背景:基于表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突變的靶向治療已經逐漸成為非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)綜合治療的一部分,臨床迫切需要EGFR基因突變檢測技術以確定靶向治療敏感患者,并監(jiān)測其耐藥后新出現(xiàn)的基因突變,以提供個體化診療及臨床決策指導。與組織活檢相比,循環(huán)中游離DNA(cell-free DNA,cfDNA)與腫瘤所包含基因突變信息具有高度一致性,能實時、全面地反映腫瘤全部的遺傳學信息,因此目前血液已成為EGFR突變檢測常規(guī)檢材。唾液同樣提供了高質量的基因組DNA,作為cfDNA來源與血液相媲美,由于取材方便、無創(chuàng)且避免血源性感染等獨特優(yōu)勢有望成為EGFR突變檢測理想的補充檢材。但體液中cfDNA含量少且腫瘤突變頻率低,EGFR突變的檢測需要更加敏感的方法。絕對定量的微滴式數(shù)字PCR(droplet digital PCR,ddRCR)技術具有更高的準確性,更高的分辨率和更高的靈敏度,可實現(xiàn)對cfDNA低頻率突變的檢測,滿足目前臨床上對于靶向治療EGFR基因突變的檢測...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
第1章 基于ddPCR的非小細胞肺癌EGFR基因突變檢測技術的建立
    1.1 實驗材料
        1.1.1人肺腺癌細胞株
        1.1.2 試劑及耗材
        1.1.3 設備
    1.2 實驗方法
        1.2.1 人肺腺癌細胞株培養(yǎng)
        1.2.2 人肺腺癌細胞株基因組DNA的提取超碎
        1.2.3 探針及引物的設計與合成
        1.2.4 微滴式數(shù)字PCR實驗
    1.3 實驗結果
        1.3.1 基于ddPCR的EGFR基因突變檢測體系退火溫度的優(yōu)化
        1.3.2 基于ddPCR的EGFR基因突變檢測技術靈敏度分析
        1.3.3 基于ddPCR的EGFR基因突變檢測技術的應用
    1.4 討論
    1.5 本章小結
    附圖表
        附圖
        附表
第2章 基于ddPCR的EGFR-T790M突變檢測技術的性能驗證
    2.1 實驗材料
        2.1.1 臨床血漿和胸水樣本
        2.1.2 試劑及耗材
        2.1.3 設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 血漿和胸水樣本循環(huán)DNA的提取
        2.2.2 基于ddPCR的EGFR-T790M突變檢測分析
        2.2.3 統(tǒng)計分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 線性范圍
        2.3.2 空白檢測限
        2.3.3 分析特異度
        2.3.4 分析靈敏度
        2.3.5 重復性
        2.3.6 批間精密度
        2.3.7 準確度
    2.4 討論
    2.5 本章小結
    附圖表
        附圖
        附表
第3章 非小細胞肺癌唾液cfDNA檢測的應用
    3.1 實驗材料
        3.1.1 臨床血漿和唾液樣本
        3.1.2 試劑及耗材
        3.1.3 設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 血漿和唾液樣本循環(huán)DNA的提取
        3.2.2 基于qPCR的cfDNA含量測定
        3.2.3 基于ddPCR的cfDNA-EGFR基因突變檢測分析
        3.2.4 統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 唾液cfDNA含量在NSCLC診斷中的可行性研究
        3.3.2 唾液與血液cfDNA-EGFR突變檢測的一致性分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結
    附圖表
        附圖
        附表
總結與展望
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表及錄用學術論文
學位論文評閱及答辯情況表



本文編號：3999291