞儀凋亡檢測等方法,探索GRHL1對肺癌細(xì)胞增殖、克隆形成、侵襲和凋亡的影響;再采用飛行時間質(zhì)譜分析檢測GRHL1基因啟動子區(qū)甲基化情況來探索GRHL1基因下調(diào)的機(jī)制。結(jié)果:免疫組化的結(jié)果顯示75例檢測樣本中,肺癌GRHL1的表達(dá)缺失,剩余25例樣本肺癌表達(dá)亦明顯低于癌旁肺組織。q PCR的結(jié)果也檢出Ⅱ、Ⅲ期肺癌的GRHL1表達(dá)水平較癌旁肺組織下調(diào)。細(xì)胞學(xué)實驗顯示:GRHL1的過表達(dá)可明顯增加肺癌細(xì)胞的凋亡率(P0.01),而對肺癌細(xì)胞的增殖、克隆形成和侵襲無明顯影響(P0.05)。飛行時間質(zhì)譜分析的結(jié)果顯示6株肺癌細(xì)胞系中的GRHL1啟動子區(qū)發(fā)生明顯的異常甲基化。結(jié)論:GRHL1基因在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)明顯下調(diào);GRHL1可發(fā)揮促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡的作用;GRHL1基因發(fā)生啟動子區(qū)異常甲基化可能是其在肺癌中表達(dá)下調(diào)的機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 GRHL1 基因甲基化 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 中英文縮略詞表7-8
• 第1章 引言8-11
• 第2章 材料與方法11-26
• 2.1 材料11-13
• 2.1.1 細(xì)胞11
• 2.1.2 慢病毒載體系統(tǒng)11
• 2.1.3 主要試劑11-12
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備12-13
• 2.2 實驗設(shè)計和方法步驟13-26
• 2.2.1 免疫組織化學(xué)染色法13-14
• 2.2.2 q PCR檢測肺癌標(biāo)本中GRHL1表達(dá)水平14-16
• 2.2.3 肺癌細(xì)胞培養(yǎng)16
• 2.2.4 Western-Blot16-18
• 2.2.5 肺癌細(xì)胞DNA提取18-19
• 2.2.6 甲基化檢測19-22
• 2.2.7 去甲基化影響GRHL1表達(dá)22-23
• 2.2.8 構(gòu)建重組慢病毒23
• 2.2.9 MTT檢測肺癌細(xì)胞增殖情況23-24
• 2.2.10 細(xì)胞克隆實驗24
• 2.2.11 Transwell實驗24-25
• 2.2.12 凋亡檢測25
• 2.2.13 統(tǒng)計學(xué)處理25-26
• 第3章 結(jié)果26-36
• 3.1 GRHL1在肺癌與癌旁的表達(dá)差異及肺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況26-30
• 3.1.1 免疫組化顯示GRHL1在肺癌中的表達(dá)明顯較癌旁正常肺組織低26-28
• 3.1.2 臨床分期較高的NSCLC癌組織中GRHL1表達(dá)明顯下調(diào)28-29
• 3.1.3 不同肺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況29-30
• 3.2 GRHL1過表達(dá)對細(xì)胞克隆增殖、侵襲、凋亡的影響30-34
• 3.2.1 穩(wěn)定細(xì)胞系鑒定30-31
• 3.2.2 MTT實驗31
• 3.2.3 細(xì)胞克隆形成實驗31-32
• 3.2.4 Transwell實驗32-33
• 3.2.5 細(xì)胞凋亡實驗33-34
• 3.3 肺癌細(xì)胞GRHL1基因啟動子區(qū)序列異常甲基化可致使其表達(dá)下調(diào)34-36
• 3.3.1 GRHL1基因在肺癌細(xì)胞系中檢測到明顯的超甲基化34-35
• 3.3.2 5-Aza處理后GRHL1基因表達(dá)情況35-36
• 第4章 討論36-39
• 第5章 結(jié)論與展望39-40
• 5.1 結(jié)論39
• 5.2 展望39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述45-52
• 參考文獻(xiàn)48-52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：485733