為了探究轉(zhuǎn)錄因子C-jun在細(xì)胞中的生理功能,以真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pFlag-c-jun為模板,首先設(shè)計(jì)了C-jun DNA結(jié)合功能域缺失突變體的點(diǎn)突變引物序列,構(gòu)建Flag-C-jun DNA結(jié)合功能域缺失突變體質(zhì)粒pFlag-c-jun^mut.通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染、藥物篩選等方法,獲得Flag-C-jun和Flag-C-jun^mut穩(wěn)定表達(dá)的HelaS細(xì)胞株,用蛋白印記跡交和細(xì)胞免疫熒光染色方法對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行驗(yàn)證.鑒定結(jié)果表明,本研究成功構(gòu)建了Flag-C-jun和Flag-C-jun^mut穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株,且表達(dá)均在細(xì)胞核內(nèi).

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 質(zhì)粒和細(xì)胞
        1.1.2 主要試劑和工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 Flag-C-jun DNA結(jié)合功能域缺失突變體質(zhì)粒的引物序列設(shè)計(jì)
        1.2.2 點(diǎn)突變
        1.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.2.4 穩(wěn)篩細(xì)胞株的構(gòu)建
        1.2.5 蛋白質(zhì)印跡雜交
        1.2.6 細(xì)胞免疫熒光染色
2 結(jié)果與分析
    2.1 真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒p Flag-c-jun的酶切鑒定
    2.2 構(gòu)建Flag-c-jun DNA結(jié)合功能域缺失突變體質(zhì)粒pFlag-c-junmut
    2.3 Flag-C-jun和Flag-C-junmut穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建
3 討論



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