目的:通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)尋找結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)高通量數(shù)據(jù),找出差異表達(dá)的circRNA,進(jìn)一步分析篩選出來(lái)的circARHGAP32影響結(jié)直腸癌的功能與分子機(jī)制。方法:1.基于GEO數(shù)據(jù)庫(kù)測(cè)序分析,篩選出在結(jié)直腸癌中高表達(dá)的circARHGAP32(has_circ₀024843)。2.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)驗(yàn)證circARHGAP32在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。3.收集組織樣本,包括25例正常結(jié)直腸組織與49例CRC組織,用實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR檢測(cè)circARHGAP32的表達(dá)情況。4.采用siRNA敲低細(xì)胞中circARHGAP32的表達(dá),并構(gòu)建circARHGAP32的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,通過(guò)一系列細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證circARHGAP32對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系增殖、遷移、侵襲的影響。5.用qRT-PCR檢測(cè)在敲低和過(guò)表達(dá)circARHGAP32對(duì)EGFR、KRAS、BRAF、MAPK1、MAP3K1 mRNA水平的影響,同時(shí)利用Wester...

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略語(yǔ)中英文索引
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)研究材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)研究材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)研究試劑及主要儀器
第3章 實(shí)驗(yàn)方法及步驟
    3.1 GEO高通量測(cè)序數(shù)據(jù)處理
        3.1.1 高通量測(cè)序數(shù)據(jù)的差異分析
        3.1.2 繪制熱圖
    3.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
    3.3 細(xì)胞RNA提取
    3.4 RNA濃度檢測(cè)
    3.5 逆轉(zhuǎn)錄
    3.6 PCR引物設(shè)計(jì)
    3.7 qRT-PCR檢測(cè)
    3.8 組織RNA提取及檢測(cè)
    3.9 qRT-PCR表達(dá)驗(yàn)證及沉默驗(yàn)證
    3.10 Western Blot檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 通過(guò)高通量測(cè)序數(shù)據(jù)找出具有表達(dá)差異的circRNA
    4.2 通過(guò)Morphrus網(wǎng)站繪制熱圖
    4.3 選定circARHGAP32 為目的基因
    4.4 circARHGAP32在CRC細(xì)胞系及CRC組織中高表達(dá)
    4.5 CRC細(xì)胞系中檢測(cè)siRNA靶向敲低及過(guò)表達(dá)circARHGAP32的效率
    4.6 敲低circARHGAP32 能抑制CRC細(xì)胞的增殖,過(guò)表達(dá)circARHGAP32 能促進(jìn)CRC細(xì)胞的增殖
    4.7 敲低circARHGAP32 能抑制CRC細(xì)胞的遷移、侵襲,過(guò)表達(dá)circARHGAP32 能促進(jìn)CRC細(xì)胞的遷移、侵襲
    4.8 circARHGAP32 可通過(guò)EGFR相關(guān)通路促進(jìn)CRC增殖、遷移
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者攻讀學(xué)位期間科研成果
致謝



本文編號(hào)：3946135