研究背景與目的肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一種預(yù)后較差的世界性惡性腫瘤,由于缺乏有效的HCC治療策略和患者生存率低,目前對(duì)于肝細(xì)胞癌的有效治療仍然面臨巨大的挑戰(zhàn)。因此,有必要研究新的腫瘤相關(guān)分子,為肝癌生物標(biāo)志物的開發(fā)和免疫治療提供靶點(diǎn)。腫瘤睪丸抗原(Cancer testis antigen,CTA)由于其自身的特點(diǎn),已成為一種潛在的針對(duì)各種惡性腫瘤免疫治療的臨床生物標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn)CTA在包含HCC的多種類型惡性腫瘤中表達(dá),且能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),從而參與腫瘤的轉(zhuǎn)移過程。FATE/BJ-HCC-2是利用生物信息學(xué)方法發(fā)現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的一種CT抗原基因。前期研究表明,FATE/BJ-HCC-2高表達(dá)于HCC,而在肝硬化和正常肝組織中不表達(dá)。本課題通過構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌細(xì)胞株,探討FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響,初步探索FATE/BJ-HCC-2基因表達(dá)在肝細(xì)胞癌中的生物學(xué)作用。研究方法...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑配制
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)方法
        2.2.3 Western blot方法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因在肝癌細(xì)胞系中的蛋白表達(dá)情況
        2.2.4 qRT-PCR法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因在肝癌細(xì)胞系中mRNA表達(dá)水平
        2.2.5 穩(wěn)定過表達(dá)FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.2.6 CCK8法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞體外增殖的影響
        2.2.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞體外克隆形成能力的影響
        2.2.8 劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞體外遷移能力的影響
        2.2.9 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞體外侵襲能力的影響
        2.2.10 裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 Western blot方法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因表達(dá)上調(diào)后EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)
        2.2.12 qRT-PCR法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因表達(dá)上調(diào)后EMT相關(guān)基因的表達(dá)
        2.2.13 Western blot法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因表達(dá)上調(diào)后有關(guān)信號(hào)通路分子的表達(dá)
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 FATE/BJ-HCC-2在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況
        3.1.1 Western blot方法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因的蛋白表達(dá)情況
        3.1.2 qRT-PCR法檢測(cè)FATE/BJ-HCC-2基因的mRNA表達(dá)情況
    3.2 構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌細(xì)胞株
        3.2.1 目的基因片段擴(kuò)增結(jié)果及載體線性化結(jié)果
        3.2.2 過表達(dá)FATE/BJ-HCC-2基因質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 在293T細(xì)胞中鑒定FATE/BJ-HCC-2基因的過表達(dá)效果
        3.2.4 熒光顯微鏡觀察FATE/BJ-HCC-2基因轉(zhuǎn)染Huh7、SNU449細(xì)胞結(jié)果
        3.2.5 Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Huh7、SNU449細(xì)胞中FATE/BJ-HCC-2蛋白表達(dá)情況
        3.2.6 qRT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Huh7、SNU449細(xì)胞中FATE/BJ-HCC-2 mRNA表達(dá)情況
    3.3 FATE/BJ-HCC-2基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物學(xué)功能的影響
        3.3.1 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的體外增殖能力
        3.3.2 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的體外克隆形成能力
        3.3.3 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的體外遷移能力
        3.3.4 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的體外侵襲能力
    3.4 FATE/BJ-HCC-2基因表達(dá)上調(diào)在體內(nèi)能夠促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)
    3.5 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT及其分子機(jī)制
        3.5.1 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)調(diào)控EMT相關(guān)標(biāo)志物蛋白的表達(dá)水平
        3.5.2 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)調(diào)控EMT相關(guān)標(biāo)志物mRNA的表達(dá)水平
        3.5.3 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)促進(jìn)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)
        3.5.4 FATE/BJ-HCC-2基因過表達(dá)調(diào)控肝癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 腫瘤睪丸抗原在肝細(xì)胞癌中表達(dá)的作用及其意義
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3882399