本文關(guān)鍵詞：CIP2A通過(guò)調(diào)節(jié)自噬水平影響宮頸癌細(xì)胞放療敏感性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景宮頸癌作為女性發(fā)病率第二位的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅著女性健康。放射治療在宮頸癌治療中具有很重要的地位,然而并非所有的宮頸癌病例都對(duì)放療敏感。個(gè)體差異及腫瘤異質(zhì)性的存在使得不同病例產(chǎn)生對(duì)放射治療的不同敏感性。放療耐受的存在成為限制放射治療的療效和治療失敗的重要原因。因此研究放療耐受發(fā)生的原因,以及研究其發(fā)生過(guò)程中的分子機(jī)制具有很重要的意義,可以為克服放療耐受提供潛在的分子靶點(diǎn)。自噬作為生物進(jìn)化過(guò)程中相對(duì)保守的一個(gè)代謝過(guò)程,廣泛存在于植物和其他低等生物的生命過(guò)程中。自噬在腫瘤治療中所起的作用一直存在爭(zhēng)議,人們形象的稱之為“雙刃劍”,近年放療領(lǐng)域的研究?jī)A向于將自噬認(rèn)為是放療的“增敏劑”。CIP2A是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種人類致癌蛋白,它主要是通過(guò)抑制PP2A對(duì)c-Myc 62位絲氨酸(S62)的去磷酸化,從而抑制了c-Myc蛋白的降解,增加了胞內(nèi)c-Myc的蛋白水平來(lái)發(fā)揮作用的。研究發(fā)現(xiàn),CIP2A在很多腫瘤都呈現(xiàn)過(guò)表達(dá),并且與它們的惡性程度不良預(yù)后密切相關(guān)。我們課題組最近的研究發(fā)現(xiàn)CIP2A通過(guò)調(diào)節(jié)多藥耐藥蛋白(MDR)的產(chǎn)生,導(dǎo)致了宮頸癌細(xì)胞多藥耐藥的產(chǎn)生。研究目的1.明確CIP2A在宮頸癌中與放療耐受的關(guān)系。2.明確CIP2A在宮頸癌中與自噬之間的關(guān)系。3.驗(yàn)證CIP2A在宮頸癌中調(diào)節(jié)放療耐受的機(jī)制。研究方法與結(jié)果1.CIP2A與宮頸癌放療敏感性的研究：對(duì)照組與干擾CIP2A組分別給予宮頸癌HeLla、SiHa細(xì)胞照射不同劑量的的X射線,然后通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn),CCK8實(shí)驗(yàn),細(xì)胞生存率實(shí)驗(yàn)檢測(cè)射線對(duì)HeLa、SiHa細(xì)胞的殺傷作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在特異性敲低CIP2A后,射線對(duì)HeLa、SiHa細(xì)胞增殖的抑制能力顯著增加,敲低CIP2A組細(xì)胞數(shù)量減少(p0.01,p0.05),增殖速度降低,克隆形成數(shù)也明顯減少(p0.05)。這表明,在HeLa、SiHa細(xì)胞中CIP2A與放療敏感性有關(guān),敲低CIP2A能夠提高HeLa細(xì)胞對(duì)射線的敏感性。2.放射條件下,宮頸癌細(xì)胞中CIP2A與DNA損傷的關(guān)系的研究：利用Western Blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低HeLa、SiHa細(xì)胞中的CIP2A后,剪切的PARP1的蛋白表達(dá)水平,然后通過(guò)DAPI實(shí)驗(yàn)和彗星電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)凋亡小體的數(shù)量和細(xì)胞核的形態(tài)。結(jié)果顯示：敲低CIP2A后剪切的PARP1蛋白水平表達(dá)升高,DAPI實(shí)驗(yàn)顯示凋亡小體增多,彗星試驗(yàn)中拖尾細(xì)胞增多。這表明敲低CIP2A后HeLa, SiHa細(xì)胞中的DNA損傷加重。3.宮頸癌細(xì)胞照射下,CIP2A與自噬水平的研究：利用Western Blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同照射劑量下HeLa、SiHa細(xì)胞中對(duì)照組與干擾CIP2A組LC3B和P62蛋白表達(dá)水平,然后通過(guò)電鏡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了HeLa細(xì)胞中的自噬小體數(shù)量。結(jié)果顯示：干擾CIP2A組LC3B蛋白表達(dá)水平升高,P62表達(dá)水平下降。電鏡實(shí)驗(yàn)中,干擾CIP2A組自噬小體數(shù)量增多(p0.05)。這表明,在HeLa、SiHa細(xì)胞中,敲低CIP2A能上調(diào)細(xì)胞內(nèi)的自噬水平。4.驗(yàn)證CIP2A是否通過(guò)抑制自噬降低了宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性：在HeLa、 SiHa細(xì)胞里敲低CIP2A的基礎(chǔ)上,敲低自噬關(guān)鍵基因Beclinl的表達(dá),通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證干擾組與對(duì)照組的細(xì)胞生存率。結(jié)果顯示：干擾Beclinl組的克隆形成數(shù)增多,細(xì)胞生存率增加(p0.01)。這表明：CIP2A可能通過(guò)抑制自噬降低了宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性。結(jié)論：本研究首次證實(shí)了CIP2A參與調(diào)節(jié)宮頸癌的放療敏感性,這種作用主要是CIP2A通過(guò)抑制自噬來(lái)實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)我們加入自噬的干擾劑抑制自噬后,敲低CIP2A帶來(lái)的放療增敏也有了部分的回轉(zhuǎn)。因此,我們的研究結(jié)果提示,CIP2A作為一個(gè)新的基因治療靶標(biāo),在宮頸癌的綜合治療中有著潛在的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 放療耐受 CIP2A 自噬
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞索引11-12
• 前言12-15
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法15-24
• 結(jié)果24-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 附圖30-34
• 參考文獻(xiàn)34-40
• 綜述40-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文56-57
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況57

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本文編號(hào)：455865