本文關(guān)鍵詞：負(fù)載姜黃素的納米膠束對(duì)宮頸癌的抑制作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:制備負(fù)載姜黃素的單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸納米膠束(m PEG-PLA/CUR)。通過觀察m PEG-PLA/CUR納米膠束的載藥量、包封率、粒徑及體外藥物釋放情況來了解其理化性質(zhì);進(jìn)一步考察m P EG-PLA/CUR體外對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖抑制作用、細(xì)胞攝取及體內(nèi)抗腫瘤作用,并初步探討其抗宮頸癌的可能機(jī)制。方法:該研究分兩個(gè)階段完成。第一階段(體外階段):采用固體分散法制備出三組不同姜黃素濃度的單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸載姜黃素納米膠束(m PEG-PLA/CUR)。采用高效液相色譜儀測定三組不同姜黃素濃度的m P EG-PLA/CUR納米膠束的包封率和載藥量,選定其中具有較高包封率和載藥量的一組濃度為后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用納米藥物。原子力顯微鏡下觀察選定濃度的單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸載姜黃素納米膠束的形貌,激光粒徑分析儀測定m PEG-PLA/CUR納米膠束的粒徑。選用選定濃度的m PEG-PLA/CUR納米膠束進(jìn)行體外藥物釋放實(shí)驗(yàn),通過高效液相色譜儀測定其體外藥物釋放。通過MTT法測定生理鹽水、空白載體m PEG-PLA聚合物、游離姜黃素、m PEG-PLA/CUR納米膠束對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用。通過倒置熒光顯微鏡觀察宮頸癌Hela細(xì)胞對(duì)空白載體m PEG-PLA聚合物、m PEG-PLA/CUR納米膠束、游離姜黃素的攝取。第二階段(體內(nèi)階段):構(gòu)建動(dòng)物模型,首先將36只裸鼠用耳釘編號(hào),皮下接種人宮頸癌細(xì)胞成瘤后的裸鼠隨機(jī)分為4組(各組分別為9只),向每組抽取其中3只用做免疫組化,用剩下的6只裸鼠來觀察生存期,具體分組情況為:(1):生理鹽水組(陰性組);(2):空白載體m PEG-PLA聚合物組(載體組);(3):游離姜黃素組(25mg/Kg)(游離組);(4):m PEG-PLA/CUR納米膠束組(以姜黃素劑量計(jì)算25mg/Kg)(復(fù)合組)。待腫瘤長到約0.1cm3時(shí)通過裸鼠尾靜脈分別注射四組藥物(按照0.005ml/10g),每隔1天注射一次,共注射兩周。每隔2天使用游標(biāo)卡尺測量一次瘤塊的長、短徑,計(jì)算腫瘤體積,繪制腫瘤生長曲線圖;同時(shí)觀察裸鼠的生長狀態(tài)、一般情況及生存期,在給完2周藥后每個(gè)組分別處死3只裸鼠,剝離瘤塊,測量瘤重,繪制瘤重曲線圖,再通過免疫組化法測定其Ki-67、MVD(CD31)、VEGF初步探討m PEG-PLA/CUR納米膠束抗宮頸癌的可能機(jī)制。結(jié)果:1、成功制備出三組不同濃度的m PEG-PLA/CUR納米膠束。2、分別測定三組m PEG-PLA/CUR納米膠束,載藥量分別為3.22±0.51%、7.22±0.42%、8.06±1.5%,包封率分別為80.58±0.13%、90.42±0.05%、80.6±0.15%,證實(shí)m PEG-PLA(92mg)載姜黃素(8mg)納米膠束具有良好的載藥量與包封率。3、m PEG-PLA(92mg)載姜黃素(8mg)納米膠束的平均粒徑為119.6nm,粒徑分散均勻,呈單峰分布。4、游離姜黃素中的姜黃素在12小時(shí)內(nèi)大約66%從透析袋中釋放出來,在24小時(shí)大約80%姜黃素從透析袋中釋放出來;然而m PEG-PLA/CUR納米膠束中的姜黃素在第14天的時(shí)候僅有59%從納米膠束中釋放出來,證實(shí)m PEG-PLA/CUR納米膠束具有良好的緩釋特性。5、通過倒置熒光顯微鏡觀察經(jīng)過空白載體m PEG-PLA處理后的Hela細(xì)胞始終未見綠色熒光,用游離姜黃素處理后的Hela細(xì)胞在2小時(shí)后觀察到微弱綠色熒光、4小時(shí)后觀察到稍強(qiáng)綠色熒光,然而經(jīng)過m PEG-PLA/CUR納米膠束處理后的Hela細(xì)胞在2小時(shí)后觀察到稍強(qiáng)綠色熒光、4小時(shí)后觀察到明亮綠色熒光。證實(shí)m PEG-PLA/CUR納米膠束具有良好的細(xì)胞滲透性特性。6、姜黃素濃度為6.25ug/ml、12.5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的m PEG-PLA/CUR納米膠束可顯著抑制人宮頸癌Hela細(xì)胞的生長,抑制作用具有濃度依耐性。與游離姜黃素相同濃度的m PEG-PLA/CUR納米膠束對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞抑制作用強(qiáng)于游離姜黃素(P0.05)。m PEG-PLA聚合物是一種理想、安全、毒性較低的納米載體。7、測定四組裸鼠瘤塊增長情況后得出復(fù)合組(1.21±1.16cm3)、陰性組(2.82±1.34cm3)、載體組(2.35±1.31cm3)、游離組(1.67±1.16cm3),復(fù)合組與其他三組相比明顯抑制了宮頸癌細(xì)胞的生長(P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而載體組則沒有明顯顯示出抗腫瘤作用。四組裸鼠的中位生存時(shí)間分別為復(fù)合組160天、游離組135天、載體組115天、陰性組87天,復(fù)合組與剩下三組相比中位生存期明顯延長且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。8、測定四組免疫組化的瘤塊重量分別是復(fù)合組瘤重為(0.08±0.14g)、游離組為(0.10±0.03g)、載體組為(0.39±0.17g)、陰性組為(0.37±0.14g),復(fù)合組和游離組與載體組、陰性組相比瘤塊重量明顯減輕(P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。復(fù)合組中觀察到Ki-67陽性細(xì)胞比例為(53.33±8.82%),其陽性細(xì)胞比例明顯比游離組(80±5%,P0.01)、載體組(90±5%,P0.01)、陰性組(93.33±2.89%,P0.01)低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VEGF陽性細(xì)胞比例在復(fù)合組中(25±13.23%)和游離組中(28.33±12.58%),與載體組(56.67±15.28%)、陰性組(65±18.03%)相比,復(fù)合組和游離組均較低(P0.05),顯示出明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與陰性組(3±1個(gè),P0.01)、載體組(2.67±0.58個(gè),P0.01)相比,復(fù)合組(MPEG-PLA/CUR納米膠束組)腫瘤塊中微血管條數(shù)(0.67±0.58個(gè))明顯更少,并且具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的,但是復(fù)合組與游離組相比CD31個(gè)數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1、采用固體分散法成功制備出三組不同濃度的m PEG-PLA載姜黃素納米膠束,隨著游離姜黃素濃度的增加,載藥量也在隨著增加,但其包封率未見明顯增加。其中8%濃度組的m PEG-PLA(92mg)載姜黃素(8mg)納米膠束具有良好的載藥量與包封率,粒徑分散均勻,呈單峰分布,具有良好緩釋特性;2、同時(shí)m PEG-PLA/CUR的細(xì)胞毒性具有明顯濃度依賴性;3、m PEG-PLA聚合物可明顯提高姜黃素的生物利用度,是一種安全理想、毒性較低的藥物載體;4、與陰性組、載體組、游離組相比,復(fù)合組具有明顯抑制腫瘤生長及延長了裸鼠的中位生存期的作用;其m PEG-PLA/CUR納米膠束抗腫瘤作用的優(yōu)勢在于m PEG-PLA載藥體系提高了姜黃素的水溶性和緩釋性。
【關(guān)鍵詞】：姜黃素 納米膠束 宮頸癌
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-32
• 結(jié)果32-48
• 討論48-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 英漢縮略詞對(duì)照表58-59
• 致謝59-60
• 姜黃素對(duì)宮頸癌放射增敏研究進(jìn)展(綜述)60-70
• 參考文獻(xiàn)67-70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 沈方方;李銀萍;;CYP 2J2和MMP-9在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

2 王菁鵬;林青;;姜黃素對(duì)子宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖抑制作用及其機(jī)制的研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2006年08期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 余俚瑤;姜黃素抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：負(fù)載姜黃素的納米膠束對(duì)宮頸癌的抑制作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：478873