本文關(guān)鍵詞：Versican在舌鱗癌中的表達(dá)及其對(duì)舌鱗癌細(xì)胞Tca-8113生物學(xué)行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的舌鱗癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤,其惡性程度高,浸潤性強(qiáng),生長快,易發(fā)生早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,且轉(zhuǎn)移率較高。盡管近年來手術(shù)方式、放療及化療水平不斷提高,但是由于其區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,侵襲能力強(qiáng),舌鱗癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率及死亡率依然很高,預(yù)后較差。因此,舌鱗癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究越來越受到諸多學(xué)者的廣泛重視,尤其在分子水平上。近幾年來,隨著生物治療的不斷發(fā)展,分子靶向藥物治療作為其重要組成部分也受到廣泛重視并逐漸興起,有望將腫瘤的治療推向一個(gè)前所未有的新領(lǐng)域。因此,著重從不同分子水平研究舌鱗癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移機(jī)制,及如何阻斷這些過程將對(duì)提高舌鱗癌患者的生存率有著非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。Versican是細(xì)胞外基質(zhì)中無處不在的表達(dá)成分,屬于外源凝集素家族,是一種分子量很大的硫酸軟骨素蛋白聚糖。由一個(gè)蛋白核心和連接在其上的12~15個(gè)硫酸軟骨素側(cè)鏈所構(gòu)成,包括一個(gè)氨基端的Gl亞基、一個(gè)羧基端的G3亞基和二者之間的軟骨素側(cè)鏈結(jié)合區(qū)域。Gl亞基由兩個(gè)蛋白聚糖串聯(lián)重復(fù)序列和一個(gè)免疫球蛋白類基序構(gòu)成。G3亞基由一個(gè)互補(bǔ)結(jié)合蛋白基序、兩個(gè)類表皮生長因子重復(fù)序列和一個(gè)碳水化合物識(shí)別區(qū)域構(gòu)成。versican通過其帶負(fù)電荷的硫酸軟骨素側(cè)鏈和Gl、G3區(qū)與其他蛋白的結(jié)合來調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲等生物學(xué)行為。versican可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力已被許多研究證實(shí)。本研究首先通過免疫組化(SP法)方法,檢測(cè)versican在不同臨床病理學(xué)舌鱗癌組織及正常舌體組織中的表達(dá)情況,來探討versican與腫瘤分化程度、臨床分期等的關(guān)系,研究其與舌鱗癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。然后對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞株Tca-8113進(jìn)行體外培養(yǎng),然后沉默Versican基因在舌鱗癌細(xì)胞株Tca-8113中的表達(dá),觀察versican基因沉默后Tca-8113細(xì)胞的生長、粘附、侵襲及遷移能力的變化,以研究versican對(duì)舌鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。以期能為舌鱗癌的生物治療提出新的靶點(diǎn)。本研究包括以下兩個(gè)部分:第一部分:Versican在舌鱗癌中的表達(dá)及意義材料與方法1,臨床資料:隨機(jī)選用鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔頜面外科2012年1月-2015年1月經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為舌鱗狀細(xì)胞癌的組織標(biāo)本120例,全部病例均有明確的病理診斷及完整的臨床資料。其中男性69例,女性51例;年齡28~75(53.4±4.5)歲;有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例,無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移82例;TNM分期(依據(jù)國際癌聯(lián)UICC2002年分級(jí)分期標(biāo)準(zhǔn)):Ⅰ-Ⅱ期79人,Ⅲ-Ⅳ期41人;依據(jù)患者病歷資料中的病理報(bào)告分級(jí)的組織學(xué)分級(jí)(G):高分化(G1)65人,中分化(G2)40人,低分化(G3)15人。另取正常舌體組織標(biāo)本10例做為對(duì)照。2,方法:從Versican蛋白表達(dá)水平入手,應(yīng)用免疫組化染色方法檢測(cè)versican在120例不同臨床病理學(xué)特征舌鱗癌組織及10例正常舌體組織中的表達(dá)水平。結(jié)果SP免疫組化結(jié)果:Versican陽性表達(dá)呈現(xiàn)為舌鱗癌細(xì)胞周圍間質(zhì)及少數(shù)癌細(xì)胞胞質(zhì)呈棕黃色染色。Versican在10例正常舌組織中主要表達(dá)在血管周,均呈弱陽性,上皮細(xì)胞均呈陰性表達(dá);Versican在120例舌鱗癌組織中主要表達(dá)在腫瘤間質(zhì)中(高表達(dá)率56.67%),在舌鱗癌細(xì)胞中多呈陰性表達(dá)(陽性率8.33%)。versican的高表達(dá)率與舌鱗癌的組織學(xué)分級(jí)及臨床分期有關(guān),中-低分化及Ⅲ-Ⅳ期舌鱗癌組織中versican的表達(dá)水平更高(p(27)0.05);伴有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的舌鱗癌間質(zhì)中versican表達(dá)水平更高,高表達(dá)率可達(dá)92.11%(p(27)0.05)。小結(jié)Versican在舌鱗癌組織中表達(dá)上調(diào),且versican的表達(dá)可能與舌鱗癌的轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。第二部分:沉默Versican基因?qū)ι圜[癌細(xì)胞株Tca-8113細(xì)胞增殖、粘附、侵襲等生物學(xué)行為的影響材料與方法1,細(xì)胞株:人舌鱗癌細(xì)胞株Tca-8113細(xì)胞購于北京天恩澤生物技術(shù)公司。2,方法:1)人舌鱗癌細(xì)胞株Tca-8113的常規(guī)培養(yǎng)。2)將化學(xué)合成的versican-si RNA轉(zhuǎn)染至人舌鱗癌細(xì)胞株Tca-8113。3)將實(shí)驗(yàn)分成三組:實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染Versican-si RNA的Tca-8113細(xì)胞)、空白對(duì)照組(未進(jìn)行任何轉(zhuǎn)染的Tca-8113細(xì)胞)、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染空載體的Tca-8113細(xì)胞)。4)熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率;q RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Versican m RNA的表達(dá)水平;最后應(yīng)用MTT法、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲小室法分別檢測(cè)versican基因沉默后Tca-8113細(xì)胞生長、粘附、遷移及侵襲能力的變化。結(jié)果1)熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率大于70%,q RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組Versican m RNA的水平下調(diào),抑制率(0.23±0.03),與兩對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2)MTT法、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞轉(zhuǎn)染Versican-si RNA后,細(xì)胞的體外增殖、侵襲、遷移能力均較對(duì)照組有明顯減弱,細(xì)胞粘附能力增強(qiáng),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。小結(jié)舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞轉(zhuǎn)染Versican-si RNA后,Versican m RNA的表達(dá)水平下調(diào);細(xì)胞的體外增殖、侵襲、遷移能力均較對(duì)照組有明顯減弱,而細(xì)胞粘附能力明顯增強(qiáng)。全文結(jié)論1)Versican在舌鱗癌組織中表達(dá)上調(diào),且versican的表達(dá)可能與舌鱗狀細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。2)Versican-si RNA可體外有效干擾舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞中versican m RNA的表達(dá)水平。3)沉默Versican基因的表達(dá)可體外明顯抑制舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力,上調(diào)細(xì)胞粘附能力。
【關(guān)鍵詞】：舌鱗狀細(xì)胞癌 versican Tca-8113 增殖 轉(zhuǎn)移 RNA干擾 siRNA轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.86
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-13
• 英文縮略詞表13-14
• 前言14-17
• 第一部分：Versican在舌鱗癌中的表達(dá)及意義17-28
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 3. 結(jié)果21-25
• 4. 討論25-27
• 5. 小結(jié)27-28
• 第二部分：沉默Versican基因?qū)ι圜[癌細(xì)胞株Tca-8113 細(xì)胞增殖、侵襲等生物學(xué)行為的影響28-48
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料28-31
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法31-39
• 3. 結(jié)果39-46
• 4. 討論46-47
• 5. 小結(jié)47-48
• 全文結(jié)論48-49
• 展望49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 綜述 Versican在腫瘤中生物學(xué)作用的研究進(jìn)展53-65
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 個(gè)人簡歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果65-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

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1 David P. LA PIERRE,Albert J. YEE,Burton B. YANG;The interaction of versican with its binding partners[J];Cell Research;2005年07期

  本文關(guān)鍵詞：Versican在舌鱗癌中的表達(dá)及其對(duì)舌鱗癌細(xì)胞Tca-8113生物學(xué)行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：482107