本文關(guān)鍵詞：ASPP2及其異構(gòu)體ΔASPP2對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞自噬及凋亡影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的結(jié)腸癌為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,超過半數(shù)以上的結(jié)腸癌患者具有P53基因突變或缺失。P53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of P53,ASPP2)在P53基因選擇性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中起著重要作用,ASPP2能夠通過P53依賴途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡,從而抑制腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。ΔASPP2是通過5’RACE技術(shù)發(fā)現(xiàn)的一種新的、被截短的、含有880個(gè)氨基酸的ASPP2異構(gòu)體。初步研究顯示ΔASPP2不僅能抑制細(xì)胞凋亡,也能促進(jìn)細(xì)胞自噬,同時(shí)在臨床結(jié)腸癌標(biāo)本中也發(fā)現(xiàn)ΔASPP2表達(dá)顯著增高。本課題旨在探討ASPP2及其異構(gòu)體ΔASPP2對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)的結(jié)腸癌HCT116 P53-/-(P53缺失型)細(xì)胞凋亡和自噬的影響,并深入探討ΔASPP2對(duì)ASPP2與P53引起的細(xì)胞自噬及凋亡的影響及其相關(guān)機(jī)制。方法結(jié)腸癌及癌旁正常組織冰凍切片處理,經(jīng)包埋及固定后,利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸癌及癌旁組織中ASPP2與P53的表達(dá)情況;提取結(jié)腸癌標(biāo)本及癌旁組織RNA,隨后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄為c DNA,并利用ASPP2、ΔASPP2與P53引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸癌標(biāo)本及癌旁組織中ASPP2 m RNA、ΔASPP2 m RNA與P53 m RNA表達(dá)水平;使用ASPP2、ΔASPP2及P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HCT116-/-細(xì)胞,同時(shí)轉(zhuǎn)染綠色熒光GFP-LC3質(zhì)粒至各組細(xì)胞中,利用化療藥物奧沙利鉑(L-OHP)處理后利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞自噬水平;利用M30、Calcein AM/PI染色與流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡水平;利用MTT法檢測(cè)不同處理組細(xì)胞相對(duì)存活率;使用r Ad-ASPP2、r Ad-ΔASPP2與r Ad-53感染HCT116-/-細(xì)胞,經(jīng)L-OHP處理后,利用平板細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力;利用免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)ΔASPP2對(duì)ASPP2與P53結(jié)合能力的影響;利用免疫印記檢測(cè)各組細(xì)胞自噬及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1.相對(duì)于癌旁正常組織,ASPP2 m RNA在結(jié)腸癌組織中表達(dá)顯著降低(腫瘤2.27±1.66 VS癌旁3.63±1.73,P0.05),ΔASPP2 m RNA在腫瘤組織中表達(dá)增加(腫瘤0.54±0.26 VS癌旁0.40±0.23,P0.05),P53 m RNA在癌及癌旁組織中的表達(dá)沒有明顯差異(腫瘤5.31±1.14,癌旁5.55±1.07,P0.05);2.ΔASPP2能夠拮抗ASPP2與P53的結(jié)合,從而抑制其促細(xì)胞凋亡功能;3.ΔASPP2能夠增加細(xì)胞存活率并提高細(xì)胞增殖能力;4.與P53處理組(自噬5.43%±0.21%,凋亡33.67%±0.76%)相比,ΔASPP2+P53處理組自噬水平增加(14.77%±0.25%,P0.05),凋亡水平下降(21.33%±0.94%,P0.05);與ASPP2+P53處理組(自噬3.37%±0.15%,凋亡50.61%±1.25%)相比,ΔASPP2+ASPP2+P53處理組自噬水平增加(12.33%±0.26%,P0.05),凋亡水平下降(35.18%±1.12%,P0.05)。結(jié)論1.與癌旁正常組織相比,ASPP2 m RNA在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)降低,ΔASPP2 m RNA在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)增高,P53 m RNA表達(dá)在兩者間無明顯差異;2.ΔASPP2能夠抑制ASPP2與P53的結(jié)合能力;3.ΔASPP2能夠拮抗ASPP2及P53的抑制細(xì)胞自噬功能;4.ΔASPP2能夠拮抗ASPP2及P53的促進(jìn)細(xì)胞凋亡功能;5.ΔASPP2可通過促進(jìn)細(xì)胞自噬抑制細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：P53 P53凋亡刺激蛋白2(ASPP2) ASPP亞型(ΔASPP2) 細(xì)胞自噬 細(xì)胞凋亡 結(jié)腸癌
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 英文縮略詞表11-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-23
• 結(jié)果23-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 文獻(xiàn)綜述39-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 攻讀碩士期間參與發(fā)表文章情況47-48
• 致謝48

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 譚江平,校宏兵;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)與結(jié)腸癌預(yù)后的關(guān)系[J];中國(guó)癌癥雜志;2001年01期

2 吳毅平,Shoshana Yakar,Derek LeRoith;循環(huán)中胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ水平調(diào)節(jié)結(jié)腸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2004年05期

3 張曉輝,胡成乙;β-聯(lián)蛋白在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年04期

4 呂盈盈;錢家鳴;顧建剛;蔣衛(wèi)君;;結(jié)腸癌血管生成相關(guān)因子的表達(dá)及其意義的研究[J];臨床消化病雜志;2006年01期

5 左曉明;姚曉虹;祝明潔;虞文偉;;胃結(jié)腸癌不同形態(tài)區(qū)域的免疫組化表達(dá)[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年05期

6 冉宇靚;胡海;趙澤國(guó);孫立新;楊治華;;結(jié)腸癌腫瘤自身抗體譜篩選及其應(yīng)用[J];腫瘤防治研究;2008年05期

7 王曉玲;何劍琴;李俊達(dá);;存活素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2008年24期

8 郭恩浦;王瑜;葉航;王曉山;;巨噬細(xì)胞游走抑制因子過表達(dá)和結(jié)腸癌血管發(fā)生的關(guān)系[J];河北醫(yī)藥;2008年07期

9 張毅欽;賀華勇;;基質(zhì)金屬蛋白酶和α-連接蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2009年06期

10 張欣;鄭鵬生;;細(xì)胞角蛋白7和19在結(jié)腸癌中的表達(dá)及意義[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蒯筱漪;于鵬麗;施瑞華;張紅杰;;糖酵解途徑中四種關(guān)鍵酶在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)分析[A];第二十二屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨消化疾病診治進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2010年

2 王志剛;嚴(yán)志;章必成;饒智國(guó);余麗芳;劉健;高建飛;;基于芯片數(shù)據(jù)的隨機(jī)森林算法鑒定結(jié)腸癌生物標(biāo)記物(英文)[A];第四屆湖北省抗癌協(xié)會(huì)青年委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

3 陳昊;白玲;張昶;趙文海;陳乃玲;;促凋亡蛋白FasL在結(jié)腸癌組織表達(dá)的臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

4 梁倩;宿志弘;李繼承;;人結(jié)腸癌組織中樹突狀細(xì)胞的免疫組織化學(xué)研究[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

5 田笑;;結(jié)腸癌相關(guān)抗原的純化與分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

6 史冠男;彭瓊;;低氧誘導(dǎo)對(duì)結(jié)腸癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系的研究[A];第二十五屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2013年

7 陳乃玲;陳昊;白玲;張昶;趙文海;;細(xì)胞色素C在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及與細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)改變的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

8 盧瑗瑗;王新;劉震雄;陳崢;靳斌;翟惠虹;張發(fā)明;郭學(xué)剛;樊代明;;結(jié)腸癌特異性新抗原MC3-Ag的分離與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

9 王重凱;袁國(guó)紅;付衛(wèi);;DACT1在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)中青年腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議——中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)“中華腫瘤 明日之星”大型評(píng)選活動(dòng)暨中青年委員全國(guó)遴選論文匯編[C];2011年

10 李嵐;厲有名;;Agronaute蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)和臨床意義[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 記者 蔣明;白介素17可抑制結(jié)腸癌形成[N];健康報(bào);2012年

2 吳一福;結(jié)腸癌中的生存素是凋亡抑制因子[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 記者 毛磊;結(jié)腸癌30%與基因變異有關(guān)[N];新華每日電訊;2003年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蒯筱漪;解偶聯(lián)蛋白2在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

2 劉津杉;結(jié)腸癌中埃滋蛋白和細(xì)胞間粘附分子1的表達(dá)及意義[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

3 楊光磊;模擬缺氧條件下結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥及抗凋亡分子機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張險(xiǎn)峰;粘著斑激酶及磷酸化粘著斑激酶在結(jié)腸癌中的表達(dá)及意義[D];武漢大學(xué);2005年

5 葉帥;全長(zhǎng)脂聯(lián)素對(duì)高糖環(huán)境下結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和凋亡影響的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

6 王羊;5-氟胞嘧啶熱化療對(duì)鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移治療機(jī)理研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

7 于宏;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1在結(jié)腸癌細(xì)胞中分子生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

8 郭書偉;生長(zhǎng)抑素受體亞型在結(jié)腸癌中的表達(dá)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

9 崔浩;URG-4基因在結(jié)腸癌中表達(dá)及意義的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 趙金來;Twist基因在結(jié)腸癌中的表達(dá)分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：ASPP2及其異構(gòu)體ΔASPP2對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞自噬及凋亡影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：469642