上皮細(xì)胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule, EpCAM)是腫瘤靶向治療的熱門靶點(diǎn),本研究開發(fā)了3株高特異性針對(duì)EpCAM的胞吞型納米抗體,為基于此靶點(diǎn)的免疫毒素研究提供基礎(chǔ)。研究前期對(duì)駱駝免疫EpCAM-Fc蛋白,構(gòu)建了高質(zhì)量的噬菌體展示納米抗體文庫,運(yùn)用噬菌體展示技術(shù)通過3輪淘選成功獲得了17株互補(bǔ)決定區(qū)(complementarity determining region, CDR) 3序列不同的EpCAM納米抗體,原核純化獲得高純度的抗體蛋白后,流式細(xì)胞術(shù)確定其中7株具有細(xì)胞水平高結(jié)合活性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)(IACUC)批準(zhǔn)。通過流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微術(shù)最終鑒定出3株具有較高胞吞活性的EpCAM納米抗體,且ForteBio測(cè)定具高親和力。本研究以期為EpCAM陽性腫瘤的靶向治療開辟新的途徑,并為其他靶點(diǎn)的納米抗體免疫毒素研究提供指導(dǎo)。

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
材料與方法
結(jié)果
    1 Ep CAM高質(zhì)量噬菌體展示納米抗體文庫的構(gòu)建及質(zhì)量評(píng)估
    2噬菌體展示技術(shù)篩選特異性Ep CAM納米抗體
    3 PE-ELISA鑒定Ep CAM特異性陽性克隆
    4陽性克隆序列分析
    5 Ep CAM納米抗體原核表達(dá)及純化
    6候選Ep CAM納米抗體的細(xì)胞結(jié)合活性分析
    7候選Ep CAM納米抗體的腫瘤細(xì)胞胞吞活性檢測(cè)
    8激光共聚焦顯微術(shù)鑒定候選Ep CAM納米抗體胞吞活性
    9納米抗體親和力檢測(cè)
討論



本文編號(hào)：3852788