本文關鍵詞：ASPP2及其異構體ΔASPP2對結腸癌細胞自噬及凋亡影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的結腸癌為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,超過半數以上的結腸癌患者具有P53基因突變或缺失。P53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of P53,ASPP2)在P53基因選擇性誘導細胞凋亡中起著重要作用,ASPP2能夠通過P53依賴途徑促進細胞凋亡,從而抑制腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。ΔASPP2是通過5’RACE技術發(fā)現的一種新的、被截短的、含有880個氨基酸的ASPP2異構體。初步研究顯示ΔASPP2不僅能抑制細胞凋亡,也能促進細胞自噬,同時在臨床結腸癌標本中也發(fā)現ΔASPP2表達顯著增高。本課題旨在探討ASPP2及其異構體ΔASPP2對奧沙利鉑誘導的結腸癌HCT116 P53-/-(P53缺失型)細胞凋亡和自噬的影響,并深入探討ΔASPP2對ASPP2與P53引起的細胞自噬及凋亡的影響及其相關機制。方法結腸癌及癌旁正常組織冰凍切片處理,經包埋及固定后,利用免疫熒光技術檢測結腸癌及癌旁組織中ASPP2與P53的表達情況;提取結腸癌標本及癌旁組織RNA,隨后經逆轉錄為c DNA,并利用ASPP2、ΔASPP2與P53引物進行PCR擴增,使用實時熒光定量PCR技術檢測結腸癌標本及癌旁組織中ASPP2 m RNA、ΔASPP2 m RNA與P53 m RNA表達水平;使用ASPP2、ΔASPP2及P53質粒轉染HCT116-/-細胞,同時轉染綠色熒光GFP-LC3質粒至各組細胞中,利用化療藥物奧沙利鉑(L-OHP)處理后利用熒光顯微鏡觀察細胞自噬水平;利用M30、Calcein AM/PI染色與流式細胞術檢測各組細胞的凋亡水平;利用MTT法檢測不同處理組細胞相對存活率;使用r Ad-ASPP2、r Ad-ΔASPP2與r Ad-53感染HCT116-/-細胞,經L-OHP處理后,利用平板細胞克隆形成試驗檢測各組細胞增殖能力;利用免疫共沉淀技術檢測ΔASPP2對ASPP2與P53結合能力的影響;利用免疫印記檢測各組細胞自噬及凋亡相關蛋白表達水平。結果1.相對于癌旁正常組織,ASPP2 m RNA在結腸癌組織中表達顯著降低(腫瘤2.27±1.66 VS癌旁3.63±1.73,P0.05),ΔASPP2 m RNA在腫瘤組織中表達增加(腫瘤0.54±0.26 VS癌旁0.40±0.23,P0.05),P53 m RNA在癌及癌旁組織中的表達沒有明顯差異(腫瘤5.31±1.14,癌旁5.55±1.07,P0.05);2.ΔASPP2能夠拮抗ASPP2與P53的結合,從而抑制其促細胞凋亡功能;3.ΔASPP2能夠增加細胞存活率并提高細胞增殖能力;4.與P53處理組(自噬5.43%±0.21%,凋亡33.67%±0.76%)相比,ΔASPP2+P53處理組自噬水平增加(14.77%±0.25%,P0.05),凋亡水平下降(21.33%±0.94%,P0.05);與ASPP2+P53處理組(自噬3.37%±0.15%,凋亡50.61%±1.25%)相比,ΔASPP2+ASPP2+P53處理組自噬水平增加(12.33%±0.26%,P0.05),凋亡水平下降(35.18%±1.12%,P0.05)。結論1.與癌旁正常組織相比,ASPP2 m RNA在結直腸癌組織中表達降低,ΔASPP2 m RNA在結直腸癌組織中表達增高,P53 m RNA表達在兩者間無明顯差異;2.ΔASPP2能夠抑制ASPP2與P53的結合能力;3.ΔASPP2能夠拮抗ASPP2及P53的抑制細胞自噬功能;4.ΔASPP2能夠拮抗ASPP2及P53的促進細胞凋亡功能;5.ΔASPP2可通過促進細胞自噬抑制細胞凋亡。
【關鍵詞】：P53 P53凋亡刺激蛋白2(ASPP2) ASPP亞型(ΔASPP2) 細胞自噬 細胞凋亡 結腸癌
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 英文縮略詞表11-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-23
• 結果23-32
• 討論32-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-39
• 文獻綜述39-47
• 參考文獻43-47
• 攻讀碩士期間參與發(fā)表文章情況47-48
• 致謝48

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1 譚江平,校宏兵;血管內皮生長因子表達與結腸癌預后的關系[J];中國癌癥雜志;2001年01期

2 吳毅平,Shoshana Yakar,Derek LeRoith;循環(huán)中胰島素樣生長因子-Ⅰ水平調節(jié)結腸癌的生長和轉移研究[J];中華實驗外科雜志;2004年05期

3 張曉輝,胡成乙;β-聯(lián)蛋白在結腸癌中的表達及其臨床意義[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;2005年04期

4 呂盈盈;錢家鳴;顧建剛;蔣衛(wèi)君;;結腸癌血管生成相關因子的表達及其意義的研究[J];臨床消化病雜志;2006年01期

5 左曉明;姚曉虹;祝明潔;虞文偉;;胃結腸癌不同形態(tài)區(qū)域的免疫組化表達[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2006年05期

6 冉宇靚;胡海;趙澤國;孫立新;楊治華;;結腸癌腫瘤自身抗體譜篩選及其應用[J];腫瘤防治研究;2008年05期

7 王曉玲;何劍琴;李俊達;;存活素、血管內皮生長因子-C在結腸癌中的表達及其臨床意義[J];中國實用醫(yī)藥;2008年24期

8 郭恩浦;王瑜;葉航;王曉山;;巨噬細胞游走抑制因子過表達和結腸癌血管發(fā)生的關系[J];河北醫(yī)藥;2008年07期

9 張毅欽;賀華勇;;基質金屬蛋白酶和α-連接蛋白在結腸癌組織中的表達及臨床意義[J];現代醫(yī)院;2009年06期

10 張欣;鄭鵬生;;細胞角蛋白7和19在結腸癌中的表達及意義[J];細胞與分子免疫學雜志;2010年02期

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1 蒯筱漪;于鵬麗;施瑞華;張紅杰;;糖酵解途徑中四種關鍵酶在結腸癌組織中的表達分析[A];第二十二屆全國中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病學術會議暨消化疾病診治進展學習班論文匯編[C];2010年

2 王志剛;嚴志;章必成;饒智國;余麗芳;劉健;高建飛;;基于芯片數據的隨機森林算法鑒定結腸癌生物標記物(英文)[A];第四屆湖北省抗癌協(xié)會青年委員會學術交流會論文集[C];2012年

3 陳昊;白玲;張昶;趙文海;陳乃玲;;促凋亡蛋白FasL在結腸癌組織表達的臨床意義[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

4 梁倩;宿志弘;李繼承;;人結腸癌組織中樹突狀細胞的免疫組織化學研究[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

5 田笑;;結腸癌相關抗原的純化與分析[A];中華醫(yī)學會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2012年

6 史冠男;彭瓊;;低氧誘導對結腸癌發(fā)生上皮間質轉化的關系的研究[A];第二十五屆全國中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病學術會議論文集[C];2013年

7 陳乃玲;陳昊;白玲;張昶;趙文海;;細胞色素C在結腸癌組織中的表達及與細胞線粒體超微結構改變的關系[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

8 盧瑗瑗;王新;劉震雄;陳崢;靳斌;翟惠虹;張發(fā)明;郭學剛;樊代明;;結腸癌特異性新抗原MC3-Ag的分離與鑒定[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

9 王重凱;袁國紅;付衛(wèi);;DACT1在結腸癌中的表達及其作用[A];中華醫(yī)學會腫瘤學分會第七屆全國中青年腫瘤學術會議——中華醫(yī)學會腫瘤學分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

10 李嵐;厲有名;;Agronaute蛋白在結腸癌組織中的表達和臨床意義[A];第二屆浙江省消化病學術大會論文匯編[C];2009年

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1 記者 蔣明;白介素17可抑制結腸癌形成[N];健康報;2012年

2 吳一福;結腸癌中的生存素是凋亡抑制因子[N];中國醫(yī)藥報;2006年

3 記者 毛磊;結腸癌30%與基因變異有關[N];新華每日電訊;2003年

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1 蒯筱漪;解偶聯(lián)蛋白2在結腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學;2011年

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4 張險峰;粘著斑激酶及磷酸化粘著斑激酶在結腸癌中的表達及意義[D];武漢大學;2005年

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6 王羊;5-氟胞嘧啶熱化療對鼠結腸癌肝轉移治療機理研究[D];福建醫(yī)科大學;2008年

7 于宏;轉化生長因子β1在結腸癌細胞中分子生物學行為的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

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10 趙金來;Twist基因在結腸癌中的表達分析[D];天津醫(yī)科大學;2009年

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