背景和目的:長鏈非編碼RNAs(long noncodingRNAs,lncRNAs)在腫瘤的起始和進(jìn)展中發(fā)揮重要作用,可能成為腫瘤診斷、預(yù)后和治療的分子標(biāo)記。本研究旨在探討食管癌(esophageal cancer,ESCA)中差異表達(dá)的lncRNA分子、尋找新的預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)記,并探討SLC2A1-AS1在食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的生物學(xué)功能及其分子機(jī)制。方法:TCGA數(shù)據(jù)庫用來分析ESCA中差異表達(dá)的lncRNA、miRNA和mRNA及其相互調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及預(yù)后相關(guān)的lncRNA。q RT-PCR檢測(cè)ESCC組織和細(xì)胞中SLC2A1-AS1、miR-378a-3p和SLC2A1的表達(dá)。熒光素酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子GLI3與SLC2A1-AS1啟動(dòng)子的相互作用。將GLI3 siRNA或pc DNA3.1-GLI3轉(zhuǎn)染ESCC細(xì)胞,采用q RT-PCR檢測(cè)GLI3和SLC2A1-AS1的表達(dá)。CCK-8、克隆形成實(shí)驗(yàn)、Ed U染色、流式細(xì)胞術(shù)和Transwell小室檢測(cè)ESCC細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的變化。Western...

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
基金項(xiàng)目
摘要
abstract
中英文縮略詞
引言
第一部分 :食管癌中l(wèi)ncRNA、miRNA和 mRNA的差異表達(dá)及l(fā)ncRNA的預(yù)后分析
    前言
    1 材料與方法
        1.1 數(shù)據(jù)下載
        1.2 數(shù)據(jù)預(yù)處理及差異表達(dá)分析
        1.3 lncRNA、miRNA及 mRNA調(diào)控關(guān)系預(yù)測(cè)
        1.4 ceRNA機(jī)制預(yù)測(cè)及網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
        1.5 ceRNA網(wǎng)絡(luò)功能預(yù)測(cè)及相關(guān)miRNA和 lncRNA功能預(yù)測(cè)
        1.6 GEO數(shù)據(jù)庫證實(shí)TCGA數(shù)據(jù)庫的有效性
        1.7 lncRNA和 mRNA在 ESCA中的相關(guān)性分析
        1.8 構(gòu)建預(yù)后相關(guān)的lncRNAs分子
    2 結(jié)果
        2.1 LncRNAs、miRNAs和 mRNAs在 ESCA中的差異表達(dá)分析
        2.2 GO和 KEGG分析ESCA中 lncRNA、miRNA和 mRNA的功能
        2.3 ESCA中 lncRNA-miRNA-mRNA軸 ceRNA網(wǎng)絡(luò)分析
        2.4 GEO數(shù)據(jù)集證實(shí)lncRNAs和 mRNAs的表達(dá)
        2.5 lncRNAs與 ESCA患者總的生存率的關(guān)系
        2.6 ESCA中 lncRNAs與 mRNAs相關(guān)性分析
    3 討論
    4 小結(jié)
第二部分 :GLI3 調(diào)控的SLC2A1-AS1 促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的糖酵解及其分子機(jī)制
    前言
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 組織標(biāo)本
        1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 主要儀器設(shè)備
        1.5 主要試劑
        1.6 主要試劑的配制
        1.7 引物序列
        1.8 探針
        1.9 動(dòng)物注射NC和 siRNA
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 TCGA和 GEO分析ESCA中基因的表達(dá)
        2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存
        2.3 qRT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)
        2.4 SLC2A1-AS1 的亞細(xì)胞定位
        2.5 pcDNA3.1-SLC2A1-AS1、pcDNA3.1-GLI3和pcDNA3.1-SLC2A1重組載體的構(gòu)建
        2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.7 q RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后ESCC細(xì)胞中基因表達(dá)
        2.8 CCK-8 法檢測(cè)ESCC細(xì)胞增殖
        2.9 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.10 Transwell檢測(cè)ESCC細(xì)胞遷移
        2.11 Transwell檢測(cè)ESCC細(xì)胞侵襲
        2.12 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.13 EdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖
        2.14 Western blot
        2.15 葡萄糖消耗量及乳酸生成量測(cè)定
        2.16 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.17 Ago2-RNA免疫共沉淀(Ago2-RNA immunoprecipitation,Ago2-RIP)
        2.18 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.19 免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)
        2.20 IHC染色結(jié)果評(píng)估
        2.21 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 SLC2A1-AS1在ESCC中的表達(dá)
        3.2 SLC2A1-AS1與ESCC臨床病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系
        3.3 轉(zhuǎn)錄因子GLI3 結(jié)合SLC2A1-AS1 的啟動(dòng)子并調(diào)控SLC2A1-AS1 的表達(dá)
        3.4 SLC2A1-AS1 調(diào)控ESCC細(xì)胞中GLI3 的表達(dá)
        3.5 SLC2A1-AS1 表達(dá)下調(diào)抑制ESCC細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        3.6 SLC2A1-AS1 表達(dá)下調(diào)抑制ESCC細(xì)胞的侵襲和EMT進(jìn)程
        3.7 SLC2A1-AS1 表達(dá)下調(diào)抑制ESCC細(xì)胞的糖酵解過程
        3.8 SLC2A1-AS1 過表達(dá)對(duì)ESCC細(xì)胞增殖和凋亡的影響
        3.9 SLC2A1-AS1 過表達(dá)促進(jìn)ESCC細(xì)胞的侵襲和EMT進(jìn)程
        3.10 SLC2A1-AS1 過表達(dá)促進(jìn)ESCC細(xì)胞的糖酵解過程
        3.11 SLC2A1-AS1在ESCC細(xì)胞中的定位
        3.12 SLC2A1-AS1對(duì)ESCC細(xì)胞中miR-378a-3p表達(dá)的影響
        3.13 miR-378a-3p和 SLC2A1 在食管鱗癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)
        3.14 miR-378a-3p表達(dá)與食管鱗癌病人臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系
        3.15 SLC2A1的表達(dá)與食管鱗癌病人臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系
        3.16 miR-378a-3p靶向調(diào)控食管鱗癌細(xì)胞中SLC2A1 的表達(dá)
        3.17 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的過表達(dá)逆轉(zhuǎn)miR-378a-3p介導(dǎo)的增殖、凋亡和侵襲能力的變化
        3.18 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的下調(diào)逆轉(zhuǎn)miR-378a-3p抑制劑介導(dǎo)的增殖、凋亡和侵襲能力的變化
        3.19 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的過表達(dá)逆轉(zhuǎn)miR-378a-3p介導(dǎo)的ESCC細(xì)胞糖酵解能力的降低
        3.20 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的下調(diào)逆轉(zhuǎn)miR-378a-3p抑制劑介導(dǎo)的ESCC細(xì)胞糖酵解能力的增強(qiáng)
        3.21 SLC2A1-AS1 體內(nèi)抑制ESCC EC9706 裸鼠移植瘤的生長
        3.22 SLC2A1-AS1 通過miR-378a-3p/SLC2A1 促進(jìn)ESCC進(jìn)展
    4 討論
    5 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 長鏈非編碼RNA在腫瘤糖代謝中作用及其研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷、碩士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3880039