目的:通過GEO數(shù)據(jù)庫尋找結直腸癌(Colorectal cancer,CRC)高通量數(shù)據(jù),找出差異表達的circRNA,進一步分析篩選出來的circARHGAP32影響結直腸癌的功能與分子機制。方法:1.基于GEO數(shù)據(jù)庫測序分析,篩選出在結直腸癌中高表達的circARHGAP32(has_circ₀024843)。2.采用實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)驗證circARHGAP32在結直腸癌細胞系中的表達情況。3.收集組織樣本,包括25例正常結直腸組織與49例CRC組織,用實時熒光定量qRT-PCR檢測circARHGAP32的表達情況。4.采用siRNA敲低細胞中circARHGAP32的表達,并構建circARHGAP32的過表達質粒,通過一系列細胞功能實驗驗證circARHGAP32對結直腸癌細胞系增殖、遷移、侵襲的影響。5.用qRT-PCR檢測在敲低和過表達circARHGAP32對EGFR、KRAS、BRAF、MAPK1、MAP3K1 mRNA水平的影響,同時利用Wester...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
主要縮略語中英文索引
第1章 前言
第2章 實驗研究材料與方法
    2.1 實驗研究材料
    2.2 實驗研究試劑及主要儀器
第3章 實驗方法及步驟
    3.1 GEO高通量測序數(shù)據(jù)處理
        3.1.1 高通量測序數(shù)據(jù)的差異分析
        3.1.2 繪制熱圖
    3.2 細胞實驗
    3.3 細胞RNA提取
    3.4 RNA濃度檢測
    3.5 逆轉錄
    3.6 PCR引物設計
    3.7 qRT-PCR檢測
    3.8 組織RNA提取及檢測
    3.9 qRT-PCR表達驗證及沉默驗證
    3.10 Western Blot檢測相關蛋白的表達
第4章 實驗結果
    4.1 通過高通量測序數(shù)據(jù)找出具有表達差異的circRNA
    4.2 通過Morphrus網站繪制熱圖
    4.3 選定circARHGAP32 為目的基因
    4.4 circARHGAP32在CRC細胞系及CRC組織中高表達
    4.5 CRC細胞系中檢測siRNA靶向敲低及過表達circARHGAP32的效率
    4.6 敲低circARHGAP32 能抑制CRC細胞的增殖,過表達circARHGAP32 能促進CRC細胞的增殖
    4.7 敲低circARHGAP32 能抑制CRC細胞的遷移、侵襲,過表達circARHGAP32 能促進CRC細胞的遷移、侵襲
    4.8 circARHGAP32 可通過EGFR相關通路促進CRC增殖、遷移
第5章 討論
第6章 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者攻讀學位期間科研成果
致謝



本文編號：3946135