慢病毒介導(dǎo)反義CK13基因?qū)Ρ茄拾┮浦擦龇暖熐昂蟮挠绊?/H1>
發(fā)布時間：2017-06-07 17:07
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【摘要】：[目 的]分析慢病毒介導(dǎo)反義CK13基因?qū)β闶笃は卤茄拾┮浦擦龇暖熐昂蠹?xì)胞周期及凋亡的影響,論證反義CK13基因在鼻咽癌治療中有降敏作用,為CK13基因在鼻咽癌治療中的作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。[方 法]本實(shí)驗(yàn)先培養(yǎng)細(xì)胞,再進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)。動物實(shí)驗(yàn)分成O、H兩組來進(jìn)行。1、含目的基因NPC動物模型O組(A1：HNE1細(xì)胞；B1：轉(zhuǎn)染空載體HNE1細(xì)胞；C1：轉(zhuǎn)染anti-CK13a的HNE1細(xì)胞；D1：轉(zhuǎn)染anti-CK13b的HNE1細(xì)胞)。2、NPC動物模型局部注射質(zhì)粒H組(A2：對照組,注射生理鹽水；B2:空質(zhì)粒組,注射空慢病毒質(zhì)粒；C2:反義CK13a組,注射反義CK13a慢病毒質(zhì)粒；D2：反義CK13b組,注射反義CK13b慢病毒質(zhì)粒)。3、放療,并測量放療前后腫瘤體積。4、處死小鼠,并取荷瘤小鼠腫瘤組織予以HE、Western blot、PCR和Tunel等檢測。5、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。[結(jié) 果]1、實(shí)驗(yàn)期間所有裸鼠無死亡情況,存活率為100%；種瘤后腋下均形成明顯肉眼可見的移植瘤,成瘤率為100%。兩組移植瘤病檢顯示均呈現(xiàn)低分化鱗癌。2、通過計算瘤體體積,我們發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組(C1、D1、C2、D2)腫瘤生長體積較對照組(A1、A2)、空載體組(B1、B2)明顯增大,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn),A1、A2組和B1、B2組均無G1期阻滯,出現(xiàn)短暫S期阻滯,有明顯的G2/M期阻滯；而C1、C2組和D1、D2組與A1、A2和B1、B2兩組相比,S期阻滯沒有顯著變化,但G2/M期阻滯峰值明顯增強(qiáng),阻滯時間延長,有極顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、Tnuel檢測結(jié)果顯示,A1、B1組的癌組織凋亡率分別為46.52±5.55%和45.30±9.10%,兩組相比無顯著性差異(P0.05)；而C1組和D1組的癌組織中凋亡率分別為19.48±2.89%和26.08±11.67%，兩組相比無顯著性差異(P0.05)。C1、D1組與A1、B1組比較癌組織凋亡率明顯下降(P0.05)。在H組中,我們發(fā)現(xiàn)了同樣的趨勢。5、Westernblotting檢測結(jié)果顯示,放射后A1、A2組和B1、B2組中caspase-3和PARP二者的剪切體表達(dá)水平明顯升高,而反義CK13處理組(C1、C2組和D1、D2組)剪切體的水平較對照組(A1、A2組和B1、B2組)的表達(dá)水平顯著降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6、RT-qPCR檢測細(xì)胞周期信號通路相關(guān)因子mRNA水平的變化,結(jié)果顯示CK13可能與ATM和Chk2的下游信號因子通路密切相關(guān),并且能夠調(diào)控Cdc25c進(jìn)行讓鼻咽癌在輻射條件下阻滯于G2/M期。[結(jié)論]反義CK13基因能夠顯著降低鼻咽癌HNE1細(xì)胞株的放射敏感性,其作用機(jī)制可能通過延長細(xì)胞周期及減少細(xì)胞凋亡來降低鼻咽癌HNE1細(xì)胞的放射敏感性,間接證明CK13基因能夠提高鼻咽癌HNE1細(xì)胞的放射敏感性；同時我們還發(fā)現(xiàn)CK13基因可通過調(diào)控Cdc25c信號通路使鼻咽癌在輻射條件下阻滯于G2/M期,為CK13基因成為NPC治療的靶向基因提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞角蛋白13基因的反義寡核苷酸 鼻咽癌 細(xì)胞周期 凋亡 放射敏感性
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.63
【目錄】： - 縮略詞表(以字母順序排列)5-7
- 中文摘要7-9
- 英文摘要9-12
- 前言12-15
- 材料與方法15-36
- 結(jié)果36-47
- 討論47-50
- 結(jié)論50-51
- 參考文獻(xiàn)51-56
- 綜述56-63
- 參考文獻(xiàn)60-63
- 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果63-64
- 致謝64
【相似文獻(xiàn)】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 汪碧瓊;陶華林;楊樣;丁銀環(huán);;裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型體內(nèi)差異表達(dá)蛋白的檢測[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年15期
2 吳四海;俞晨杰;;鼻咽癌移植瘤動物模型的建立及其腫瘤生物學(xué)特性觀察[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年18期
3 謝瑩;黃光武;韋正波;張哲;溫文勝;;5-ALA光動力療法治療裸鼠鼻咽癌移植瘤的療效觀察[J];中國激光醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期
4 袁建偉;馮彥林;冼偉均;范凌霄;賀小紅;袁白虹;黃克敏;蘇少弟;劉艷;;臨床PET-CT在裸鼠鼻咽癌移植瘤動物模型中的應(yīng)用[J];解剖學(xué)研究;2009年05期
5 曹世龍,王振華,姚偉強(qiáng),黃抗美,李棟良,李煥蓉,蔣娉婷,張鳳坤,沈瑾,周決,倪洪珍,沈曉嵐;照射后裸鼠人體鼻咽癌移植瘤(NPC—837)的生長延遲[J];中國放射腫瘤學(xué);1990年03期
6 任均田，梁維佳，李峰，謝春霖;單克隆抗體BAC5在低分化鼻咽癌移植瘤的分布研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1996年03期
7 楊洪斌;覃綱;李祖茂;徐寧;文艷君;梁傳余;;HNP1基因轉(zhuǎn)染對裸鼠鼻咽癌移植瘤生長影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2008年03期
8 閔玲,周克元,梁統(tǒng),張月飛;Bcl-xl反義寡核苷酸對裸鼠人鼻咽癌移植瘤抑制作用的研究[J];中華腫瘤雜志;2004年01期
9 張磊;刁鵬;黃建鳴;李濤;查曉;郎錦義;;放射線聯(lián)合人血管內(nèi)皮生長抑素對HNE1鼻咽癌移植瘤生長抑制作用[J];腫瘤預(yù)防與治療;2008年01期
10 杜彩文,李德銳,林英城,吳名耀;三氧化二砷治療Scid小鼠鼻咽癌移植瘤的初步實(shí)驗(yàn)研究[J];腫瘤防治雜志;2002年04期
中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條
1 周菊英;徐曉婷;秦頌兵;涂_g;;人重組血管內(nèi)皮抑素對裸鼠皮下鼻咽癌移植瘤放射增敏的實(shí)驗(yàn)研究[A];2010’全國腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年
2 楊洪斌;;人防御素HNP-1基因轉(zhuǎn)染對裸鼠鼻咽癌移植瘤生長影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2007年
3 鐘興;徐浩;弓健;郭斌;;擴(kuò)散加權(quán)磁共振成像早期評價hNIS轉(zhuǎn)染鼻咽癌移植瘤~(131)I治療效果的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2011年
4 徐婧;邱元正;唐瑤云;肖健云;田勇泉;趙素萍;;VP3基因?qū)Ρ茄拾┮浦擦鲆至鲂?yīng)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2007年
5 張磊;黃建鳴;刁鵬;查曉;李濤;郎錦義;;放射線聯(lián)合人血管內(nèi)皮生長抑素對HNE1鼻咽癌移植瘤生長的抑制作用[A];2007第六屆全國放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年
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1 苗春雨;慢病毒介導(dǎo)反義CK13基因?qū)Ρ茄拾┮浦擦龇暖熐昂蟮挠绊慬D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年
2 鄭怡;一種帶新型修飾配體的金納米桿的組織分布和急性毒性試驗(yàn)及其在紅外熱療輔助下對鼻咽癌移植瘤抑制作用的體內(nèi)研究[D];浙江大學(xué);2014年
3 張艷玲;拓?fù)涮婵祵Ρ茄拾┮浦擦鰰r辰放射增敏作用的機(jī)制研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2012年
4 李金利;重組人血管內(nèi)皮抑素對裸鼠鼻咽癌移植瘤放射增敏效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2010年
5 錢瑩;靶向納米造影劑C225-USPIO標(biāo)記裸鼠鼻咽癌移植瘤MR成像研究[D];華中科技大學(xué);2011年
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本文編號：429704
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【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞角蛋白13基因的反義寡核苷酸 鼻咽癌 細(xì)胞周期 凋亡 放射敏感性
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
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本文編號：429704
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