本文關(guān)鍵詞：抑瘤素M與鹽霉素聯(lián)用對(duì)肝癌干細(xì)胞作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝癌是世界上最常見的致死性腫瘤之一,每年影響超過(guò)一百萬(wàn)人,居世界腫瘤死亡率的第三位。肝癌對(duì)化療、放療不敏感,術(shù)后易復(fù)發(fā),預(yù)后較差。因此,迫切需要新的治療方法。腫瘤干細(xì)胞理論的出現(xiàn),為肝癌的治療開拓了新的道路。腫瘤干細(xì)胞是存在于腫瘤細(xì)胞中數(shù)量極少的一部分細(xì)胞亞群,它們具有自我更新和無(wú)限分裂的能力,比普通腫瘤細(xì)胞更加抵抗常規(guī)放化療,與腫瘤復(fù)發(fā)和再生密切相關(guān)。因此,靶向清除腫瘤干細(xì)胞可能就是治愈腫瘤的關(guān)鍵。目前,誘導(dǎo)分化治療是研究較多的一種靶向治療腫瘤干細(xì)胞的療法。抑瘤素M是一種多功能的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子,研究發(fā)現(xiàn)抑瘤素M可以誘導(dǎo)肝癌干細(xì)胞分化,并且可以增加對(duì)傳統(tǒng)化療藥物5-氟尿嘧啶的敏感性。鹽霉素是一種獸用抗生素,由于其對(duì)腫瘤干細(xì)胞的抑制作用,近年來(lái)越來(lái)越受到研究者的關(guān)注。研究表明,鹽霉素可以降低肝癌細(xì)胞的增殖率,促進(jìn)其凋亡,同時(shí)下調(diào)CD133~+干細(xì)胞亞群的百分比。本實(shí)驗(yàn)以CD133為腫瘤干細(xì)胞篩選標(biāo)志,通過(guò)免疫磁珠法從人肝癌細(xì)胞Hep G2細(xì)胞系中篩選出CD133~+Hep G2肝癌干細(xì)胞,擬聯(lián)合抑瘤素M與鹽霉素作用于CD133~+Hep G2肝癌干細(xì)胞,探討是否可以更加顯著地誘導(dǎo)肝癌干細(xì)胞分化。結(jié)果顯示,篩選所得的CD133~+Hep G2細(xì)胞在含20ng/ml b FGF、20ng/ml EGF、2%B27的無(wú)血清DMEM/F12培養(yǎng)基呈懸浮生長(zhǎng)狀態(tài),由單細(xì)胞逐漸生長(zhǎng)為細(xì)胞微球;經(jīng)含血清的培養(yǎng)基誘導(dǎo)后,細(xì)胞微球開始貼壁生長(zhǎng);在軟瓊脂固體培養(yǎng)基中,分選后的單細(xì)胞可以繼續(xù)生長(zhǎng)形成克隆;對(duì)分選獲得的肝癌干細(xì)胞分別給予OSM、Sal和OSM+Sal處理,結(jié)果顯示,OSM與Sal聯(lián)合用藥可以顯著抑制肝癌干細(xì)胞的增殖和侵襲能力;Annexin-V-FITC雙染法、JC-1法和Western Blot法檢測(cè)凋亡可見聯(lián)合用藥組發(fā)生凋亡的細(xì)胞更多,線粒體膜電位下降的幅度更大,caspase-3的表達(dá)更多,提示聯(lián)合用藥誘導(dǎo)的凋亡作用高于單獨(dú)作用組;進(jìn)一步對(duì)藥物作用后肝癌干細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133的表達(dá)水平以及干性相關(guān)基因的表達(dá)水平均顯著下調(diào),肝癌標(biāo)志物AFP的表達(dá)水平顯著下調(diào),肝細(xì)胞標(biāo)志物ALB的表達(dá)水平顯著上調(diào),提示聯(lián)合用藥能夠更加顯著地誘導(dǎo)肝癌干細(xì)胞發(fā)生分化。綜上所述,抑瘤素M聯(lián)用鹽霉素能夠更加顯著抑制肝癌干細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)肝癌干細(xì)胞分化,促進(jìn)其凋亡。本研究為靶向治療肝癌干細(xì)胞的研究提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤干細(xì)胞 肝癌 誘導(dǎo)分化 聯(lián)合用藥
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 中英文對(duì)照表12-13
• 第一章 緒論13-22
• 1.1 肝癌的簡(jiǎn)介13
• 1.2 腫瘤干細(xì)胞13-15
• 1.2.1 腫瘤干細(xì)胞的理論13
• 1.2.2 腫瘤干細(xì)胞的分離13-14
• 1.2.3 腫瘤干細(xì)胞的鑒定14-15
• 1.3 腫瘤干細(xì)胞誘導(dǎo)分化治療15-17
• 1.3.1 誘導(dǎo)分化療法的理論15
• 1.3.2 誘導(dǎo)分化劑15-16
• 1.3.3 肝癌誘導(dǎo)分化療法在臨床中的應(yīng)用16-17
• 1.4 抑瘤素M17-19
• 1.4.1 抑瘤素M受體17-18
• 1.4.2 抑瘤素M生物學(xué)功能研究進(jìn)展18-19
• 1.5 鹽霉素19-20
• 1.5.1 鹽霉素對(duì)腫瘤干細(xì)胞作用的研究進(jìn)展19-20
• 1.5.2 鹽霉素臨床應(yīng)用前景20
• 1.6 實(shí)驗(yàn)立題依據(jù)20-22
• 第二章 材料與試劑22-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 2.1.1 細(xì)胞系22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑23-24
• 2.1.4 Q-PCR所用引物24
• 2.2 主要試劑配制24-27
• 2.2.1 PBS的配制24-25
• 2.2.2 DMEM高糖培養(yǎng)液配制25
• 2.2.3 DMEM/F12培養(yǎng)液的配制25
• 2.2.4 0.25%胰酶-EDTA混合液配制（10×）25
• 2.2.5 磁珠分選所用Buffer1的配制25-26
• 2.2.6 磁珠分選所用Buffer 2 的配制26
• 2.2.7 磁珠分選所用Buffer 3 的配制26
• 2.2.8 磁珠分選用DNase I的配制26
• 2.2.9 藥物溶液的配制26-27
• 第三章 實(shí)驗(yàn)方法27-38
• 3.1 CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定27-30
• 3.1.1 免疫磁珠法篩選CD133~+HepG2肝癌干細(xì)胞27-28
• 3.1.2 CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞的培養(yǎng)28-29
• 3.1.3 CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞的鑒定29-30
• 3.2 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞增殖的影響30-31
• 3.3 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+HepG2肝癌干細(xì)胞凋亡的影響31-32
• 3.3.1 Annexin V -FITC-PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡31
• 3.3.2 細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)（JC-1）31
• 3.3.3 Western Blot檢測(cè)caspase3蛋白的表達(dá)31-32
• 3.4 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞侵襲能力的影響32-33
• 3.5 聯(lián)合用藥誘導(dǎo)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志物的檢測(cè)33-37
• 3.5.1 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞中CD133表達(dá)水平的影響33
• 3.5.2 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞中干性相關(guān)基因表達(dá)水平的影響33-35
• 3.5.3 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞AFP、ALB表達(dá)水平的影響35-37
• 3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析37-38
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-50
• 4.1 CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定38-40
• 4.1.1 CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞的篩選38
• 4.1.2 CD133~+HepG2肝癌干細(xì)胞的培養(yǎng)38-39
• 4.1.3 CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞的鑒定39-40
• 4.2 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞增殖的影響40-42
• 4.3 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞凋亡的影響42-45
• 4.3.1 Annexin V -FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡42-43
• 4.3.2 細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)（JC-1）43-44
• 4.3.3 Western Blot檢測(cè)cleaved caspase3蛋白的表達(dá)44-45
• 4.4 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞侵襲能力的影響45-46
• 4.5 聯(lián)合用藥誘導(dǎo)CD133~+HepG2肝癌干細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志物的檢測(cè)46-50
• 4.5.1 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞中CD133表達(dá)水平的影響46-47
• 4.5.2 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+HepG2肝癌干細(xì)胞中干性相關(guān)基因表達(dá)水平的影響47-48
• 4.5.3 聯(lián)合用藥對(duì)CD133~+ HepG2肝癌干細(xì)胞AFP、ALB表達(dá)水平的影響48-50
• 第五章 討論50-52
• 第六章 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 致謝57

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