發(fā)布時(shí)間：2017-06-21 20:18

  本文關(guān)鍵詞：BMP4對(duì)肝癌VM形成影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究目的】腫瘤血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry,VM)是一種管壁由腫瘤細(xì)胞圍成的、不依賴機(jī)體內(nèi)皮細(xì)胞的腫瘤微循環(huán)模式。VM與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移、臨床分期、不良預(yù)后有關(guān)。BMP4是TGF-β超家族中的一員,研究發(fā)現(xiàn)BMP4在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移侵襲過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過探討B(tài)MP4在肝癌VM形成中發(fā)揮的作用,期待能為肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的治療提供新的的思路和靶點(diǎn)�！狙芯糠椒ā�1、收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院和腫瘤醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除且隨訪資料完整并經(jīng)病理診斷為肝細(xì)胞肝癌的病例標(biāo)本92例,利用免疫組化方法,將病例分為BMP4陽性組和BMP4陰性組,分析BMP4與VM、年齡、性別、腫瘤大小、病理分級(jí)、臨床分期、轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系;用Kaplan-Meier生存分析比較BMP4陽性組與BMP4陰性組患者的生存預(yù)后情況。2、根據(jù)BMP4的表達(dá)水平,選取低表達(dá)BMP4的HCC細(xì)胞系HepG2細(xì)胞和高表達(dá)BMP4的HCC細(xì)胞系SMMC7721細(xì)胞。HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染BMP4上調(diào)質(zhì)粒構(gòu)建BMP4上調(diào)模型,SMMC7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染BMP4下調(diào)質(zhì)粒構(gòu)建BMP4下調(diào)模型。利用Western Blot及細(xì)胞免疫熒光鑒定BMP4轉(zhuǎn)染效果。3、利用劃痕和侵襲實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)上調(diào)BMP4對(duì)HepG2細(xì)胞遷移侵襲能力變化;下調(diào)BMP4對(duì)SMMC7721細(xì)胞遷移侵襲能力變化。4、利用三維培養(yǎng)分析上調(diào)BMP4對(duì)HepG2細(xì)胞管狀結(jié)構(gòu)形成能力的影響;下調(diào)BMP4對(duì)SMMC7721細(xì)胞管狀結(jié)構(gòu)形成能力的影響。5、利用Western Blot及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上調(diào)BMP4對(duì)HepG2細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白(E-cadherin、Vimentin)、干細(xì)胞相關(guān)分子(OCT4、SOX2)表達(dá)的影響;下調(diào)BMP4對(duì)SMMC7721細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白(E-cadherin、Vimentin)、干細(xì)胞相關(guān)分子(OCT4、SOX2)表達(dá)的影響。6、利用Western Blot及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上調(diào)BMP4對(duì)HepG2細(xì)胞VM相關(guān)蛋白EphA2、VE-cadherin及MMP2表達(dá)的影響;下調(diào)BMP4對(duì)SMMC7721細(xì)胞VM相關(guān)蛋白EphA2、VE-cadherin及MMP2表達(dá)的影響。7、利用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上調(diào)BMP4對(duì)HepG2細(xì)胞中MMP2表達(dá)活性的影響;下調(diào)bmp4對(duì)smmc7721細(xì)胞中mmp2表達(dá)活性的影響。【研究結(jié)果】1、免疫組化染色結(jié)果顯示,在92例肝癌標(biāo)本中,52例呈bmp4陽性表達(dá),40例呈bmp4陰性表達(dá)。分析bmp4陽性組和bmp4陰性組與肝癌患者臨床病理資料的關(guān)系顯示,bmp4與vm呈正相關(guān)(χ2=5.662,p=0.017)。bmp4在年齡45歲的患者中表達(dá)較高,而在≤45歲的患者中表達(dá)較低(χ2=8.400,p=0.004)。bmp4在不同病理分級(jí)的患者中表達(dá)不同,bmp4在低分化(Ⅲ~Ⅳ)的患者中表達(dá)高于高分化(Ⅰ~Ⅱ)的患者(χ2=4.048,p=0.044)。bmp4在不同臨床分期的患者中表達(dá)也不同,在Ⅲ~Ⅳ期的患者中的表達(dá)較Ⅰ~Ⅱ期的患者表達(dá)高(χ2=5.475,p=0.019)。bmp4在不同性別、腫瘤大小、有無轉(zhuǎn)移的患者中的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。kaplan-meier生存分析結(jié)果顯示,bmp4陽性組較bmp4陰性組患者的生存時(shí)間短(p=0.046)。2、westernblot及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染bmp4上調(diào)質(zhì)粒后hepg2細(xì)胞bmp4表達(dá)明顯上調(diào),轉(zhuǎn)染bmp4下調(diào)質(zhì)粒后smmc7721細(xì)胞bmp4表達(dá)明顯下調(diào)。3、劃痕和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,上調(diào)bmp4后,hepg2細(xì)胞遷移侵襲能力明顯提高(p0.05);下調(diào)bmp4后,smmc7721細(xì)胞遷移侵襲能力明顯降低(p0.05)。4、三維培養(yǎng)結(jié)果顯示,上調(diào)bmp4后,hepg2細(xì)胞形成管狀結(jié)構(gòu)的能力明顯增強(qiáng);下調(diào)bmp4后,smmc7721細(xì)胞形成管狀結(jié)構(gòu)的能力明顯降低。5、westernblot及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,上調(diào)bmp4后,hepg2細(xì)胞中emt相關(guān)蛋白vimentin表達(dá)增強(qiáng),e-cadherin表達(dá)降低,干細(xì)胞相關(guān)分子oct4、sox2表達(dá)增強(qiáng);下調(diào)bmp4后,smmc7721細(xì)胞中emt相關(guān)蛋白vimentin表達(dá)降低,e-cadherin表達(dá)增強(qiáng),干細(xì)胞相關(guān)分子oct4、sox2表達(dá)降低。6、westernblot及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,上調(diào)bmp4后,hepg2細(xì)胞vm相關(guān)蛋白epha2、ve-cadherin、mmp2表達(dá)增強(qiáng);下調(diào)bmp4后,smmc7721細(xì)胞vm相關(guān)蛋白epha2、ve-cadherin、mmp2表達(dá)降低。7、明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢結(jié)果顯示,上調(diào)bmp4后,hepg2細(xì)胞mmp2表達(dá)活性增強(qiáng);下調(diào)bmp4后,smmc7721細(xì)胞mmp2表達(dá)活性降低�！狙芯拷Y(jié)論】1、BMP4與肝癌的VM、年齡、病理分級(jí)、臨床分期呈正相關(guān),與其它臨床病理資料無關(guān),并且BMP4表達(dá)陽性的患者生存時(shí)間短,預(yù)后不良。2、BMP4可以增強(qiáng)HCC細(xì)胞的遷移、侵襲能力和VM形成能力,它可能是通過誘導(dǎo)HCC細(xì)胞發(fā)生EMT、獲得某些干性特點(diǎn)及EphA2/VE-cadherin/MMP2通路來促進(jìn)肝癌VM形成。本研究可能為肝癌的抗血管治療提供了新的作用靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：BMP4 肝細(xì)胞肝癌 血管生成擬態(tài) 上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 干性
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語12-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、人肝癌組織中BMP4與VM及臨床病理資料之間的的關(guān)系17-25
• 1.1 對(duì)象和方法17-19
• 1.1.1 病理資料17
• 1.1.2 免疫組化染色17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法17-19
• 1.1.4 免疫組化結(jié)果判定19
• 1.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19
• 1.2 結(jié)果19-23
• 1.2.1 肝癌患者臨床病理資料特征19
• 1.2.2 肝癌中VM的 形態(tài)學(xué)觀察19-21
• 1.2.3 肝癌中BMP4與VM，臨床病理參數(shù)的關(guān)系21-23
• 1.3 小結(jié)23-25
• 二、BMP4對(duì)肝癌細(xì)胞體外形成VM的影響25-44
• 2.1 對(duì)象和方法25-34
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料25-29
• 2.1.2 研究方法29-34
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析34
• 2.2 結(jié)果34-43
• 2.2.1 BMP4在HCC細(xì)胞系中的表達(dá)情況，在HepG2細(xì)胞中建立BMP4上調(diào)模型，在SMMC7721細(xì)胞中建立BMP4下調(diào)模型34-36
• 2.2.2 BMP4表達(dá)上調(diào)使HCC細(xì)胞的遷移侵襲能力增加，BMP4表達(dá)下調(diào)使HCC細(xì)胞的遷移侵襲能力降低36-38
• 2.2.3 BMP4表達(dá)上調(diào)促進(jìn)體外HCC細(xì)胞VM形成，BMP4表達(dá)下調(diào)抑制HCC細(xì)胞VM形成38-39
• 2.2.4 上調(diào)BMP4誘導(dǎo)EMT的發(fā)生及干細(xì)胞標(biāo)記物OCT4、SOX2的表達(dá)，， 下調(diào)BMP4抑制EMT的發(fā)生及OCT4、SOX2的表達(dá)39-40
• 2.2.5 BMP4通過EphA2/VE-cadherin/MMP2通路促進(jìn)HCC VM形成40-43
• 2.3 小結(jié)43-44
• 討論44-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-60
• 綜述60-69
• 綜述參考文獻(xiàn)66-69
• 致謝69

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