背景:基于表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突變的靶向治療已經(jīng)逐漸成為非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)綜合治療的一部分,臨床迫切需要EGFR基因突變檢測(cè)技術(shù)以確定靶向治療敏感患者,并監(jiān)測(cè)其耐藥后新出現(xiàn)的基因突變,以提供個(gè)體化診療及臨床決策指導(dǎo)。與組織活檢相比,循環(huán)中游離DNA(cell-free DNA,cfDNA)與腫瘤所包含基因突變信息具有高度一致性,能實(shí)時(shí)、全面地反映腫瘤全部的遺傳學(xué)信息,因此目前血液已成為EGFR突變檢測(cè)常規(guī)檢材。唾液同樣提供了高質(zhì)量的基因組DNA,作為cfDNA來(lái)源與血液相媲美,由于取材方便、無(wú)創(chuàng)且避免血源性感染等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)有望成為EGFR突變檢測(cè)理想的補(bǔ)充檢材。但體液中cfDNA含量少且腫瘤突變頻率低,EGFR突變的檢測(cè)需要更加敏感的方法。絕對(duì)定量的微滴式數(shù)字PCR(droplet digital PCR,ddRCR)技術(shù)具有更高的準(zhǔn)確性,更高的分辨率和更高的靈敏度,可實(shí)現(xiàn)對(duì)cfDNA低頻率突變的檢測(cè),滿足目前臨床上對(duì)于靶向治療EGFR基因突變的檢測(cè)...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
前言
第1章 基于ddPCR的非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)技術(shù)的建立
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1人肺腺癌細(xì)胞株
        1.1.2 試劑及耗材
        1.1.3 設(shè)備
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 人肺腺癌細(xì)胞株培養(yǎng)
        1.2.2 人肺腺癌細(xì)胞株基因組DNA的提取超碎
        1.2.3 探針及引物的設(shè)計(jì)與合成
        1.2.4 微滴式數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)
    1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.3.1 基于ddPCR的EGFR基因突變檢測(cè)體系退火溫度的優(yōu)化
        1.3.2 基于ddPCR的EGFR基因突變檢測(cè)技術(shù)靈敏度分析
        1.3.3 基于ddPCR的EGFR基因突變檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用
    1.4 討論
    1.5 本章小結(jié)
    附圖表
        附圖
        附表
第2章 基于ddPCR的EGFR-T790M突變檢測(cè)技術(shù)的性能驗(yàn)證
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 臨床血漿和胸水樣本
        2.1.2 試劑及耗材
        2.1.3 設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 血漿和胸水樣本循環(huán)DNA的提取
        2.2.2 基于ddPCR的EGFR-T790M突變檢測(cè)分析
        2.2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 線性范圍
        2.3.2 空白檢測(cè)限
        2.3.3 分析特異度
        2.3.4 分析靈敏度
        2.3.5 重復(fù)性
        2.3.6 批間精密度
        2.3.7 準(zhǔn)確度
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
    附圖表
        附圖
        附表
第3章 非小細(xì)胞肺癌唾液cfDNA檢測(cè)的應(yīng)用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 臨床血漿和唾液樣本
        3.1.2 試劑及耗材
        3.1.3 設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 血漿和唾液樣本循環(huán)DNA的提取
        3.2.2 基于qPCR的cfDNA含量測(cè)定
        3.2.3 基于ddPCR的cfDNA-EGFR基因突變檢測(cè)分析
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 唾液cfDNA含量在NSCLC診斷中的可行性研究
        3.3.2 唾液與血液cfDNA-EGFR突變檢測(cè)的一致性分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
    附圖表
        附圖
        附表
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表及錄用學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表



本文編號(hào)：3999291