本文關鍵詞：Versican在舌鱗癌中的表達及其對舌鱗癌細胞Tca-8113生物學行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的舌鱗癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤,其惡性程度高,浸潤性強,生長快,易發(fā)生早期淋巴結轉移,且轉移率較高。盡管近年來手術方式、放療及化療水平不斷提高,但是由于其區(qū)域淋巴結轉移率高,侵襲能力強,舌鱗癌患者術后復發(fā)率及死亡率依然很高,預后較差。因此,舌鱗癌細胞侵襲及轉移機制的研究越來越受到諸多學者的廣泛重視,尤其在分子水平上。近幾年來,隨著生物治療的不斷發(fā)展,分子靶向藥物治療作為其重要組成部分也受到廣泛重視并逐漸興起,有望將腫瘤的治療推向一個前所未有的新領域。因此,著重從不同分子水平研究舌鱗癌細胞的侵襲、轉移機制,及如何阻斷這些過程將對提高舌鱗癌患者的生存率有著非常重要的現(xiàn)實意義。Versican是細胞外基質中無處不在的表達成分,屬于外源凝集素家族,是一種分子量很大的硫酸軟骨素蛋白聚糖。由一個蛋白核心和連接在其上的12~15個硫酸軟骨素側鏈所構成,包括一個氨基端的Gl亞基、一個羧基端的G3亞基和二者之間的軟骨素側鏈結合區(qū)域。Gl亞基由兩個蛋白聚糖串聯(lián)重復序列和一個免疫球蛋白類基序構成。G3亞基由一個互補結合蛋白基序、兩個類表皮生長因子重復序列和一個碳水化合物識別區(qū)域構成。versican通過其帶負電荷的硫酸軟骨素側鏈和Gl、G3區(qū)與其他蛋白的結合來調節(jié)細胞增殖、凋亡及侵襲等生物學行為。versican可以增強腫瘤細胞的增殖和侵襲能力已被許多研究證實。本研究首先通過免疫組化(SP法)方法,檢測versican在不同臨床病理學舌鱗癌組織及正常舌體組織中的表達情況,來探討versican與腫瘤分化程度、臨床分期等的關系,研究其與舌鱗癌發(fā)生發(fā)展及預后的關系。然后對人舌鱗癌細胞株Tca-8113進行體外培養(yǎng),然后沉默Versican基因在舌鱗癌細胞株Tca-8113中的表達,觀察versican基因沉默后Tca-8113細胞的生長、粘附、侵襲及遷移能力的變化,以研究versican對舌鱗癌細胞生物學行為的影響。以期能為舌鱗癌的生物治療提出新的靶點。本研究包括以下兩個部分:第一部分:Versican在舌鱗癌中的表達及意義材料與方法1,臨床資料:隨機選用鄭州大學第一附屬醫(yī)院口腔頜面外科2012年1月-2015年1月經(jīng)術后病理檢查確診為舌鱗狀細胞癌的組織標本120例,全部病例均有明確的病理診斷及完整的臨床資料。其中男性69例,女性51例;年齡28~75(53.4±4.5)歲;有區(qū)域淋巴結轉移38例,無區(qū)域淋巴結轉移82例;TNM分期(依據(jù)國際癌聯(lián)UICC2002年分級分期標準):Ⅰ-Ⅱ期79人,Ⅲ-Ⅳ期41人;依據(jù)患者病歷資料中的病理報告分級的組織學分級(G):高分化(G1)65人,中分化(G2)40人,低分化(G3)15人。另取正常舌體組織標本10例做為對照。2,方法:從Versican蛋白表達水平入手,應用免疫組化染色方法檢測versican在120例不同臨床病理學特征舌鱗癌組織及10例正常舌體組織中的表達水平。結果SP免疫組化結果:Versican陽性表達呈現(xiàn)為舌鱗癌細胞周圍間質及少數(shù)癌細胞胞質呈棕黃色染色。Versican在10例正常舌組織中主要表達在血管周,均呈弱陽性,上皮細胞均呈陰性表達;Versican在120例舌鱗癌組織中主要表達在腫瘤間質中(高表達率56.67%),在舌鱗癌細胞中多呈陰性表達(陽性率8.33%)。versican的高表達率與舌鱗癌的組織學分級及臨床分期有關,中-低分化及Ⅲ-Ⅳ期舌鱗癌組織中versican的表達水平更高(p(27)0.05);伴有區(qū)域淋巴結轉移的舌鱗癌間質中versican表達水平更高,高表達率可達92.11%(p(27)0.05)。小結Versican在舌鱗癌組織中表達上調,且versican的表達可能與舌鱗癌的轉移及預后有關。第二部分:沉默Versican基因對舌鱗癌細胞株Tca-8113細胞增殖、粘附、侵襲等生物學行為的影響材料與方法1,細胞株:人舌鱗癌細胞株Tca-8113細胞購于北京天恩澤生物技術公司。2,方法:1)人舌鱗癌細胞株Tca-8113的常規(guī)培養(yǎng)。2)將化學合成的versican-si RNA轉染至人舌鱗癌細胞株Tca-8113。3)將實驗分成三組:實驗組(轉染Versican-si RNA的Tca-8113細胞)、空白對照組(未進行任何轉染的Tca-8113細胞)、陰性對照組(轉染空載體的Tca-8113細胞)。4)熒光顯微鏡下觀察轉染效率;q RT-PCR檢測轉染后Versican m RNA的表達水平;最后應用MTT法、細胞粘附實驗、劃痕愈合實驗及Transwell侵襲小室法分別檢測versican基因沉默后Tca-8113細胞生長、粘附、遷移及侵襲能力的變化。結果1)熒光顯微鏡下觀察轉染效率大于70%,q RT-PCR檢測結果顯示,實驗組Versican m RNA的水平下調,抑制率(0.23±0.03),與兩對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2)MTT法、細胞粘附實驗、劃痕愈合實驗及Transwell侵襲實驗結果表明,舌鱗癌Tca-8113細胞轉染Versican-si RNA后,細胞的體外增殖、侵襲、遷移能力均較對照組有明顯減弱,細胞粘附能力增強,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。小結舌鱗癌Tca-8113細胞轉染Versican-si RNA后,Versican m RNA的表達水平下調;細胞的體外增殖、侵襲、遷移能力均較對照組有明顯減弱,而細胞粘附能力明顯增強。全文結論1)Versican在舌鱗癌組織中表達上調,且versican的表達可能與舌鱗狀細胞癌的轉移及預后有關。2)Versican-si RNA可體外有效干擾舌鱗癌Tca-8113細胞中versican m RNA的表達水平。3)沉默Versican基因的表達可體外明顯抑制舌鱗癌Tca-8113細胞的增殖、侵襲和遷移能力,上調細胞粘附能力。
【關鍵詞】：舌鱗狀細胞癌 versican Tca-8113 增殖 轉移 RNA干擾 siRNA轉染
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.86
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-13
• 英文縮略詞表13-14
• 前言14-17
• 第一部分：Versican在舌鱗癌中的表達及意義17-28
• 1. 實驗材料17-19
• 2. 實驗方法19-21
• 3. 結果21-25
• 4. 討論25-27
• 5. 小結27-28
• 第二部分：沉默Versican基因對舌鱗癌細胞株Tca-8113 細胞增殖、侵襲等生物學行為的影響28-48
• 1. 實驗材料28-31
• 2. 實驗方法31-39
• 3. 結果39-46
• 4. 討論46-47
• 5. 小結47-48
• 全文結論48-49
• 展望49-50
• 參考文獻50-53
• 綜述 Versican在腫瘤中生物學作用的研究進展53-65
• 參考文獻59-65
• 個人簡歷、在校期間發(fā)表的學術論文及研究成果65-66
• 致謝66

【參考文獻】

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1 David P. LA PIERRE,Albert J. YEE,Burton B. YANG;The interaction of versican with its binding partners[J];Cell Research;2005年07期

  本文關鍵詞：Versican在舌鱗癌中的表達及其對舌鱗癌細胞Tca-8113生物學行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：482107