目的:本研究擬篩選出針對(duì)HPV-DNA的高效通用引物,并利用該引物檢測循環(huán)HPV-DNA以進(jìn)一步探討其對(duì)于非小細(xì)胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)患者的潛在風(fēng)險(xiǎn),繼而在此基礎(chǔ)上初步探索microRNAs(miRNAs)在循環(huán)HPV-DNA陽性NSCLC患者血漿中的表達(dá),分析異常表達(dá)miRNAs對(duì)于鑒定循環(huán)HPV-DNA陽性NSCLC的潛在價(jià)值。方法:1.通過比較6對(duì)通用引物檢測9種常見型別HPV-DNA的效果,選取檢測效果最佳的通用引物用于后續(xù)循環(huán)HPV-DNA篩選的實(shí)驗(yàn)中。2.納入100例NSCLC患者,收集其外周血標(biāo)本進(jìn)行HPV-DNA檢測,再使用HPV特異性巢氏引物方法和基因測序方法對(duì)其進(jìn)行分型。3.結(jié)合患者的臨床和病理資料,對(duì)血液循環(huán)中HPV-DNA的存在與NSCLC患者臨床病理特征之間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。4.基于TCGA數(shù)據(jù)庫初步篩選NSCLC中差異性表達(dá)明顯的miRNAs。并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法分別檢測循環(huán)HPV-DNA陽性NSCLC患者、循環(huán)HPV-DNA陰性NSCLC患者及健康對(duì)照組血漿中差異性miRNAs的表達(dá)水平。5.通...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 非小細(xì)胞肺癌
        1.1.2 人乳頭瘤病毒與腫瘤
        1.1.3 循環(huán)HPV-DNA與腫瘤
        1.1.4 HPV的檢測方法
        1.1.5 循環(huán)微小RNAs(microRNAs,miRNAs)與腫瘤
    1.2 本研究的目的、內(nèi)容、技術(shù)路線和意義
        1.2.1 研究目的
        1.2.2 研究內(nèi)容
        1.2.3 技術(shù)路線圖
        1.2.4 研究意義
第二章 6對(duì)通用引物檢測不同型別人乳頭瘤病毒效果分析
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 通用引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 標(biāo)本收集
        2.2.2 HPV-DNA提取
        2.2.3 HPV-DNA檢測和分型
        2.2.4 通用引物合成及稀釋
        2.2.5 通用引物的PCR擴(kuò)增反應(yīng)
        2.2.6 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 HPV基因分型檢出情況
        2.3.2 6對(duì)通用引物檢測HPV-DNA的陽性率比較
        2.3.3 通用引物檢測不同型別HPV結(jié)果
    2.4 討論
第三章 血液循環(huán)中HPV-DNA的檢出率及與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系研究
    3.1 材料
        3.1.1 研究對(duì)象
        3.1.2 研究對(duì)象的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑及耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 采血與分離血漿
        3.2.2 血液標(biāo)本基因組DNA提取
        3.2.3 組織標(biāo)本基因組DNA提取
        3.2.4 血液和組織基因組DNA純度和濃度檢測
        3.2.5 HPV通用引物檢測
        3.2.6 HPV特異性巢氏引物鑒定
        3.2.7 HPV-DNA陽性標(biāo)本測序鑒定
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 NSCLC患者外周血中HPV-DNA的檢測結(jié)果
        3.3.2 HPV通用引物PCR產(chǎn)物測序比對(duì)結(jié)果
        3.3.3 血液循環(huán)中HPV16-DNA的存在與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系
        3.3.4 評(píng)估HPV16-DNA在外周血和肺腫瘤組織中存在的相關(guān)性
    3.4 討論
第四章 MicroRNAs作為循環(huán)HPV-DNA陽性NSCLC潛在生物標(biāo)志物的評(píng)估
    4.1 材料
        4.1.1 研究對(duì)象
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要試劑及耗材
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 數(shù)據(jù)庫分析
        4.2.2 血漿總RNA提取
        4.2.3 總RNA的濃度和純度測定
        4.2.4 MicroRNA的引物設(shè)計(jì)
        4.2.5 MicroRNA特異性的上游引物序列合成
        4.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR反應(yīng)(Poly加尾法)
        4.2.7 數(shù)據(jù)的處理和分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 基于TCGA篩選肺腺癌和肺鱗癌差異性表達(dá)明顯的miRNAs
        4.3.2 血漿中NSCLC差異性miRNAs的表達(dá)水平
        4.3.3 MiRNA單一和聯(lián)合檢測對(duì)鑒別循環(huán)HPV16-DNA(+)NSCLC患者和正常對(duì)照人群的能力比較
        4.3.4 MiRNA單一和聯(lián)合檢測區(qū)分循環(huán)HPV16-DNA(+)NSCLC和循環(huán)HPV16-DNA(-)NSCLC的能力比較
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、參加的課題及學(xué)術(shù)會(huì)議
    一、已發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
    二、參加的課題
    三、參加的學(xué)術(shù)會(huì)議



本文編號(hào)：3869704