本文關(guān)鍵詞：源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣信號調(diào)節(jié)順鉑誘導(dǎo)的人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 順鉑是臨床上傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物，也是婦科腫瘤最常用的化療藥物之一。然而，順鉑在治療期間的副作用及其治療抵抗限制了它在臨床的應(yīng)用，因此明確順鉑的細(xì)胞殺傷機制尤為重要。傳統(tǒng)意義上認(rèn)為，順鉑是通過損傷DNA和抑制DNA合成起到殺傷癌細(xì)胞的作用，這種作用引起了線粒體依賴的凋亡信號以及caspase相關(guān)的級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在以往的關(guān)于疾病和腫瘤的研究認(rèn)為，化療藥物可以引起細(xì)胞內(nèi)的鈣動員，通過靶向線粒體ROS代謝、ATP生成等過程，引發(fā)線粒體功能紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞生長抑制和死亡。與此同時，越來越多的證據(jù)顯示，順鉑可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激觸發(fā)相關(guān)的凋亡信號，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。然而，作為與鈣離子關(guān)系最為密切的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，鈣信號在化療藥物引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)來源的凋亡通路中的作用尚不清楚。 目的： 明確順鉑對人宮頸癌HeLa細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響，探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)來源的鈣信號在順鉑誘導(dǎo)的人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的作用，深入探討順鉑可能的細(xì)胞殺傷機制。 方法： 1、用不同濃度的順鉑（2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL）處理HeLa細(xì)胞，分別作用0h、6h、12h和24h后，用熒光鈣離子指示劑Fluo-4/AM和Rhod-2/AM孵育細(xì)胞，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡分別檢測細(xì)胞質(zhì)和線粒體內(nèi)鈣離子濃度的變化； 2、順鉑（5μg/mL）聯(lián)合應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM（2.5μM）或IP3R抑制劑2-APB（100μM）處理HeLa細(xì)胞12h和24h小時后，用熒光鈣離子指示劑Fluo-4/AM和Rhod-2/AM孵育細(xì)胞，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡分別檢測細(xì)胞質(zhì)和線粒體內(nèi)鈣離子濃度的變化； 3、順鉑單獨處理以及順鉑（5μg/mL）聯(lián)合應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM （2.5μM）或IP3R抑制劑2-APB（100μM）處理HeLa細(xì)胞24h后，應(yīng)用MTT試驗檢測細(xì)胞活性； 4、順鉑單獨處理以及順鉑（5μg/mL）聯(lián)合應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM （2.5μM）或IP3R抑制劑2-APB（100μM）處理HeLa細(xì)胞24h后，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡； 5、順鉑單獨處理以及順鉑（5μg/mL）聯(lián)合應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM （2.5μM）或IP3R抑制劑2-APB（100μM）處理HeLa細(xì)胞24h，應(yīng)用熒光染料Hoechst33342著色細(xì)胞核，，在激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察不同藥物處理組細(xì)胞核的變化； 6、順鉑單獨處理以及順鉑（5μg/mL）聯(lián)合應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM （2.5μM）或IP3R抑制劑2-APB（100μM）處理HeLa細(xì)胞12h后，應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測線粒體介導(dǎo)凋亡蛋白與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)； 7、順鉑單獨處理以及順鉑（5μg/mL）聯(lián)合應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM （2.5μM）或IP3R抑制劑2-APB（100μM）處理HeLa細(xì)胞12h后，應(yīng)用免疫熒光實驗檢測裂解的caspase-3、GRP78與CHOP在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)果： 1、順鉑同時增加了HeLa細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和線粒體內(nèi)的游離鈣離子濃度，且具有時間依賴性和劑量依賴性，聯(lián)合應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM或IP3R抑制劑2-APB后，HeLa細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)與線粒體內(nèi)的游離鈣離子濃度顯著降低； 2、順鉑抑制了HeLa細(xì)胞細(xì)胞活性并誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡，聯(lián)合應(yīng)用應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM或IP3R抑制劑2-APB減低了順鉑對HeLa細(xì)胞的毒性效應(yīng)； 3、順鉑上調(diào)了鈣依賴性鈣調(diào)水解酶CAPN1與裂解的caspase-3的表達(dá)，聯(lián)合應(yīng)用應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM或IP3R抑制劑2-APB降低了順鉑誘導(dǎo)的CAPN1與裂解的caspase-3表達(dá)水平； 4、順鉑上調(diào)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、CHOP與裂解的caspase-4的表達(dá)，聯(lián)合應(yīng)用應(yīng)用鈣離子螯合劑BAPTA/AM或IP3R抑制劑2-APB降低了順鉑誘導(dǎo)的GRP78、CHOP與裂解的caspase-4表達(dá)水平； 結(jié)論： 順鉑誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣平衡紊亂，大量鈣離子外流，外流的鈣信號參與調(diào)控了順鉑誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：鈣 順鉑 凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 宮頸癌
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-8
• abstract8-14
• 第1章 文獻綜述14-22
• 1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）14-16
• 1.2 UPR 跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)16-17
• 1.3 UPR 與凋亡間的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)17-19
• 1.3.1 內(nèi)源性途徑18-19
• 1.3.2 外源性途徑19
• 1.4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣調(diào)控與細(xì)胞死亡機制19-22
• 第2章 材料與方法22-29
• 2.1 實驗材料22-24
• 2.1.1 主要儀器22-23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.2 實驗方法24-28
• 2.2.1 人宮頸癌 Hela 細(xì)胞的培養(yǎng)24-25
• 2.2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇24
• 2.2.1.2 細(xì)胞傳代24
• 2.2.1.3 細(xì)胞凍存24-25
• 2.2.2 細(xì)胞活性檢測（MTT 比色法）25
• 2.2.3 Western blotting 蛋白免疫印跡實驗25-26
• 2.2.4 免疫熒光實驗26-27
• 2.2.4.1 細(xì)胞質(zhì)和線粒體內(nèi)游離鈣離子水平檢測26-27
• 2.2.4.2 觀測細(xì)胞核（凋亡）27
• 2.2.4.3 細(xì)胞內(nèi)蛋白水平（定性）檢測27
• 2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)27-28
• 2.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理28
• 2.3 實驗流程28-29
• 第3章 實驗結(jié)果29-41
• 3.1 順鉑對 HeLa 細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平的影響29-31
• 3.1.1 順鉑引起 HeLa 細(xì)胞生長抑制29
• 3.1.2 順鉑增加細(xì)胞質(zhì)中游離的鈣離子水平29-30
• 3.1.3 順鉑增加線粒體中游離的鈣離子水平30-31
• 3.2 鈣信號參與調(diào)控順鉑誘導(dǎo)的 HeLa 細(xì)胞凋亡31-37
• 3.2.1 阻斷鈣信號后細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子變化31-32
• 3.2.2 阻斷鈣信號后線粒體內(nèi)鈣離子變化32-33
• 3.2.3 阻斷鈣信號可以抑制順鉑引起的 HeLa 細(xì)胞凋亡33-37
• 3.3 順鉑誘導(dǎo)的促凋亡鈣信號來源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激37-41
• 第4章 討論41-44
• 第5章 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-58
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果58-59
• 致謝59-60

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓鈺;楊建林;張軍;夏燕;王艷林;;精胺氧化酶高表達(dá)對人宮頸癌Hela細(xì)胞生長和藥物敏感性的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2013年09期

2 韓璐;賀珊;;雷帕霉素抑制人宮頸癌裸鼠移植瘤生長的作用及其機制[J];腫瘤防治研究;2013年11期

3 時偉紅,王太一,張學(xué);p~(15)基因真核表達(dá)重組體及人宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染的研究[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2002年01期

4 夏劍波;張振華;田擁軍;孟忠吉;喻植群;趙西平;楊東亮;;肝癌新標(biāo)志物人宮頸癌基因的克隆、原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J];中華肝臟病雜志;2006年02期

5 徐立新;葉云飛;馬戎;王海琳;;裸小鼠人宮頸癌組織模型的建立及其生物學(xué)特性初探[J];腫瘤防治研究;2010年09期

6 薛玉珍;陳忠東;;黃荊子乙酸乙酯提取物誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡[J];腫瘤學(xué)雜志;2010年11期

7 邢安輝;桂國平;趙洪禮;徐英俐;賁松彬;;腫瘤特異性凋亡基因誘導(dǎo)人宮頸癌細(xì)胞凋亡作用[J];中國公共衛(wèi)生;2011年01期

8 吳麗英;;青年宮頸癌與中老年人宮頸癌的臨床特點對比[J];中國醫(yī)藥指南;2011年26期

9 房姝妍;張青;張瑞萍;侯杰;張錦陽;高志安;;內(nèi)源性NO在人宮頸癌Hela細(xì)胞株合成對順鉑敏感性的影響[J];中外醫(yī)療;2012年27期

10 朱文赫;張巍;李妍;徐俊杰;姜艷霞;羅軍;蘆曉晶;呂士杰;;微波輻射對人宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖抑制作用及其機制[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黎欣;徐碧泉;曹蘭琴;;青年人宮頸癌的特點[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

2 劉雨聲;牛巨偉;張衛(wèi)華;孔為民;鄧小虹;;聯(lián)合放療熱療對人宮頸癌HeLa細(xì)胞作用的實驗室研究[A];第三次全國婦產(chǎn)科基層醫(yī)師學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2005年

3 熊艷;胡玉玲;魏晚霞;;老年人宮頸癌放療的護理體會[A];全國第13屆老年護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議、全國中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2010年

4 李小婷;傅士龍;申欣;江阿沛;周冬虎;孟徐連;韓素萍;馮晴;;人宮頸癌HeLa細(xì)胞中維甲酸作用于DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα的機制[A];第七屆全國醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會暨醫(yī)學(xué)生化分會會員代表大會論文集[C];2011年

5 朱克修;李旭;陳葳;程小麗;;人宮頸癌細(xì)胞凋亡的研究[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第六次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

6 蘇寶山;楊軍;李牧;田瑋;李宗芳;;苦參堿對人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡機制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 關(guān)燕清;屈曉丹;;人宮頸癌細(xì)胞凋亡的線粒體膜電位及細(xì)胞周期的研究[A];提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國家——2006中國科協(xié)年會論文集[C];2006年

8 笪宇蓉;姚智;鄧為民;洪敬欣;何津巖;楊潔;;YD383,YD438對人宮頸癌細(xì)胞體外增殖及細(xì)胞周期的影響[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

9 張蓓;劉嘉茵;韓素萍;候振;周靜;;Genistein對人宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖及凋亡的影響及其作為放療增敏劑的初步探討[A];江蘇省抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第四次腫瘤學(xué)術(shù)研討會暨無錫市婦產(chǎn)科年會論文匯編[C];2005年

10 張賀玲;王惠蘭;袁芳;楊素娟;;大蒜素油單獨及與順鉑聯(lián)合對人宮頸癌Hela細(xì)胞生長影響的研究[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第七次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 陳秀瑋;白樺脂酸誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡及機制的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 周菊梅;不同溫度熱療對人宮頸癌細(xì)胞凋亡和增殖的影響[D];中南大學(xué);2009年

3 孔為民;Ad-p53及聯(lián)合化、放療對人宮頸癌HeLa細(xì)胞作用的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

4 李新國;NS-398作用人宮頸癌的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中南大學(xué);2006年

5 干曉琴;腹腔鏡CO_2氣腹對人宮頸癌CaSki細(xì)胞體外生長的影響及其機制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

6 成海恩;RNAi沉默人宮頸癌CaSki細(xì)胞HPV-16 E6基因表達(dá)的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

7 韓曉兵;熱休克蛋白和p53在BK通道介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡與增殖抑制中的作用[D];華中科技大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周晨;5-烯丙基-7-二氟甲氧基白楊素對人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的影響[D];南華大學(xué);2010年

2 曾源;8-硝基白楊素誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人宮頸癌Hela細(xì)胞生長抑制和凋亡作用研究[D];南華大學(xué);2007年

3 謝晶;紫花牡荊素抑制體外培養(yǎng)人宮頸癌HeLa細(xì)胞生長增殖的研究[D];南華大學(xué);2010年

4 張敏;皮秒脈沖電場對人宮頸癌HeLa細(xì)胞的生物學(xué)作用及劑量與效應(yīng)關(guān)系研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

5 楊麗肖;雷帕霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤生長的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

6 李婷;5-烯丙基-7-二氟甲氧基白楊素對體外培養(yǎng)人宮頸癌HeLa細(xì)胞生長的影響[D];南華大學(xué);2010年

7 張晶;異甘草素對人宮頸癌細(xì)胞增殖的抑制作用[D];武漢大學(xué);2005年

8 付麗華;白藜蘆醇對人宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡、增殖及侵襲的研究[D];佳木斯大學(xué);2007年

9 祝建芳;聚焦超聲治療人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

10 賀珊;雷帕霉素對人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤生長的抑制作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣信號調(diào)節(jié)順鉑誘導(dǎo)的人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：471109