研究背景和目的:腫瘤細(xì)胞的高增殖能力是結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良的主要原因之一。研究表明TAB3和PIM-1在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中,特別是在促進(jìn)腫瘤的增殖中起重要作用,然而TAB3和PIM-1在結(jié)直腸癌中的關(guān)系及它們在促進(jìn)結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用仍不清楚。本研究擬先檢測結(jié)直腸癌組織中TAB3和PIM-1的表達(dá),并對其相關(guān)性進(jìn)行分析;其次通過體外和體內(nèi)研究明確TAB3通過調(diào)控PIM-1表達(dá)對結(jié)直腸癌增殖生物學(xué)特性的影響;最后探討TAB3調(diào)控PIM-1的分子生物學(xué)機(jī)制。方法:1、運(yùn)用免疫組織化學(xué)、qRT-PCR和Western blot方法檢測180例結(jié)直腸癌患者癌組織、癌旁組織中TAB3和PIM-1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平,并利用散點圖分析兩者的相關(guān)性。通過qRT-PCR和Western blot的方法檢測六種不同結(jié)直腸癌細(xì)胞株中TAB3和PIM-1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平,并觀察兩者的相關(guān)性;2、降低結(jié)直腸癌細(xì)胞中TAB3的表達(dá),通過qRT-PCR和Western blot方法檢測細(xì)胞中PIM-1 mRNA和蛋白表達(dá)變化,然后利用平板克隆和EDU兩種實驗觀察正常表達(dá)TAB3及沉默TAB3...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
前言
第1章 結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞中TAB3、PIM-1的表達(dá)及其相關(guān)性分析
    引言
    材料和方法
        1 材料
        2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3 蛋白免疫印跡反應(yīng)(Western blot)
        4 RNA的提取及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)
        5 ElivisionTMplus免疫組織化學(xué)法
        6 統(tǒng)計學(xué)分析
    結(jié)果
        1 在結(jié)直腸癌組織中檢測TAB3與PIM-1的表達(dá)情況
        2 TAB3和PIM-1基因在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析
        3 結(jié)直腸癌細(xì)胞株中TAB3和PIM-1的表達(dá)情況
    討論
    結(jié)論
第2章 TAB3調(diào)控PIM-1表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的影響
    引言
    第一節(jié) 通過體外和體內(nèi)實驗觀察沉默TAB3的表達(dá)對PIM-1表達(dá)及結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的影響
        材料與方法
            1 材料
            2 細(xì)胞培養(yǎng)
            3 shTAB3質(zhì)粒的構(gòu)建
            4 RNA的提取及實時熒光定量PCR
            5 蛋白免疫印跡反應(yīng)(Western blot)
            6 平板克隆實驗步驟
            7 EDU實驗步驟
            8 結(jié)直腸癌穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建
            9 動物實驗
            10 統(tǒng)計學(xué)分析
            11 TAB3 干擾質(zhì)粒的篩選
            12 降低結(jié)直腸癌細(xì)胞中 TAB3 的表達(dá),觀察 PIM-1 的表達(dá)變化
    第二節(jié) PIM-1是TAB3調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的關(guān)鍵效應(yīng)分子
        1 材料
        2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3 pcDNA3.1(+)-TAB3、pcDNA3.1(+)-PIM-1及shPIM-1重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4 RNA的提取及實時熒光定量PCR
        5 蛋白免疫印跡反應(yīng)(Western blot)
        6 平板克隆實驗步驟
        7 EDU實驗步驟
        8 動物實驗
        9 統(tǒng)計學(xué)分析
    結(jié)果
        1.PIM-1干擾質(zhì)粒的篩選
        2.HA-PIM1雙His-TAB3質(zhì)粒的表達(dá)
        3.PIM-1是TAB3介導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的關(guān)鍵分子
    討論
    結(jié)論
第3章 TAB3調(diào)控PIM-1表達(dá)機(jī)制的研究
    引言
    材料和方法
        1 材料
        2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3. shTAK1質(zhì)粒的構(gòu)建
        4 RNA的提取及實時熒光定量PCR
        5 蛋白免疫印跡反應(yīng)(Western blot)
        6 免疫組織化學(xué)(IHC)
        7 熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        8 激光共聚焦免疫熒光實驗
        9 免疫共沉淀
        10 統(tǒng)計學(xué)分析
    結(jié)果
        1.TAK1干擾質(zhì)粒的篩選
        2. TAB3通過STAT3通路調(diào)控PIM-1的表達(dá)進(jìn)而調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖
        3. 在結(jié)直腸癌組織中檢測TAB3與p-STAT3(Tyr705)蛋白的表達(dá)情況
        4. TAB3通過與STAT3直接結(jié)合而非JAK2調(diào)節(jié)STAT3活性
        5. TAB3通過形成TAB3-TAK1復(fù)合物激活STAT3信號通路
    討論
    結(jié)論
全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：4029716