本文關鍵詞：慢病毒介導反義CK13基因對鼻咽癌移植瘤放療前后的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目 的]分析慢病毒介導反義CK13基因對裸鼠皮下鼻咽癌移植瘤放療前后細胞周期及凋亡的影響,論證反義CK13基因在鼻咽癌治療中有降敏作用,為CK13基因在鼻咽癌治療中的作用提供實驗基礎。[方 法]本實驗先培養(yǎng)細胞,再進行動物實驗。動物實驗分成O、H兩組來進行。1、含目的基因NPC動物模型O組(A1：HNE1細胞；B1：轉染空載體HNE1細胞；C1：轉染anti-CK13a的HNE1細胞；D1：轉染anti-CK13b的HNE1細胞)。2、NPC動物模型局部注射質粒H組(A2：對照組,注射生理鹽水；B2:空質粒組,注射空慢病毒質粒；C2:反義CK13a組,注射反義CK13a慢病毒質粒；D2：反義CK13b組,注射反義CK13b慢病毒質粒)。3、放療,并測量放療前后腫瘤體積。4、處死小鼠,并取荷瘤小鼠腫瘤組織予以HE、Western blot、PCR和Tunel等檢測。5、結果進行統計學分析。[結 果]1、實驗期間所有裸鼠無死亡情況,存活率為100%；種瘤后腋下均形成明顯肉眼可見的移植瘤,成瘤率為100%。兩組移植瘤病檢顯示均呈現低分化鱗癌。2、通過計算瘤體體積,我們發(fā)現實驗組(C1、D1、C2、D2)腫瘤生長體積較對照組(A1、A2)、空載體組(B1、B2)明顯增大,差異具有統計學意義(P0.05)。3、檢測細胞周期發(fā)現,A1、A2組和B1、B2組均無G1期阻滯,出現短暫S期阻滯,有明顯的G2/M期阻滯；而C1、C2組和D1、D2組與A1、A2和B1、B2兩組相比,S期阻滯沒有顯著變化,但G2/M期阻滯峰值明顯增強,阻滯時間延長,有極顯著的統計學意義(P0.05)。4、Tnuel檢測結果顯示,A1、B1組的癌組織凋亡率分別為46.52±5.55%和45.30±9.10%,兩組相比無顯著性差異(P0.05)；而C1組和D1組的癌組織中凋亡率分別為19.48±2.89%和26.08±11.67%，兩組相比無顯著性差異(P0.05)。C1、D1組與A1、B1組比較癌組織凋亡率明顯下降(P0.05)。在H組中,我們發(fā)現了同樣的趨勢。5、Westernblotting檢測結果顯示,放射后A1、A2組和B1、B2組中caspase-3和PARP二者的剪切體表達水平明顯升高,而反義CK13處理組(C1、C2組和D1、D2組)剪切體的水平較對照組(A1、A2組和B1、B2組)的表達水平顯著降低,差異具有統計學意義(P0.05)。6、RT-qPCR檢測細胞周期信號通路相關因子mRNA水平的變化,結果顯示CK13可能與ATM和Chk2的下游信號因子通路密切相關,并且能夠調控Cdc25c進行讓鼻咽癌在輻射條件下阻滯于G2/M期。[結論]反義CK13基因能夠顯著降低鼻咽癌HNE1細胞株的放射敏感性,其作用機制可能通過延長細胞周期及減少細胞凋亡來降低鼻咽癌HNE1細胞的放射敏感性,間接證明CK13基因能夠提高鼻咽癌HNE1細胞的放射敏感性；同時我們還發(fā)現CK13基因可通過調控Cdc25c信號通路使鼻咽癌在輻射條件下阻滯于G2/M期,為CK13基因成為NPC治療的靶向基因提供實驗依據。
【關鍵詞】：細胞角蛋白13基因的反義寡核苷酸 鼻咽癌 細胞周期 凋亡 放射敏感性
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 縮略詞表(以字母順序排列)5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-36
• 結果36-47
• 討論47-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-56
• 綜述56-63
• 參考文獻60-63
• 攻讀學位期間獲得的學術成果63-64
• 致謝64

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本文編號：429704