本文關鍵詞：K562細胞規(guī)�；囵B(yǎng)及砸酸多糖誘導其凋亡的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本實驗以K562人慢性髓源白血病細胞為研究對象,研究了生物反應器規(guī)�；囵B(yǎng)K562細胞的基本條件,另外通過MTT法、HE染色、流式細胞術、免疫熒光法和RT-PCR等手段從細胞形態(tài)學的變化、細胞周期、線粒體膜電位的變化、相關周期蛋白、相關凋亡蛋白及其基因的表達等方面探討了硒酸軟骨多糖對K562細胞的誘導凋亡作用及其作用機理。首先,對生物反應器規(guī)�；囵B(yǎng)K562細胞的基本條件,即初始密度、培養(yǎng)基pH值和攪拌速度進行了研究,結果表明,K562細胞規(guī)模化培養(yǎng)的最佳條件為：細胞初始密度2.5×105個/mL,培養(yǎng)基pH值7.4,攪拌速度70r/min,該條件下細胞達到的最大生長密度為1.57×106個/mL。其次,研究了硒酸軟骨多糖對K562細胞的增殖抑制及凋亡誘導作用。通過MTT法檢測發(fā)現硒酸軟骨多糖能顯著抑制K562細胞的增殖,100μg/mL的軟骨多糖作用K562細胞48h后,抑制率可達到80%,且這種抑制作用呈現出明顯的濃度依賴性和時間依賴性。通過細胞形態(tài)顯微鏡觀察、HE染色和Hoechst33342/PI雙染發(fā)現硒酸軟骨多糖能夠使K562細胞出現體積縮小、染色質固縮等典型的凋亡特征。通過流式細胞術發(fā)現：(a)硒酸軟骨多糖能夠將k562細胞阻滯在S期,多糖處理48h后S期細胞數由40.75%增至62.93%；(b)羅丹明-123染色顯示強熒光部分的細胞數量降低了18%,細胞線粒體膜電位顯著下降。通過免疫熒光和ELISA法檢測發(fā)現,硒酸軟骨多糖處理后,細胞周期相關的Cyclin A、CDK2蛋白和Bcl-2蛋白表達減少,p21蛋白和caspase-9蛋白表達增多；通過實時定量熒光PCR技術對上述蛋白的mRNA表達進行了檢測,實驗結果與蛋白表達一致。以上結果說明硒酸軟骨多糖能夠顯著抑制K562細胞的增殖并誘導其凋亡。本實驗為利用細胞規(guī)�；囵B(yǎng)生產疫苗、抗體等生物制品奠定了基礎。
【關鍵詞】：K562細胞 規(guī)�；囵B(yǎng) 硒酸軟骨多糖 細胞凋亡
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-23
• 1.1 人慢性髓源白血病(CML)概述8-9
• 1.1.1 CML簡介8
• 1.1.2 CML治療現狀8-9
• 1.2 多糖的研究現狀9-12
• 1.2.1 多糖概述9
• 1.2.2 多糖的種類9-10
• 1.2.3 多糖的生物活性10-11
• 1.2.4 多糖在抗腫瘤方面的研究11-12
• 1.3 硒多糖12-14
• 1.3.1 硒12
• 1.3.2 硒多糖的來源12-13
• 1.3.3 硒多糖的作用13-14
• 1.4 細胞規(guī)�；囵B(yǎng)的發(fā)展14-16
• 1.4.1 細胞規(guī)�；囵B(yǎng)技術及應用15
• 1.4.2 細胞規(guī)�；囵B(yǎng)的影響因素15-16
• 1.4.3 細胞規(guī)�；囵B(yǎng)的發(fā)展16
• 1.5 細胞凋亡16-21
• 1.5.1 細胞凋亡的途徑16-19
• 1.5.2 細胞凋亡相關蛋白19-21
• 1.6 本課題研究的目的和意義21-23
• 2 材料與方法23-36
• 2.1 實驗材料23-25
• 2.1.1 實驗試劑及藥品23-24
• 2.1.2 實驗儀器及設備24-25
• 2.1.3 實驗細胞25
• 2.2 K562細胞規(guī)�；囵B(yǎng)條件的確定25-26
• 2.2.1 初始密度對細胞生長的影響25
• 2.2.2 培養(yǎng)基最佳pH的確定25-26
• 2.2.3 反應器最佳轉速的確定26
• 2.3 硒酸軟骨多糖對K562細胞的增殖抑制和凋亡誘導作用26-36
• 2.3.1 MTT法檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞的增殖抑制作用26-27
• 2.3.2 HE染色檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞的影響27-28
• 2.3.3 Hoechst33342/PI雙染法檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞的作用28-29
• 2.3.4 流式細胞儀檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞周期的影響29-30
• 2.3.5 羅丹明-123檢測K562細胞線粒體膜電位30
• 2.3.6 免疫熒光30-31
• 2.3.7 ELISA法檢測細胞內CDK2和Bcl-2的表達31-32
• 2.3.8 RT-PCR檢測細胞內表達水平32-36
• 3 結果與討論36-51
• 3.1 K562細胞規(guī)�；囵B(yǎng)條件的確定36-38
• 3.1.1 最佳初始密度的確定36
• 3.1.2 培養(yǎng)基最佳pH的確定36-37
• 3.1.3 反應器最佳轉速的確定37-38
• 3.2 硒酸軟骨多糖對K562細胞的增殖抑制及凋亡誘導作用38-51
• 3.2.1 MTT法檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞的增殖抑制作用38-39
• 3.2.2 硒酸軟骨多糖作用不同時間K562的形態(tài)觀察39
• 3.2.3 HE染色檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞的影響39-40
• 3.2.4 Hoechst 33342/PI雙染法檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞的作用40-42
• 3.2.5 流式細胞儀檢測硒酸軟骨多糖對K562細胞周期的影響42-43
• 3.2.6 羅丹明-123檢測K562細胞線粒體膜電位43-44
• 3.2.7 免疫熒光44-46
• 3.2.8 ELISA法檢測細胞內CDK2和Bcl-2的表達46-47
• 3.2.9 實時定量熒光PCR(RT-PCR)檢測相關蛋白mRNA的表達47-51
• 4 結論51-53
• 5 展望53-54
• 6 參考文獻54-63
• 7 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況63-64
• 8 致謝64

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