發(fā)布時間：2024-05-16 03:57

　　目的研究雌激素受體(ER)α募集于p21^WAF1/CIP1啟動子區(qū)調(diào)控其轉(zhuǎn)錄活性的具體作用位點(diǎn),明確辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在調(diào)節(jié)p21^WAF1/CIP1啟動子功能中的分子機(jī)制。方法將處于對數(shù)生長期的乳腺癌MCF-7細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中饑餓24 h后,分別用20μmol/L的SAHA 0.88μL(SAHA組)、0.625 nmol/L的leptin 10μL(leptin組)處理24 h,對照組在完全型RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)將各組細(xì)胞裂解液與ERα抗體孵育,收集純化結(jié)合ERα抗體的DNA片段,應(yīng)用實(shí)時PCR法檢測p21^WAF1/CIP1啟動子區(qū)從轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)到其上游(+2^-4 000 bp)f1^f10片段的DNA相對表達(dá)量并用2-ΔΔCt法分析。結(jié)果對照組中,與ERα抗體結(jié)合的f1、f2、f8片段DNA相對表達(dá)量較f9片段高出2倍以上(P<0.01)。與對照組比較,SAHA及l(fā)eptin組f1^f<...

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng):
        1.2.2使用ERα抗體染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù) (chro-matin-immunoprecipitation, ChIP) 處理樣品:
        1.2.3 實(shí)時PCR檢測各組p21WAF1/CIP1f1^f10片段的DNA表達(dá):
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 對照組MCF-7細(xì)胞p21WAF1/CIP1啟動子區(qū)f1^f10片段ERα高功能結(jié)合位點(diǎn)的篩選
    2.2 與對照組比較SAHA組及l(fā)eptin組MCF-7細(xì)胞p21WAF1/CIP1啟動子區(qū)f1^f10片段ERα高功能結(jié)合位點(diǎn)的篩選
3 討論



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