上皮細胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule, EpCAM)是腫瘤靶向治療的熱門靶點,本研究開發(fā)了3株高特異性針對EpCAM的胞吞型納米抗體,為基于此靶點的免疫毒素研究提供基礎。研究前期對駱駝免疫EpCAM-Fc蛋白,構建了高質量的噬菌體展示納米抗體文庫,運用噬菌體展示技術通過3輪淘選成功獲得了17株互補決定區(qū)(complementarity determining region, CDR) 3序列不同的EpCAM納米抗體,原核純化獲得高純度的抗體蛋白后,流式細胞術確定其中7株具有細胞水平高結合活性。動物實驗經(jīng)復旦大學藥學院實驗動物倫理委員會(IACUC)批準。通過流式細胞術和激光共聚焦顯微術最終鑒定出3株具有較高胞吞活性的EpCAM納米抗體,且ForteBio測定具高親和力。本研究以期為EpCAM陽性腫瘤的靶向治療開辟新的途徑,并為其他靶點的納米抗體免疫毒素研究提供指導。

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【文章目錄】：
材料與方法
結果
    1 Ep CAM高質量噬菌體展示納米抗體文庫的構建及質量評估
    2噬菌體展示技術篩選特異性Ep CAM納米抗體
    3 PE-ELISA鑒定Ep CAM特異性陽性克隆
    4陽性克隆序列分析
    5 Ep CAM納米抗體原核表達及純化
    6候選Ep CAM納米抗體的細胞結合活性分析
    7候選Ep CAM納米抗體的腫瘤細胞胞吞活性檢測
    8激光共聚焦顯微術鑒定候選Ep CAM納米抗體胞吞活性
    9納米抗體親和力檢測
討論



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