目的:結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是發(fā)病率為全球第三位的惡性腫瘤,也是致死率為第四位的惡性腫瘤。近20年來,我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率與死亡率呈逐年遞增趨勢(shì)。在初診時(shí)約有25%的患者即被診斷為晚期結(jié)直腸癌,而約50%的接受結(jié)直腸癌根治手術(shù)的早期患者也會(huì)進(jìn)展成為晚期結(jié)直腸癌。晚期結(jié)直腸癌的治療效果至今仍不能令人滿意,即使接受過化療及靶向治療,許多患者仍因疾病迅速進(jìn)展而死亡。因此,進(jìn)一步分析結(jié)直腸癌的基因組信息,發(fā)現(xiàn)并篩選出預(yù)測(cè)早期腸癌的新的生物標(biāo)志物,深入研究結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,對(duì)于改善結(jié)直腸癌的早期診治效果,降低結(jié)直腸癌的患病率與死亡率具有重要意義。P2X7受體(P2X7R)由位于人類染色質(zhì)12上的P2rx7基因編碼,有13個(gè)外顯子,編碼595個(gè)氨基酸組成的膜蛋白。它屬于P2X受體家族,該家族的成員可以被細(xì)胞外三磷酸腺苷(ATP)激活。P2X7R在不種類型的細(xì)胞中都有表達(dá),參與調(diào)節(jié)炎癥,細(xì)胞增殖和調(diào)亡,新陳代謝和吞噬作用。P2X7R在多種類型的腫瘤中都有異常改變,它與腫瘤的進(jìn)展、遷移和侵襲高度相關(guān)。大多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)P2X7R在許多腫瘤中呈高表達(dá),...

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :P2X7受體在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)及與預(yù)后轉(zhuǎn)移的關(guān)系
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對(duì)象
            2.2.1 臨床標(biāo)本及實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.2 細(xì)胞系及實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 免疫組化法檢測(cè)P2X7受體在不同的臨床標(biāo)本中的表達(dá)
            2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.3 Western-blot法檢測(cè)P2X7 受體蛋白
            2.3.4 Real-time PCR(q RT-PCR)法檢測(cè)P2X7 受體的m RNA
            2.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 P2X7R在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常結(jié)直腸組織中的表達(dá)
        3.2 P2X7R的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系
        3.3 P2X7R的表達(dá)與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系
        3.4 P2X7R表達(dá)與結(jié)直腸癌標(biāo)志物之間的聯(lián)系
        3.5 P2X7R表達(dá)與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系
        3.6 P2X7R在結(jié)直腸轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞系中的表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :體外實(shí)驗(yàn)中A438079對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及焦亡的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 研究對(duì)象及實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.1 研究對(duì)象
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 培養(yǎng)結(jié)直腸癌細(xì)胞,加入抑制劑A438079
            2.3.2 CCK-8 法檢測(cè)HCT-116、SW620 細(xì)胞增殖
            2.3.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.3.4 Transwell法檢測(cè)HCT-116、SW620 細(xì)胞的遷移與侵襲
            2.3.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HCT-116、SW620 細(xì)胞的凋亡(Annexin V-FITC/PI雙染法)
            2.3.6 Western-blot法檢測(cè)HCT-116、SW620 細(xì)胞的凋亡、焦亡通路的相關(guān)蛋白表達(dá)
            2.3.7 q RT-PCR檢測(cè)HCT-116、SW620 細(xì)胞的凋亡通路的相關(guān)基因m RNA表達(dá)
            2.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 A438079影響結(jié)直腸癌細(xì)胞的形態(tài)
        3.2 A438079抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖
        3.3 A438079抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲及遷移
            3.3.1 Transwell小室法檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲的影響
            3.3.2 Transwell法檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移的影響
            3.3.3 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移的影響
        3.4 A438079促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的凋亡
        3.5 A438079 通過Bcl-2/Caspase9/Caspase3 信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡
            3.5.1 A438079對(duì)凋亡相關(guān)蛋白的作用
            3.5.2 A438079對(duì)凋亡相關(guān)基因mRNA的作用
        3.6 A438079 通過NLRP3/Caspase1 信號(hào)通路抑制細(xì)胞焦亡
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中A438079對(duì)結(jié)直腸癌生長(zhǎng)、凋亡及焦亡的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 研究對(duì)象及實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.1 研究對(duì)象
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 建立結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620荷瘤鼠模型
            2.3.2 HE染色法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織的形態(tài)學(xué)變化
            2.3.3 TUNEL法檢測(cè)移植瘤組織的凋亡(顯色法)
            2.3.4 Western-blot法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織凋亡、焦亡通路的相關(guān)蛋白表達(dá)
            2.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 A438079能夠抑制裸鼠結(jié)直腸癌移植瘤的生長(zhǎng)
        3.2 A438079未影響荷瘤裸鼠的體重增長(zhǎng)
        3.3 A438079促進(jìn)了裸鼠結(jié)直腸癌移植瘤組織的凋亡
        3.4 A438079 通過Bcl-2/Caspase9/Caspase3 信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡
        3.5 A438079 通過NLRP3/Caspase1 信號(hào)通路抑制細(xì)胞焦亡
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3987992