本文關(guān)鍵詞：IFN-α2b對JAK2V617F陽性骨髓增殖性腫瘤COX-2及血管新生的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究干擾素(interferon-alpha-2b,IFN-α2b)對骨髓增殖性腫瘤(myeloproliferativeneoplasm,MPN)患者JAK2激酶(JAK2 kinase)、環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及微血管密度(microvessel density,MVD)的影響;并觀察體外應(yīng)用IFN-α2b對JAK2V617F突變陽性的人紅白血病HEL細(xì)胞JAK2、COX-2的影響。探討IFN-α2b對HEL細(xì)胞是否存在抑制增殖、遷移,誘導(dǎo)凋亡以及抑制JAK2、COX-2基因表達(dá)的作用,并探討其體外作用機(jī)制,為IFN-α2b應(yīng)用于臨床治療骨髓增殖性腫瘤提供理論依據(jù)。方法:1收集2012年01月至2014年10月在保定市第一醫(yī)院門診或住院接受熒光定量PCR檢測確定有JAK2V617F陽性的MPN患者42例,其診斷均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[1]。其中原發(fā)性血小板增多癥(ET)17例,真性紅細(xì)胞增多癥(PV)10例,原發(fā)性骨髓纖維化(PMF)15例;42例MPN患者按照治療方案分為初治組25例,經(jīng)IFN-α2b治療組17例;另收集同期10例特發(fā)性血小板減少性紫癜(Idiopathic immune thrombocytopenic purpura,ITP)患者作為對照組。所有對象均簽署知情同意書。2治療方案對照組:因ITP患者不存在JAK2V617F突變,且病理組織的p-JAK2、COX-2水平及MVD與正常人相同,故此次實(shí)驗(yàn)選用ITP患者作為對照組。初治組:初次確診還未接受治療的JAK2V617F突變的MPN患者治療組:IFN-α2b治療組所有MPN患者均應(yīng)用接受IFN-α2b(與本次細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中IFN-α2b同廠家不同批次)皮下或肌肉注射,300萬單位/次,3-7次/周,至少應(yīng)用治療6個月以上,根據(jù)白細(xì)胞、血紅蛋白及血小板數(shù)量來決定是否聯(lián)合應(yīng)用羥基脲。3細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組選用jak2v617f突變陽性人紅白血病細(xì)胞株(hel)。實(shí)驗(yàn)分為:對照組、ifn-α2b處理組。對照組僅用含10%新生牛血清的rpmi1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。ifn-α2b處理組用含不同濃度ifn-α2b的10%新生牛血清rpmi1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。ifn-α2b的終濃度分別為0.5×104u/l、1×104u/l、3×104u/l、5×104u/l。4應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(fq-pcr)檢測mpn患者jak2v617f突變量。5采用免疫組化檢測患者骨髓病理組織p-jak2、cox-2的表達(dá)及cd105標(biāo)記的微血管密度(mvd)。6采用cellcountingkit(cck-8)方法,觀察ifn-α2b對hel細(xì)胞增殖抑制情況。7采用流式細(xì)胞技術(shù)觀察ifn-α2b對hel細(xì)胞凋亡的影響。8采用transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察ifn-α2b對hel細(xì)胞遷移的影響9采用半定量pcr方法檢測ifn-α2b作用于hel細(xì)胞后,各組細(xì)胞jak2、cox-2mrna的表達(dá)情況。10采用蛋白印跡(westernblot)技術(shù)檢測ifn-α2b作用于hel細(xì)胞后,各組細(xì)胞p-jak2、cox-2蛋白的表達(dá)情況。11所有數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。采用spss19.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)處理。兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),多組均數(shù)比較采用方差分析,組間兩兩比較選用q檢驗(yàn)。p0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示:p-jak2、cox-2在初治組患者中表達(dá)水平分別為(82.41±11.65)%、(65.66±20.15)%,ifn-α2b治療組患者表達(dá)水平(60.93±20.57)%、(44.30±12.83)%均明顯的高于對照組患者表達(dá)水平(43.05±4.59)%、(28.69±3.75)%(p0.05)。初治組的mvd為(26.58±5.93)/hp,ifn-α2b治療組的mvd為(15.86±4.27)/hp,均明顯高于對照組的mvd(10.76±4.01)/hp(p0.05)。ifn-α2b可明顯降低mpn患者p-jak2、cox-2及mvd表達(dá)水平。2應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(fq-pcr)檢測mpn患者jak2v617f突變量在26.8%-75.4%之間。將初治組分為jak2v617f/jak250%及≥50%兩組,結(jié)果顯示:jak2v617f/jak2≥50%組微血管數(shù)/hp、p-jak2+細(xì)胞比例、cox-2+細(xì)胞比例分別為(34.19±6.57)/hp,(89.76±20.56)%,(69.31±25.46)%,明顯高于jak2v617f/jak250%的患者(19.16±5.34)/hp,(65.15±17.59)%,(44.72±18.41)%(p0.05)。3cck-8結(jié)果顯示:不同濃度(0.5×104u/l、1×104u/l、3×104u/l、5×104u/l)ifn-α2b處理組hel細(xì)胞的抑制率,24h時分別為(1.33±0.13)%、(2.18±0.16)%、(7.42±0.79)%、(12.56±1.07)%;48h時分別為(9.43±0.815)%、(15.20±1.94)%、(30.15±9.29)%、(51.60±7.18)%;72h時分別為(17.47±1.58)%、(29.39±3.12)%、(54.26±5.01)%、(79.15±8.17)%。與空白對照組相比,不同濃度ifn-α2b在作用hel細(xì)胞24h內(nèi)細(xì)胞增殖抑制率無明顯差異,p0.05,48h、72h時hel細(xì)胞的增殖均明顯受到抑制,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。并且隨著ifn-α2b作用時間的延長以及藥物劑量的增加,抑制率也逐漸升高(p0.05)。4流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:不同濃度(0.5×104u/l、1×104u/l、3×104u/l、5×104u/l)ifn-α2b作用于hel細(xì)胞48h后,對照組細(xì)胞的凋亡率為(0.51±0.05)%,實(shí)驗(yàn)組各組細(xì)胞凋亡率分別為(1.76±0.25)%,(2.51±0.39)%,(15.02±1.29)%,(20.71±2.54)%。與對照組相比,ifn-α2b處理組hel細(xì)胞的凋亡率明顯增加,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。隨著ifn-α2b濃度的增加,hel細(xì)胞凋亡率隨之上升(p0.05)。5transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:應(yīng)用0.5×104u/l濃度的ifn-α2b處理hel細(xì)胞,24h后顯微鏡下觀察漏出至下室細(xì)胞數(shù)目為(52.93±7.51)明顯低于對照組(77.39±6.140)(p0.05)。(cck-8結(jié)果顯示低濃度ifn-α2b作用于hel細(xì)胞后24h對hel細(xì)胞無明顯增殖抑制作用,故選用0.5×104u/l濃度的ifn-α2b)6半定量pcr檢測顯示:ifn-α2b作用于hel細(xì)胞48h后,對照組和不同濃度ifn-α2b(0.5×104u/l、1×104u/l、3×104u/l、5×104u/l)處理組hel細(xì)胞jak2mrna相對表達(dá)水平(條帶相對灰度)分別為(1.354±0.099)、(1.271±0.103)、(0.857±0.091)、(0.443±0.212)、(0.232±0.176)。cox-2mrna相對表達(dá)水平(條帶相對灰度)分別為(1.552±0.122)、(1.424±0.193)、(0.912±0.075)、(0.343±0.022)、(0.109±0.016)。β-actin mRNA表達(dá)水平在各組中無明顯差異。與對照組相比較,IFN-α2b處理HEL細(xì)胞系48h后JAK2及COX-2的mRNA表達(dá)均明顯降低(P0.05),并隨IFN-α2b的濃度增加而進(jìn)行性減低。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果顯示,IFN-α2b能下調(diào)HEL細(xì)胞中JAK2、COX-2 mRNA的表達(dá)水平。7 Western blot檢測顯示:IFN-α2b作用于HEL細(xì)胞48h后,空白對照組和不同濃度IFN-α2b(0.5×104U/L、1×104U/L、3×104U/L、5×104U/L)處理組HEL細(xì)胞p-JAK2蛋白相對表達(dá)水平(條帶相對灰度)分別為(2.504±0.256)、(2.551±0.219)、(1.857±0.159)、(1.032±0.127)、(0.703±0.076)。COX-2蛋白條帶相對灰度分別為(1.241±0.109)、(1.301±0.153)、(0.809±0.063)、(0.351±0.045)、(0.139±0.022)。β-actin蛋白表達(dá)水平在各組中無明顯差異。IFN-α2b處理組與空白對照組相比p-JAK2、COX-2蛋白的表達(dá)均受到抑制(P0.05)。且隨著藥物濃度的增加,2種蛋白表達(dá)量有減少趨勢,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果顯示,IFN-α2b能下調(diào)HEL細(xì)胞中p-JAK2、COX-2蛋白的表達(dá)水平。結(jié)論:1 JAK2V617F陽性的初治組MPN患者p-JAK2、COX-2表達(dá)水平及MVD均高于對照組及治療組,IFN-α2b可明顯降低MPN患者p-JAK2、COX-2及MVD表達(dá)水平。2體外應(yīng)用IFN-α2b具有明顯抑制HEL細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)其凋亡的作用,并隨著IFN-α2b濃度的增加HEL細(xì)胞增殖抑制率及凋亡率逐漸升高。3體外應(yīng)用IFN-α2b對HEL細(xì)胞遷移有明顯抑制作用。4體外應(yīng)用IFN-α2b能下調(diào)HEL細(xì)胞JAK2、COX-2 mRNA及其p-JAK2、COX-2蛋白的表達(dá)水平,并隨IFN-α2b的濃度增加而進(jìn)行性減低。
【關(guān)鍵詞】：干擾素-α2b 骨髓增殖性腫瘤 COX-2 微血管密度 人紅白血病HEL細(xì)胞系
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.3
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-15
• 英文縮寫15-16
• 前言16-17
• 材料與方法17-30
• 結(jié)果30-33
• 附圖33-37
• 附表37-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述47-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59-60
• 個人簡歷60-61

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賀光照;增殖性疤痕組織的病理改變[J];重慶醫(yī)藥;1992年02期

2 應(yīng)文魁，，夏雋，王志高，張丹萍;瘢痕止癢軟化膏治療增殖性瘢痕76例[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;1994年12期

3 張大江,肖現(xiàn)民,陳蓮,周麗君;兒童先天性膽管擴(kuò)張癥膽囊粘膜增殖性變化觀察[J];肝膽外科雜志;1998年04期

4 陳仲本,利天增,伍慧勤,宋來晶,劉小星,侯惠亮;增殖性瘢痕色度測量方法的研究[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2004年02期

5 李光早;疤痕疙瘩和增殖性疤痕[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1993年03期

6 Tung T.-H.;Lee F.-L.;張少娟;;中國臺灣金門地區(qū)2型糖尿病患者的非增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變的人群研究[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(眼科學(xué)分冊);2006年08期

7 任媛媛;張凌巖;李英;;骨髓增殖性腫瘤分子靶向治療策略[J];新醫(yī)學(xué);2012年05期

8 陳仲本,利天增,伍慧勤,劉小星,唐敏然,宋來晶,譚潤初;燒傷后增殖性瘢痕硬度測量的研究[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2002年02期

9 齊錫淼;;增殖性胍絡(luò)膜炎一例報告[J];安醫(yī)學(xué)報;1959年03期

10 楊遠(yuǎn)濱;免疫因素與增殖性瘢痕[J];中國康復(fù)理論與實(shí)踐;1995年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 洪寶順;林才;曹國洲;盧才教;;低溫冷敷防治燒傷早期增殖性疤痕[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國燒傷外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

2 葉仰蓬;張穎;;市場需求與重慶都市游特色紀(jì)念品開發(fā)[A];科學(xué)發(fā)展觀與區(qū)域旅游開發(fā)研究——第十屆全國區(qū)域旅游開發(fā)學(xué)術(shù)研討會文選[C];2004年

3 朱福婺;;大劑量玄參組方治療非增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變(DR)臨床觀察[A];第十一次全省中、西醫(yī)眼科學(xué)術(shù)交流會學(xué)術(shù)論文集[C];2012年

4 李平;;針、灸配合推拿治療增殖性脊柱炎療效觀察[A];中國針灸學(xué)會第六屆全國中青年針灸推拿學(xué)術(shù)交流暨針灸學(xué)科發(fā)展與建設(shè)研討會論文匯編[C];2004年

5 汪建國;周柱亮;潘濤;楊琪;;70例膜增殖性腎炎的臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

6 丁一;高麗;徐媛媛;王莉莉;馬超;靖_g;王全順;高春記;于力;;多重巢式RT-PCR對骨髓增殖性腫瘤中8種異�；虻目焖贆z測[A];第13屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

7 李林;葉朝陽;;45例原發(fā)性膜增殖性腎炎的臨床與病理分析[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

8 關(guān)明;;骨髓增殖性腫瘤的分子標(biāo)志物及其應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

9 薛志艷;王順章;崔海濱;崔秀榮;;B超對增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變的價值[A];第九屆全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 危成筠;陳香美;張燕萍;;腎樂得治療系膜增殖性腎炎臨床觀察[A];第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2000年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 記者 付東紅 李天舒;骨髓增殖性腫瘤研究獲突破[N];健康報;2012年

2 費(fèi)究田;糖尿病視網(wǎng)膜病變?nèi)绾沃蝃N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2008年

3 楊春;肺結(jié)核怎樣算治愈[N];江蘇科技報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 全世建;豬苓湯對系膜增殖性腎炎作用機(jī)理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2000年

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1 趙亞玲;IFN-α2b對JAK2V617F陽性骨髓增殖性腫瘤COX-2及血管新生的影響[D];承德醫(yī)學(xué)院;2016年

2 韓金棟;血管內(nèi)皮生長因子在增殖性玻璃體視網(wǎng)膜疾病發(fā)病機(jī)制中作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

3 鄭嵐;骨髓增殖性腫瘤JAK2基因V617F點(diǎn)突變的檢測及臨床意義[D];吉林大學(xué);2010年

4 毛丹娜;增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血漿和房水脂聯(lián)素水平的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

5 邱立丹;骨髓增殖性腫瘤患者JAK2V617F點(diǎn)突變檢測的臨床意義[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：IFN-α2b對JAK2V617F陽性骨髓增殖性腫瘤COX-2及血管新生的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：434422