本文關(guān)鍵詞：活體成像技術(shù)監(jiān)測肝癌Endgolin靶向放射性免疫治療的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范圍內(nèi)威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一,在我國的肝癌死亡率高居惡性腫瘤死亡率的第二位。目前肝癌的診斷及治療水平有了很大的提高,但肝癌患者的長期預(yù)后仍不理想,主要與肝癌手術(shù)后極易復(fù)發(fā)及發(fā)生轉(zhuǎn)移有很大的關(guān)系。肝癌是典型的富血管腫瘤,腫瘤血管的發(fā)生在肝癌的進(jìn)展過程中起到非常重要的作用,因此以抗血管新生為靶點(diǎn)的放射免疫聯(lián)合治療是目前治療肝癌的研究熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤血管形成是一個(gè)極其復(fù)雜的過程,受多種因子的共同調(diào)節(jié),其中Endoglin(ENG)在新生血管的形成中起著重要的作用,研究證實(shí)ENG與常用的腫瘤標(biāo)志物(CD34和CD31)相比,能更特異、敏感的代表腫瘤血管的生成及或腫瘤轉(zhuǎn)移。目前已有研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌組織中ENG的mRNA表達(dá)量明顯高于正常肝組織,ENG可以用于肝癌的微血管標(biāo)記,而ENG是否可以用做肝癌細(xì)胞治療靶點(diǎn)的研究尚未見報(bào)道。本研究選用綠色熒光蛋白標(biāo)記的肝癌細(xì)胞SMMC7721-GFP構(gòu)建肝癌的裸鼠動(dòng)物模型,在活體水平無創(chuàng)性地監(jiān)測肝癌模型中腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移,并對131I-anti-ENG mAb聯(lián)合5-FU治療肝癌的療效進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測和評估,旨在為肝癌ENG靶向的放射免疫聯(lián)合治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法1.取對數(shù)生長期的人源肝癌SMMC7721-GFP細(xì)胞皮下接種,建立HCC裸鼠肝癌模型。2.采用熒光活體成像技術(shù)動(dòng)態(tài)觀察不同濃度細(xì)胞及腫瘤生長,統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)目及腫瘤體積與熒光光子數(shù)之間是否具有相關(guān)性。WB法檢測腫瘤細(xì)胞系、腫瘤組織及正常肝組織內(nèi)ENG的表達(dá)。4.細(xì)胞增殖毒性實(shí)驗(yàn)(CCK-8)檢測不同anti-ENG mAb濃度對腫瘤細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的增殖的影響。5.采用放射性碘化標(biāo)記Iodogen法制備131I-anti-ENG mAb,經(jīng)Sephadex G-25柱分離純化,檢測放化純,體外穩(wěn)定性及體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)分布。6.HCC裸鼠肝癌模型尾靜脈注射131I-anti-ENG mAb后的不同時(shí)間點(diǎn)(1,12,24,48,72h)進(jìn)行放射自顯影顯像。7.血管管型形成實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度的131I-anti-ENG mAb對內(nèi)皮細(xì)胞血管形成能力的作用。8. HCC裸鼠肝癌模型隨機(jī)分為131I-anti-ENG mAb組、PBS對照組、5-FU組及131I-anti-ENG mAb聯(lián)合5-FU組,一周一次瘤內(nèi)注射。治療4周后處死小鼠測量腫瘤體積、重量并計(jì)算抑瘤率。免疫組化分析不同組治療后ENG蛋白表達(dá)量的改變。研究結(jié)果1.成功制備肝癌SMMC7721-GFP小鼠模型,活體成像技術(shù)動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞數(shù)目與熒光光子數(shù)之間具有良好的相關(guān)性(r2=0.9247,P0.01),同時(shí)裸鼠腫瘤體積與熒光光子數(shù)之間也具有很好的相關(guān)性(r2=0.925,P0.01)。2.RT-PCR和WB實(shí)驗(yàn)表明SMMC7721-GFP細(xì)胞及肝癌組織中ENG表達(dá)明顯升高,與對照組相比具有顯著差異(P0.01)。3.CCK-8實(shí)驗(yàn)表明不同濃度anti-ENG mAb對SMMC7721-GFP及HUVECs的抑制作用均具有時(shí)間及濃度依賴性。anti-ENG mAb (20ug/ml)對SMMC7721-GFP及HUVECs細(xì)胞的增殖抑制率分別達(dá)到39.9+0.96%,45.2±1.26%。4.成功制備131I-anti-ENG mAb標(biāo)記率為97.4%,放化純?yōu)?2.8%,比活度為69.7±6.26MBq/umol具有良好的體外穩(wěn)定性；藥代動(dòng)力學(xué)表明131I-anti-ENG mAb的體內(nèi)代謝符合二室模型,其分布半衰期為7.1h,消除半衰期為144.5h,平均滯留時(shí)間為10h。5.磷屏放射自顯影圖像顯示,注射131I-anti-ENG mAb后24h可獲得清晰放射自顯影圖像,荷瘤鼠的移植瘤部位放射性明顯濃聚(T/NT=6.44±1.01)。6.血管管型實(shí)驗(yàn)表明與對照組相比,’31I-anti-ENG mAb(20ug/ml)處理的HUVECs在不同時(shí)間的管型形成數(shù)目與同時(shí)間點(diǎn)的對照組相比顯著減少(P0.01)。7.HCC裸鼠肝癌模型治療組中,與PBS組相比,131I-anti-ENG mAb組、5-FU組和131I-anti-ENG mAb聯(lián)合5-FU治療組熒光光子數(shù)目有不同程度的減少,其中聯(lián)合治療組熒光光子數(shù)最低；’31I-anti-ENG mAb聯(lián)合5-FU治療組與單獨(dú)用131I-anti-ENG mAb、5-FU相比有顯著差異(P0.05)8.HCC裸鼠肝癌模型治療4周后131I-anti-ENG mAb治療組與對照組間比較腫瘤重量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義131I-anti-ENG mAb治療組腫瘤體積為96±15mm3,重量為0.4±0.19g,抑瘤率61.95±0.27%; 131I-anti-ENG mAb聯(lián)合5-FU組抑瘤率高達(dá)76±0.62%。9.免疫組化定量結(jié)果顯示與PBS組相比,131I-anti-ENG mAb組,5-FU組及131I-anti-ENGmAb聯(lián)合5-FU治療組ENG表達(dá)量明顯減少,但是131I-anti-ENG mAb聯(lián)合5-FU治療組ENG蛋白的表達(dá)量最低。研究結(jié)論本研究表明放射性碘化標(biāo)記的131I-anti-ENG mAb制備簡單、穩(wěn)定性好,能夠顯著抑制肝癌細(xì)胞的增殖、明顯減少血管管型的形成；HCC裸鼠肝癌模型瘤內(nèi)注射131I-anti-ENG mAb能抑制荷肝癌裸鼠移植瘤的生長,131I-anti-ENG mAb聯(lián)合5-FU治療組移植瘤抑制率明顯提高；活體成像技術(shù)可以動(dòng)態(tài)觀察腫瘤生長及監(jiān)測腫瘤治療效果,對腫瘤研究具有重要意義。為臨床ENG靶向的肝癌放射免疫聯(lián)合治療奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：Endoglin 肝癌 抗血管生成治療 放射免疫治療 活體成像技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-15
• 第一部分 ~(131)I標(biāo)記的抗Endgolin單克隆抗體的制備及其體外抗腫瘤作用的研究15-35
• 前言15-17
• 材料與方法17-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 討論33-34
• 結(jié)論34-35
• 第二部分 活體成像技術(shù)監(jiān)測瘤內(nèi)注射~(131)I-anti-Endgolin mAb聯(lián)合5-FU對肝癌療效的研究35-50
• 前言35-37
• 材料與方法37-42
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-46
• 討論46-49
• 結(jié)論49-50
• 附表50-52
• 附圖52-63
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 致謝69-70
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文70-71
• 英文論文71-82
• 附件82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 楊坤禹;胡豫;;抗腫瘤血管新生聯(lián)合放射治療研究進(jìn)展[J];國際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

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  本文關(guān)鍵詞：活體成像技術(shù)監(jiān)測肝癌Endgolin靶向放射性免疫治療的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：471350