本文關(guān)鍵詞：Rab3D在食管鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景食管癌是我國常見惡性腫瘤之一,病理類型約90%為鱗癌。據(jù)Chen W[1]等人統(tǒng)計表明,肺癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、食管癌是5種常見的消化道腫瘤,其中肺癌、肝癌、胃癌和食道癌是我國癌癥死亡的主要原因。近幾年來隨著手術(shù)、放化療技術(shù)的不斷提高,但是食管癌發(fā)病率及死亡率仍然很高。尤其食管鱗癌仍缺乏臨床確切的治療靶點。Rab3D為RAS癌基因家族成員之一,為鳥苷酸磷酸酶(guanosine triphosphate,GTP)結(jié)合蛋白,在人體組織中廣泛表達,尤其在癌細胞系和原發(fā)腫瘤中表達明顯較高。但針對Rab3D對食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展的具體研究尚未見報道過。目的本研究通過免疫組織化學技術(shù)分析20例食管鱗癌組織、癌旁組織、正常食管粘膜組織及64例食管鱗癌組織中Rab3D蛋白的表達差異及臨床病理學意義。構(gòu)建pc DNA3-Rab3D重組質(zhì)粒與Rab3D-si RNA干擾序列,轉(zhuǎn)染至食管鱗癌細胞中,上調(diào)或下調(diào)食管鱗癌細胞中Rab3D蛋白的表達,通過MTT與Western Blot實驗檢測Rab3D蛋白表達的變化對食管鱗癌細胞增殖能力的影響及對細胞中Cyclin D1表達的影響。從而探討Rab3D在食管鱗癌組織中的意義及對食管鱗癌細胞增殖的影響及可能機制。以期為食管鱗癌的靶向治療及病情評估提供新的方法與思路。方法1.Rab3D在食管鱗癌細胞癌中的表達及其臨床病理學意義選取20例食管鱗癌組織、癌旁組織、正常食管粘膜組織及含有44例食管鱗癌標本的組織芯片,運用免疫組織化學技術(shù)檢測Rab3D蛋白在20例食管鱗癌組織中的表達差異及44例食管鱗癌組織中的臨床病理學意義。2.MTT實驗檢測Rab3D對食管鱗癌細胞增殖的影響構(gòu)建真核表達重組質(zhì)粒pc DNA3-Rab3D及Rab3D-si RNA,經(jīng)脂質(zhì)體介導將pc DNA3-Rab3D重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至Rab3D蛋白表達較低的食管鱗癌細胞中,通過MTT、Western Blot等方法探討Rab3D蛋白的過表達對食管鱗癌細胞增殖的影響;將Rab3D-si RNA轉(zhuǎn)染至Rab3D蛋白表達較高的食管鱗癌細胞中,通過MTT、Western Blott等方法觀察降低Rab3D蛋白的表達對食管鱗癌細胞增殖的影響。3.Western blot實驗檢測Rab3D蛋白表達變化對細胞中Cyclin D1蛋白表達的影響將真核表達重組質(zhì)粒pc DNA3-Rab3D及Rab3D-si RNA(Rab3D小干擾RNA)轉(zhuǎn)染入Rab3D蛋白表達較低的兩株細胞株及Rab3D蛋白表達較高的兩株細胞株中,通過Western Blot實驗探討Rab3D蛋白表達的改變對食管鱗癌細胞中Cyclin D1蛋白表達的影響,從而探討Rab3D對食管鱗癌細胞增殖的可能機制。結(jié)果1.Rab3D在食管鱗癌細胞癌中的表達及其臨床病理學意義20例正常食管粘膜組織Rab3D蛋白高表達率為10%(2/20),癌旁組織中Rab3D蛋白高表達率為30%(6/20),食管鱗癌組織中Rab3D蛋白高表達率為90%(18/20)。三組兩兩對比,差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)。64例食管鱗癌組織中Rab3D蛋白的表達分析:TNM分期中早期(Ⅰ+Ⅱ期)食管鱗癌組織中Rab3D高表達率為38.70%(12/31),晚期(Ⅲ+Ⅳ期)食管鱗癌組織中Rab3D高表達率為66.67%(22/33),兩者相比有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管鱗癌組織Rab3D高表達率為37.93%(11/29),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管鱗癌組織Rab3D高表達率65.71%(23/35),兩者相比有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.MTT實驗檢測Rab3D對食管鱗癌細胞增殖的影響MTT結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染Rab3D質(zhì)粒的食管鱗癌細胞株增殖率明顯高于轉(zhuǎn)染空載體的對照組細胞的增值率;轉(zhuǎn)染Rab3D-si RNA的食管鱗癌細胞株增殖率明顯低于轉(zhuǎn)染陰性對照的陰性對照組細胞的增值率,兩者相比有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.Western Blot實驗檢測Rab3D蛋白表達的變化對細胞中Cyclin D1蛋白表達的影響Western Blot結(jié)果顯示,KYSE410、KYSE450細胞轉(zhuǎn)染Rab3D組Cyclin D1蛋白較本細胞株對照組增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);EC109、EC9706細胞轉(zhuǎn)染si RNA組的Cyclin D1蛋白較本細胞株陰性對照組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論Rab3D的表達與食管鱗癌癌分化程度及食管鱗癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。Rab3D的表達對食管鱗癌細胞的增殖能力具有促進作用。其機制可能與促進Cyclin D1的表達有關(guān)。因此,我們認為Rab3D可能成為預測食管鱗癌進展程度的指標,可能成為食管鱗癌臨床治療的靶點。
【關(guān)鍵詞】：食管鱗癌 Rab3D 增殖 免疫組織化學
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 1 材料與方法14-28
• 2 結(jié)果28-37
• 3 討論37-41
• 4 結(jié)論41
• 參考文獻41-44
• 綜述 Rab蛋白與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系44-57
• 參考文獻51-57
• 附錄57-58
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況58-59
• 致謝59-61
• 個人簡歷61

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本文編號：470427