【目的】通過統(tǒng)計分析MAP4K4在食管鱗癌中的表達情況與臨床病理特征以及預(yù)后情況之間聯(lián)系,進一步用體外實驗揭示MAP4K4表達改變對食管鱗癌細胞增殖、凋亡水平以及遷移、侵襲能力的影響及其分子機制,探討MAP4K4蛋白作為食管鱗癌患者靶向治療潛在位點和預(yù)后判斷的潛在價值�！痉椒ā�(1)基于生物信息學(xué)通過GEO數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計分析食管鱗癌中MAP4K4表達情況,提取MAP4K4數(shù)據(jù),標(biāo)準(zhǔn)化后統(tǒng)計分析;收集55對食管鱗癌患者癌與癌旁正常組織,通過免疫組化的方法來檢測組織中MAP4K4的表達情況,并分析MAP4K4表達量與患者臨床病理特征及預(yù)后之間聯(lián)系;WesternBlotting法對比檢測正常食管上皮細胞系Het-1a與食管鱗癌細胞系TE-1、ECA-109中MAP4K4的表達差異;(2)在利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK-293T細胞以及PEG沉淀法包裝、濃縮慢病毒后,選取MAP4K4表達較高的食管鱗癌ECA-109細胞系進行慢病毒轉(zhuǎn)染敲低;熒光顯微鏡觀察陽性細胞率,用流式分選出GFP表達陽性的細胞;通過Western Blotting檢測和評估敲低處理前后細胞中MAP4K4的表達改變;(3)細胞計數(shù)法及克...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
第一章 緒論
    1.1 食管鱗癌
        1.1.1 食管鱗癌的診斷
        1.1.2 食管鱗癌的治療
    1.2 MAP4K4
        1.2.1 MAP4K4 概述
        1.2.2 MAP4K4 與腫瘤
    1.3 研究目的、實驗方法、實驗方案以及意義
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 實驗方法
        1.3.3 實驗方案
        1.3.4 研究意義
第二章 MAP4K4 在食管鱗癌組織、細胞中的表達情況
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗所需組織、細胞
        2.1.2 主要試劑和材料
        2.1.3 主要儀器和設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 芯片數(shù)據(jù)的獲取
        2.2.2 免疫組織化學(xué)
        2.2.3 細胞培養(yǎng)
        2.2.4 蛋白免疫印跡實驗(Western Blotting)
        2.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 GEO數(shù)據(jù)庫中MAP4K4 在食管癌與正常食管中的表達情況
        2.3.2 MAP4K4 在食管鱗癌與癌旁組織中的表達情況
        2.3.3 MAP4K4 表達與病理特征間的關(guān)系
        2.3.4 MAP4K4 在食管鱗癌中的表達與預(yù)后的相關(guān)性
        2.3.5 MAP4K4 在食管鱗癌細胞系中的表達
    2.4 討論
第三章 MAP4K4 對食管鱗癌細胞增殖、遷移及凋亡的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗所需細胞及質(zhì)粒
        3.1.2 主要實驗材料和試劑
        3.1.3 主要實驗儀器和設(shè)備
    3.2 實驗主要方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 慢病毒包裝及感染ECA-109 細胞
        3.2.3 MAP4K4 敲低效果的測定
        3.2.4 臺盼藍染色法分析細胞增殖
        3.2.5 克隆形成實驗
        3.2.6 劃痕實驗
        3.2.7 Transwell實驗
        3.2.8 使用血清刺激細胞激活信號通路
        3.2.9 流式分析檢測細胞凋亡情況(Annexin V-PI雙染法)
        3.2.10 使用Western Blotting檢測細胞放療前后凋亡相關(guān)蛋白
        3.2.11 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 MAP4K4 穩(wěn)定敲低細胞株的構(gòu)建
        3.3.2 穩(wěn)定敲低MAP4K4 的鑒定
        3.3.3 MAP4K4 對細胞增殖的影響
        3.3.4 MAP4K4 對細胞遷移侵襲的影響
        3.3.5 MAP4K4 對細胞凋亡的影響
    3.4 討論
第四章 MAP4K4 激活MAPK通路及NF-κB通路
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗所需細胞
        4.1.2 主要實驗材料和試劑
        4.1.3 主要實驗儀器和設(shè)備
    4.2 實驗主要方法
        4.2.1 使用血清刺激激活信號通路
        4.2.2 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 MAP4K4 通過激活MAPK通路促進細胞增殖與遷移
        4.3.2 MAP4K4 通過TAK1 激活NF-κB通路發(fā)揮抗凋亡作用
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：4001857