本文關(guān)鍵詞：血清中長鏈非編碼RNA檢測方法的建立及其在結(jié)直腸癌診斷中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景結(jié)直腸癌是我國乃至全球最常見的惡性腫瘤之一[1],嚴重威脅人們的身心健康。雖然早期結(jié)直腸癌患者治愈率高,5年生存率可達90%,但由于目前缺乏有效的早期診斷方法,大多數(shù)結(jié)直腸癌患者確診時已為中晚期,其生存率僅為10%~15%[2]。結(jié)直腸癌的發(fā)生是一個復(fù)雜而緩慢的過程,多數(shù)認為由腺瘤或者鋸齒狀息肉到早期癌再到進展期癌。其演變過程涉及復(fù)雜的基因和蛋白表達變化。糖鏈抗原(carbohydrate antigen CA)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)等一些表達變化的分子能有效的篩查中晚期結(jié)腸癌,但對于早期結(jié)直腸癌的診斷率較低[3]。因此,篩查并驗證結(jié)直腸癌相關(guān)基因及蛋白的表達譜有利于提高早期結(jié)直腸癌的診斷率,從而提高患者治愈率并延長生存時間。長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一類長度為200~100,000 nt且不編碼蛋白的單鏈RNA分子[4]。近年來,大量研究表明腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及患者的預(yù)后均與lncRNAs的表達失調(diào)密切相關(guān)[5-7],其表達譜可能作為診斷惡性腫瘤的一類新的生物標志物,如HOTAIR[8]、ncRuPAR[9]等。文獻報道,在結(jié)直腸癌組織中多條lncRNAs表達上調(diào),且與患者不良預(yù)后密切相關(guān),如CCAT1[10]、HOTAIR[11]、H19[12]等。最新的研究表明血清中l(wèi)ncRNAs可作為一種有效的非侵襲性的生物標志物診斷腫瘤,但在結(jié)直腸癌患者血清中l(wèi)ncRNAs的表達譜及其檢測方法極少研究[13]。因此,本研究擬以lncRNA HOTAIR為例,建立血清中l(wèi)ncRNA的檢測方法,進一步采用lncRNA芯片篩選結(jié)直腸癌組織中表達差異顯著的lncRNAs,并采用qRT-PCR驗證候選lncRNAs在結(jié)直腸癌組織及患者血清中的表達,采用工作特征曲線(ROC)分析lncRNAs的表達譜在結(jié)直腸癌診斷中的應(yīng)用價值。目的建立血清中l(wèi)ncRNA的檢測方法,評價表達差異的lncRNA在結(jié)直腸癌診斷中的應(yīng)用。方法1.采用lncRNA芯片篩選結(jié)腸直癌組織中表達差異的lncRNAs。采用lncrna芯片技術(shù)篩查3對結(jié)直腸癌及癌旁組織中表達差異的lncrnas,按照一定的篩選原則,候選7條lncrnas,以及文獻報道在結(jié)直腸癌組織中高表達的3條lncrnas,共計10條lncrnas作為研究對象。2.采用qrt-pcr驗證表達差異的lncrnas。2.1采用trizol及trizolls法共提取25對結(jié)直腸癌及癌旁組織樣本與67例結(jié)腸癌患者、50例正常志愿者血清樣本中的總rnas。2.2采用qrt-pcr相對定量法檢測已報道在結(jié)直腸癌中高表達的hotair及候選的9條lncrna的表達情況:采用primescript結(jié)rtreagentkitwithgdnaeraser試劑(大連takara公司)對總rna進行逆轉(zhuǎn)錄。采用sybrpremixextaqⅡ試劑(大連takara公司)對合成的cdna進行擴增。組織中以β-actin為內(nèi)參,血清中引入線蟲的microrna(cel-mir-39)作為內(nèi)參。2.3.roc分析lncrnas表達譜在結(jié)直腸癌診斷中的準確率。2.4采用pearson做lncrnas表達譜與結(jié)直腸癌tnm分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及ca19-9值的相關(guān)性分析。結(jié)果1.成功建立血清中l(wèi)ncrnas(linc01608、linc00594、rp11-91j3.3、h19及hotair)的檢測方法。2.hotair在結(jié)直腸癌組織及患者血清中高表達,且與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。10例配對結(jié)直腸癌及癌旁組織樣本中,hotair在8例癌組織中的表達高于配對癌旁組織,兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義;在47例結(jié)直腸癌患者及40例正常志愿者血清樣本中,結(jié)直腸癌患者血清中hotair的表達高于正常志愿者,兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。tnmⅢ/Ⅳ期的結(jié)直腸癌患者血清中hotair的表達高于正常志愿者,Ⅲ/Ⅲ期高于Ⅰ/Ⅱ期;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及非轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者血清中hotair的表達均高于正常志愿者,且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者高于非轉(zhuǎn)移患者;roc分析提示hotair可能作為結(jié)直腸癌診斷的有效標志物。3.在結(jié)直腸癌組織中篩選表達差異顯著的lncrnas。由lncrna基因芯片篩選出p0.01,lncrna長度小于1000bp,高表達倍數(shù)5,且排前7位的lncrnas,即:linc01608、xist、linc00594、rp11-91j3.3、sema3b-as1、rp11-396o20.2和rp11-867g23.13,加之文獻已報道在結(jié)直腸癌組織中高表達的2條lncrnas:ccat1和h19共計9條lncrnas。4.linc00594和rp11-91j3.3在結(jié)直腸癌患者血清中顯著高表達。在25例配對結(jié)直腸癌及癌旁組織樣本中,linc01608、linc00594、rp11-91j3.3和h19的表達在兩者間差異無統(tǒng)計學(xué)意義;在67例結(jié)直腸癌患者及50例正常志愿者血清樣本中,linc00594和rp11-91j3.3在結(jié)直腸癌患者血清中的表達高于正常志愿者,兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,roc分析提示其可能作為結(jié)直腸癌診斷的有效標志物;兩組中l(wèi)inc01608和h19的表達無統(tǒng)計學(xué)差異。5.結(jié)直腸癌患者血清中l(wèi)inc00594和rp11-91j3.3的表達與tnm分期,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及ca19-9值無顯著相關(guān)性。結(jié)論1.建立了血清中l(wèi)ncrnas的檢查方法。2.血清中l(wèi)inc00594、rp1191j3.3和hotair可能作為作為診斷結(jié)直腸癌的新的生物標志物。
【關(guān)鍵詞】：lncRNA 結(jié)直腸癌 血清 生物標志物
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-14
• 研究技術(shù)路線13-14
• 第二章 血清中長鏈非編碼RNA HOTAIR檢測方法的建立及其在結(jié)直腸癌診斷中的應(yīng)用14-25
• 2.1 實驗材料14-15
• 2.2 實驗方法15-19
• 2.3 實驗結(jié)果19-23
• 2.4 討論23-25
• 第三章 探索血清中的多條長鏈非編碼RNA檢測方法及其在結(jié)直腸癌診斷中的應(yīng)用25-50
• 3.1 實驗材料25-26
• 3.2 實驗方法26-31
• 3.3 實驗結(jié)果31-48
• 3.4 討論48-50
• 全文總結(jié)50-51
• 參考文獻51-56
• 文獻綜述 長鏈非編碼RNA在結(jié)直腸癌中的作用56-68
• 參考文獻62-68
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文68-69
• 致謝69

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  本文關(guān)鍵詞：血清中長鏈非編碼RNA檢測方法的建立及其在結(jié)直腸癌診斷中的應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：449455