發(fā)布時(shí)間：2017-06-22 06:12

  本文關(guān)鍵詞：地西他濱與硼替佐米聯(lián)合治療急性T淋巴細(xì)胞白血病的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：白血病是血液系統(tǒng)的一種惡性疾病,病情險(xiǎn)惡,嚴(yán)重威脅人類的健康。白血病細(xì)胞由于自我更新能力增強(qiáng),增殖失控,分化障礙,凋亡受阻,侵襲并破壞人類各臟器系統(tǒng)。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,目前對(duì)白血病的認(rèn)識(shí)已更加深入、系統(tǒng)和全面,但仍存在許多亟待解決的問題,如：白血病起病的原因、發(fā)病機(jī)制、如何預(yù)防及徹底根治等�；熀驮煅杉�(xì)胞移植仍是目前白血病治療的主要方法,隨著多項(xiàng)新技術(shù)的開展,白血病的療效得到了提升。如生物靶向治療：抗CD20、 CD33、CD52的單克隆抗體,針對(duì)BCR/ABL、PML-RARa融合基因靶向藥物的應(yīng)用,凋亡調(diào)節(jié)因子的靶向治療(針對(duì)bel-2)等,使白血病患者明顯受益。盡管如此,但成人急性T淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)的治療目前仍缺乏有效的治療手段,且預(yù)后差。我們實(shí)驗(yàn)室前期工作已證實(shí)硼替佐米可抑制急性T淋巴細(xì)胞白血病的腫瘤性增生,但移植后的致瘤小鼠最終仍死于白血病,考慮存在其它的致瘤機(jī)制,值得進(jìn)一步探討。尋找治療急性T淋巴細(xì)胞白血病的新的作用靶點(diǎn),具有重大意義。方法：CCK-8法檢測(cè)去甲基化藥物地西他濱或聯(lián)合硼替佐米對(duì)Notch1高表達(dá)的急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株MOLT-4的增殖的影響Annexin-V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡；PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期；二代測(cè)序／轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序法篩選用藥前后兩組間差異基因；RT-PCR法檢測(cè)Pax5. NF-κB(p65)及Notch1下游靶基因Hes1 mRNA的表達(dá)情況；構(gòu)建攜帶Pax5過表達(dá)基因載體的慢病毒：侵染MOLT-4細(xì)胞；CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況；RT-PCR法檢測(cè)目的基因Pax5 mRNA的表達(dá),蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)Notchl通路下游蛋白如Hes1及凋亡蛋白如Caspase3和Caspase9的表達(dá)量。結(jié)果：不同濃度的地西他濱作用于MOLT-4細(xì)胞4天,隨著時(shí)間延長和劑量的加大,地西他濱對(duì)MOLT-4細(xì)胞株的增殖抑制作用越明顯。Annexin-V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡增多,PI染色檢測(cè)檢測(cè)G0/G1期細(xì)胞比例增多,細(xì)胞被阻滯在G0/G1期。且地西他濱與硼替佐米兩藥共同作用MOLT-4細(xì)胞比單用一種藥物的抑制效果更明顯。地西他濱對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖的作用結(jié)果顯示0.5nmol/L地西他濱作用72小時(shí)后,MOLT-4細(xì)胞的增殖活力為對(duì)照組的30.2±2.2%(P0.01)。以此細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,與未加藥處理的MOLT-4細(xì)胞對(duì)照,篩選兩組間差異表達(dá)基因。篩選結(jié)果顯示Pax5Sfrp2、Sulfl基因的表達(dá)量較用藥前升高,進(jìn)一步PT-PCR驗(yàn)證Pax5mRNA表達(dá)量較用藥前升高更明顯。構(gòu)建攜帶Pax5高表達(dá)載體的慢病毒導(dǎo)入MOLT-4細(xì)胞,細(xì)胞的增殖變緩,增殖活力下降。蛋白免疫印跡法(Western blot)結(jié)果顯示Notch1通路下游蛋白Hes1的表達(dá)量減少,凋亡蛋白Caspase3和Caspase9表達(dá)量增加。結(jié)論：地西他濱聯(lián)合硼替佐米較單藥能更有效抑制MOLT-4細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期于GO/G1期。其可能機(jī)制是促進(jìn)了Pax5的高表達(dá),抑制T細(xì)胞特異性的Notch1信號(hào)通路,從而抑制腫瘤生長。
【關(guān)鍵詞】：地西他濱 硼替佐米 MOLT-4細(xì)胞 急性T淋巴細(xì)胞白血病 Pax5 Notch1
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 中英文縮略詞匯表9-10
• 前言10-14
• 參考文獻(xiàn)11-14
• 第一部分14-32
• 材料與方法15-22
• 結(jié)果22-27
• 討論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 第二部分32-47
• 材料與方法33-37
• 結(jié)果37-43
• 討論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 第三部分47-65
• 材料與方法47-57
• 結(jié)果57-62
• 討論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-65
• 結(jié)論65-66
• 綜述66-73
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 在讀期間發(fā)表論文73-74
• 致謝74

【共引文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐艷玲;Pax5基因在急性淋巴細(xì)胞白血病中突變、缺失的相關(guān)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：地西他濱與硼替佐米聯(lián)合治療急性T淋巴細(xì)胞白血病的機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：470927