胃癌(Gastric cancer,GC)作為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,在我國其發(fā)病率和病死率居高不下,對個人、社會及國家均已造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān),是迫在眉睫的公共衛(wèi)生問題。胃癌的發(fā)生是多種因素共同作用的結(jié)果,其中幽門螺桿菌(Heliobacter pylori,H.pylori)感染和遺傳因素的相互作用越來越受到矚目。在我國家族性胃癌僅占胃癌的1%-3%,其中90%以上為散發(fā)性胃癌,表現(xiàn)為較弱的遺傳易感性,這很可能與基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNP)有關(guān)。國內(nèi)外許多相關(guān)研究均證實炎性因子通路基因的多態(tài)性與胃癌前炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。micro RNA(mi RNA)可通過與炎性因子相關(guān)基因的3’非翻譯區(qū)(3’-UTR)靶向結(jié)合調(diào)控炎性基因表達(dá)。炎性基因3’-UTR的mi RNA靶序列中的SNP(mi R-SNP)可通過增強(qiáng)或減弱mi RNA對炎性基因的調(diào)控作用,誘導(dǎo)局部免疫反應(yīng),最終導(dǎo)致胃癌發(fā)生。目的探討IL23/Th17炎癥軸通路基因mi R-SNPs(IL17A rs3748067、IL17RA rs887796、IL17RA rs14...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
1 前言
2 材料與方法
    2.1 常用實驗試劑
    2.2 常用實驗器材
    2.3 所需實驗試劑的配制
    2.4 研究方法
        2.4.1 研究對象
        2.4.2 資料收集
        2.4.3 血樣采集
        2.4.4 全血基因組DNA提取
        2.4.5 SNP及micro RNA的選定
        2.4.6 基因分型方法
        2.4.7 SNPs引物設(shè)計和限制性內(nèi)切酶的選擇
        2.4.8 PCR擴(kuò)增和酶切反應(yīng)的條件及基因型判定
        2.4.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.4.10 RNA提取
            2.4.10.1 細(xì)胞收集
            2.4.10.2 RNA提取
        2.4.11 蛋白提取
        2.4.12 mi R-10a-3p及mi R-21 相對表達(dá)量的檢測
        2.4.13 IL17A及PTEN相對表達(dá)量的檢測
        2.4.14 Western-blot
        2.4.15 雙熒光素酶驗證實驗
        2.4.16 質(zhì)量控制
        2.4.17 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 胃癌病例組和對照組的一般特征
    3.2 基因型判定
        3.2.1 電泳圖譜結(jié)果
        3.2.2 基因分型結(jié)果的質(zhì)量控制
    3.3 四個位點(diǎn)與胃癌遺傳易感性關(guān)聯(lián)分析
    3.4 四個位點(diǎn)與胃癌遺傳易感性關(guān)聯(lián)的分層分析
    3.5 IL17RA基因rs1468488和rs887796位點(diǎn)的單體型分析
    3.6 突變位點(diǎn)數(shù)量分析
    3.7 基因-環(huán)境的交互作用分析
    3.8 細(xì)胞總RNA提取
    3.9 mi R-21 相對表達(dá)量的檢測
    3.10 PTEN相對表達(dá)量的檢測
    3.11 mi R-10a-3p相對表達(dá)量的檢測
    3.12 IL17A相對表達(dá)量的檢測
    3.13 Western-blot檢測SGC-7901 和BGC-823 細(xì)胞中PTEN蛋白的表達(dá)
    3.14 Western-blot檢測SGC-7901 和BGC-823 細(xì)胞中IL17A蛋白的表達(dá)
    3.15 hsa-mi R-10a-3p靶基因的雙熒光素酶驗證實驗
        3.15.1 RT-PCR檢測mi R-10a-3p本底表達(dá)情況
        3.15.2 mi R-10a-3p靶基因的雙熒光素酶驗證
4 討論
    4.1 IL23/Th17通路與胃癌
    4.2 IL23/Th17通路相關(guān)基因mi R-SNPs與胃癌的關(guān)系
    4.3 mi R-10a-3p靶基因IL17A的驗證
    4.4 本研究的優(yōu)缺點(diǎn)
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
綜述 新型非編碼RNA在腫瘤中作用的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個人簡歷及學(xué)術(shù)論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：3828556